siRNA介导的PD-L1沉默可增强人CD8~＋T淋巴细胞的体外杀伤作用

目的设计并筛选多条可高效特异性降低肿瘤细胞表面沉默程序性死亡受体-配体1(PD-L1)表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并研究其增强人CD8^+T淋巴细胞对人胶质瘤细胞(U87 MG)免疫杀伤作用。方法根据siRNA设计法则,并通过siDirect软件在线设计针对PD-L1基因的几种不同的siRNA序列,并运用BLAST进行同源性分析,最终确定候选序列;通过RT-qPCR、Western blot及流式细胞术实验,选出高效抑制PD-L1 mRNA及蛋白表达的siRNA序列;通过流式细胞术及CCK8检测PD-L1siRNA沉默U87 MG细胞的PD-L1后,人CD8^+T细胞对U87 MG的细胞凋亡及增殖的影响。结果设计了10条针对人PD-L1基因具有不同核苷酸序列的siRNA。采用RT-qPCR、Western blot及流式细胞术在mRNA及蛋白水平上检测siRNA的沉默效率,与对照组相比,siPD-L1-1、siPD-L1-2、siPD-L1-3、siPD-L1-4、siPD-L1-5及siPD-L1-8均显著降低U87 MG中PD-L1基因的表达(P<0.05),其中siPD-L1-3的沉默效率最高。与对照组相比,流式细胞术及CCK8结果显示,siPD-L1-3及siPD-L1-8均可显著增强人CD8^+T细胞对U87 MG细胞的杀伤作用,且该杀伤作用可显著抑制U87 MG细胞增殖(P<0.05)。结论本文设计并筛选了能有效沉默PD-L1基因表达的siPD-L1-1、siPD-L1-2、siPD-L1-3、siPD-L1-4、siPD-L1-5及siPD-L1-8的6条序列,其中siPD-L1-3和siPD-L1-8可高效增强T淋巴细胞对U87 MG细胞免疫杀伤作用,且siPD-L1-3的作用最为显著。本文设计的PD-L1siRNA分子可以用于设计和制备预防、治疗多种癌症的核酸药物。

京尼平苷通过AMPK/mTOR通路抑制帕金森模型氧化应激及细胞凋亡的机制研究

目的探究京尼平苷(geniposide,GP)通过AMP依赖的蛋白激酶[Adenosine 5′-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]/哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对1-甲基4-苯基-四氢吡啶离子(1-methyl-4-phenyl 1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPP+)诱导人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞获得的帕金森细胞模型细胞凋亡及氧化应激损伤的影响。方法以SH-SY5Y细胞为研究对象,按照处理方法将其分为Control组(正常培养)、MPP+组(在Control组基础上添加1 mmol/L MPP+)、GP组(在Control组基础上添加100μmol/L GP)、MPP++GP组(在MPP+组基础上添加100μmol/L GP)。使用丙二醛(malondialdehyde,MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的酶联免疫吸附测定试剂盒、流式细胞术及Western blot法检测各组细胞氧化应激损伤、细胞凋亡及AMPK、mTOR、LC3蛋白相关表达水平的差异。应用AMPK激活剂、mTOR抑制剂处理后,再次使用Western blot检测MPP+组及MPP++GP组细胞上述蛋白表达水平的变化。结果相较于Control组,MPP+组细胞凋亡率、LDH活性、MAD含量、AMPK磷酸化水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显增加,SOD活性及mTOR磷酸化水平明显降低(P<0.01)。相较与MPP+组,MPP++GP组细胞凋亡率、LDH活性、MAD含量、AMPK磷酸化水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显降低,SOD活性及mTOR磷酸化水平明显增加(P<0.01)。而添加AMPK激活剂或mTOR抑制剂后,MPP+组及MPP++GP组细胞AMPK磷酸化水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高,mTOR磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论GP部分通过调控AMPK/mTOR信号通路抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡、氧化应激损伤及自噬。

卡格列净相关不良反应病例报道的文献分析

目的:探讨卡格列净相关不良反应(ADR)的发生特点,为临床安全使用该药提供参考。方法:计算机检索CNKI、万方数据、VIP、PubMed、Sciencedirect、Web of Science等数据库,收集国内外卡格列净相关ADR的病例报道,对患者性别、年龄、原患疾病,卡格列净用药剂量、合并用药,不良反应发生时间、累及系统/器官及临床表现、治疗与转归等进行统计分析。结果:共收集文献32篇,病例34例。卡格列净相关ADR病例女性多于男性;以50岁以上(55.88%)多见;ADR多发生于用药后3个月内(67.64%);主要涉及代谢和营养障碍(58.82%)、泌尿生殖系统损害(17.65%)、消化系统损害(14.71%)等,其中以酮症酸中毒、急性肾损伤、泌尿生殖系统感染、急性胰腺炎较为严重。结论:临床使用卡格列净应加强用药监测,警惕ADR的发生,尤其对于老年、肾功能不全、泌尿生殖系统围手术期及出现急性代谢紊乱的患者。

血管内皮细胞生长因子受体2对原代人脐静脉内皮细胞作用研究

目的研究核糖核酸(RNA)干扰血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)对原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移及血管生成的影响。方法从新生儿脐带中提取原代HUVECs。将细胞分为3组:空白组、阴性对照组和实验组。空白组细胞不做任何处理,阴性对照组加入100 nmol·L^-1人与小鼠基因无同源性的小干扰RNA(siRNA),实验组加入100 nmol·L^-1针对人VEGFR2的siRNA。用liposome转染阴性对照组和实验组的siRNA至原代HUVECs中,以流式细胞术测定细胞的纯度;以实时荧光定量聚合酶链式反应检测siRNA的基因沉默效率;划痕法检测细胞迁移距离;小管形成法检测细胞血管生成。结果原代HUVECs纯度高达(99.96±1.28)%。空白组、阴性对照组和实验组的基因沉默效率分别为(0.00±3.25)%,(5.56±2.32)%和(82.41±5.29)%;空白组、阴性对照组和实验组的迁移愈合率分别为(92.72±2.54)%,(85.67±4.32)%和(28.21±4.57)%;空白组、阴性对照组和实验组的总小管分支长度分别为(4639.87±600.35),(4441.92±584.82)和(791.59±106.29)μm。上述指标:实验组与空白组和阴性对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论RNA干扰VEGFR2可抑制原代人脐静脉内皮细胞迁移及血管生成。