人ω1型干扰素基因在大肠杆菌中的表达

人ω型干扰素(huIFN-ω)是继α、β、γ后被发现的第4种干扰素型别。IFN-ω除具有与IFN-α相似的抗病毒功能外,在结构上还与动物滋养层干扰素高度相似,因此它既是人体滋养层蛋白启蒙研究的工具,又可能为人类生殖生物学研究提供直接信息。本文作者曾采用聚合酶链反应(PCR)技术首先在国内分离和克隆了IFN-ω1结构基因,这一初始克隆包括完整的成熟多肽及部分信号肽编码区。在此基础上。

一种α1型干扰素基因新变种的发现、鉴定、表达及表达产物的纯化

人α型干扰素(huIFN-α)基因家族包括IFN-αI和IFN-αII两个亚型家族.继1980年Nagata等,Maeda等首次建立人IFN-α基因无性繁殖系以来,迄今国外已从人基因组或cDNA中相继成功地分离克隆了IFN-α基因家族的20多个成员.但是,不同种族在干扰素基因方面是否存在差异,尚不清楚.因内仅侯云德等人于1982年从经病毒诱生的中国人脐血白细胞mRNA中经逆转录克隆到IFN-αI cDNA.本文利用DNA聚合酶链式反应(PCR)

中国人染色体上一种动物滋养层蛋白基因类似序列——人ω型干扰素基因的分离、克隆和鉴定

动物滋养层蛋白是一类由妊娠初期动物的滋养外胚层细胞分泌的作用于子宫内膜的抗黄体退化蛋白.其中,羊滋养层蛋白1(Ovine trophoblast protein-1,oTp-1)和牛滋养层蛋白1(Bovine trophoblast protein-1,bTP-1)基因的cDNA克隆已相继于1987年和1989年在Robert实验室得到分离和详尽的分析.引人注目的是,这两种蛋白及其基因的一级结构与近年来在多种动物体内发现的w1型干扰素(IFN·ω1,亦称αII1型干扰素,即IFN-αII1)

高校附属医院专科医师培训与临床医学专业学位研究生教育接轨的设想--以中山大学肿瘤医院肿瘤学科为例

结合中山大学附属肿瘤医院在国内率先试行了三年的肿瘤学专科医师培训实践情况及存在问题,对我国医疗服务市场对临床医学人才的需求进行分析,提出了在高校附属医院中把专科医师培训与临床医学专业学位研究生教育两项工作试行接轨、率先在肿瘤学科进行试点并逐步探索推广的专科医师培训工作思路;同时借鉴美国成熟的医师培训和考试制度,结合我国国情,对我国医学教育体系特别是毕业后医学教育提出了三阶梯递进培训的设想。

人α1/158Ⅴ型(α1c型)干扰素基因在大肠杆菌中的表达及其产物的初步纯化

采用DNA聚合酶链反应(PCR)技术,将本实验室从中国人胎肝细胞染色体DNA中发现和分离的IFN-α1/158V基因的原始克隆,改造成适于进行非融合蛋白原核表达的结构形式,并在大肠杆菌中获得高效表达。测得重组IFN-α1/158V的抗病毒活性为1.9×10~7单位/升菌液。随后又采用以单克隆抗体亲和层析为主的纯化流程对表达产物进行初步纯化,获得了在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现单一条带的纯化产物。

基础医学实验教学中心的建设与发展

阐述了中山大学医学国家级实验教学示范中心的实验课程体系特色,构建一体化、多层次、开放式综合性基础医学实验课程教学体系。分析归纳了中心建设管理经验。

我国医药卫生人才培养战略研究

本文在基于数据与证据综合分析医药卫生人才培养总体现状的基础上,充分借鉴国际经验并考虑我国国情,以建立人才培养供需平衡机制和提高人才培养质量为重点内容开展研究。研究提出如下政策建议:一是继续提升战略定位,在国家层面建立宏观管理协调机制;二是科学规划招生、改革课程体系,分阶段逐步实现医学教育精英化和均质化;三是逐步取消临床医学硕士和博士招生统考制度和学位论文制度,将规培与学位并轨,并推进医生由单位人过渡为行业人;四是加快人事薪酬制度和评价制度改革试点与实施;五是构建以大健康为中心的公共卫生人才培养体系;六是积极推动以"师承教育+学位教育"为特色的中医药人才培养体系;七是建立国家健康研究基金。

鼻咽癌组织中EB病毒LMP1与Fascin及磷酸化Stat3表达的相关性

背景与目的:EB病毒潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)是一重要的癌基因。Fascin蛋白是一种能与F-肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白,参与细胞的迁移、粘附等功能。磷酸化的信号转导及转录激活因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,pStat3)是信号转导及转录激活因子(STATs)家族中与人类肿瘤发生发展密切相关的一种蛋白。本实验通过检测鼻咽癌及淋巴结转移癌中LMP1、Fascin和pStat3的表达,以探讨这些指标在鼻咽癌发生发展中的意义。方法:采用原位杂交和免疫组化法分别检测43例鼻咽癌组织(21例伴淋巴结转移;22例未伴淋巴结转移)及相应的21例癌转移淋巴结中EB病毒编码的非多聚腺苷酸RNA(EBV-encoded small RNA,EBER)的表达及LMP1、Fascin、pStat3、p53、Ki-67和Bcl-2的表达,并采用统计学分析上述各蛋白表达水平之间的相关性。采用Western blot检测转染LMP1表达质粒对鼻咽癌细胞中Fascin和pStat3表达的影响。结果:43例鼻咽癌组织及21例癌转移淋巴结中,EBER均呈阳性表达;43例鼻咽癌组织中,LMP1、Fascin、pStat3、p53、Ki-67、Bcl-2的阳性表达率分别为69.8%(30/43)、93.0%(40/43)、72.1%(31/43)、90.7%(39/43)、88.4%(38/43)、88.4%(38/43),LMP1的表达与其余5种指标的表达之间均具有明显的正相关(P<0.05)。21例鼻咽癌淋巴结转移组织中LMP1表达率为46.7%(10/21)。LMP1表达可明显提高鼻咽癌细胞中Fascin和pStat3的表达水平。结论:鼻咽癌组织及淋巴结转移癌组织中LMP1均有较高的表达率。鼻咽癌组织中LMP1表达与Fascin和pStat3表达之间均存在正相关。LMP1表达可明显上调鼻咽癌细胞中Fascin和pStat3的表达水平。LMP1的表达与癌细胞的增殖指数密切相关。

狂犬病毒aG株糖蛋白膜外区基因克隆和序列分析

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术获得了狂犬病毒ａｃ株（ＲＶａＧ）糖蛋白膜外区基因克隆并进行了序列分析。测出其核苷酸序列与其他株相应区序列的同源性在９０．１２％（ＣＶＳ／ａＧ）到９３．０３％（ＳＡＤＢ１９／ａＧ）之间，推导氨基酸序列的同源性在９１．４１％（ＣＶＳ／ａＧ）到９３％，２３％（ＰＶ／ａＧ）之间，经分析发现成熟肽推导氨基酸第１８２位和１８３位的替代，导致了乙酰胆碱受体（ＡＣｈＲ）结合序列的构象改变，可能是造成ＲＶａＧ毒力减弱的分子基础。

广州地区阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测及分析

目的了解广州地区临床分离的阴沟肠杆菌的耐药现状,以及质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因qnrA,qnrB,qnrC,qnrS,qepA,aac(6')-Ib-cr的流行情况。方法纸片扩散法进行药敏试验;PCR法扩增PMQR基因并将阳性产物测序分析;分析PMQR基因在环丙沙星(CIP)敏感及耐药株中的分布差异。结果 226株阴沟肠杆菌耐药率75%的药物有5种,其中CIP耐药率62.8%。63株(27.4%)检出PMQR基因,qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr的检出率分别3.1%、7.5%、4.4%和15.0%,有5株存在两种PMQR基因,未检出qnrC和qepA基因。qnrA、qnrB、qnrS及aac(6')-Ib-cr基因在CIP敏感株与耐药株中的分布经χ2检验,χ2分别为2.79,10.87,4.63和23.55,P分别>0.05、<0.01、<0.05及<0.01。结论本地区阴沟肠杆菌呈现多重耐药,qnrA、qnrB、qnrS及aac(6')-Ib-cr基因在广州地区均有流行,且这几种基因与环丙沙星等药物的耐药率有一定相关性。

脑啡肽-αⅠ干扰素的镇痛作用和抗肿瘤作用

从大肠杆菌工程菌中纯化脑啡肽 αⅠ干扰素融合蛋白 ,测定其在小鼠脑内的镇痛作用 ,阿片受体结合功能及对肿瘤细胞生长抑制和体内抗肿瘤作用 .结果显示 ,与αⅠ干扰素母体相比 ,融合蛋白具有较强的镇痛作用 ,镇痛作用可为腹腔注射阿片受体拮抗剂Naloxone和Naltrindole反转 ,融合蛋白可竞争3H标记σ型阿片受体配基DPDPE与膜受体结合 .融合蛋白的肿瘤细胞生长抑制和体内抗肿瘤作用也高于母体分子 ,说明脑啡肽和αⅠ干扰素的融合蛋白实现并增强了脑啡肽

一种αⅠ型干扰素基因新变种的发现和鉴定

本文从一名中国汉族正常人胎肝细胞染色体DNA中,应用PCR方法两次获得长为520 bp的人α型干扰素基因,核苷酸序列测定表明,两次扩增产物的DNA序列完全相同,与过去分离克隆的IFN-αI和IFN-αD基因相比较,其第410位和第541位核苷酸分别为C和G,由此推测它编码的IFN成熟肽第114位和第158位氨基酸应为Ala和Val,其余位点则与IFN-αD和IFN-αI完全相同.我们建议将IFN—αD,IFN—αI和我们分离的IFN-αI/158V基因分别命名为IFN-αIa,IFN-αIb和IFN-alc基因.

脑啡肽-干扰素融合蛋白具有较高的抑制肿瘤细胞生长活性

本文根据有些肿瘤细胞表面富含δ型阿片受体的事实，化学合成了脑啡肽（Ｅｎｋ）·Ｎ端５肽编码区，将其通过一连接３肽编码区与人α１型干扰素（ＩＦＮ）基因相连，并在大肠杆菌中表达了这一融合蛋白。以体外培养的人结肠腺癌细胞和多形胶质瘤细胞为模型，采用＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入法证明该融合蛋白抑制肿瘤细胞生长的活性显著高于单纯的ＩＦＮ分子。通过Ｎａｌｏｘｏｎｅ竞争阻断试验证明。

中国27省（市、自治区）2009-2013年门诊腹泻病例诺如病毒流行特征分析

目的 了解我国门诊腹泻患者中诺如病毒的流行特征。方法 在国内27个省（市、自治区）173家医院的门/急诊中开展腹泻监测,收集腹泻病例临床和流行病学资料,同时采集病例粪便标本,送58家网络实验室采用RT-PCR检测诺如病毒,并分析2009－2013年不同地区、人群以及时间的诺如病毒检出率。结果 在34 031名腹泻监测病例中,有11.6%的病例检出诺如病毒。其中6～23月龄儿童和〉45岁人群的检出率最高,分别为13.7%和12.4%。一年中以秋、冬季检出率较高;中温带和暖温带地区,诺如病毒在冬季检出率最高,分别为10.7%和11.6%;而亚热带地区,以秋季检出率最高（14.3%）。诺如病毒检出的主要型别为GⅡ组（89.9%）。结论 诺如病毒对我国各年龄组人群均有不同程度的影响,尤其在儿童和中老年门诊腹泻病例中较为常见,并呈现明显的季节性流行特征,且不同气候带地区的流行高峰存在差异。

中国狂犬病毒疫苗株（5aG株）糖蛋白基因的克隆与序列分析

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法从中国狂犬疫苗株（５ａＧ株）病毒感染细胞中扩增得到该株病毒糖蛋白基因，并进行序列测定。结果表明该基因开放阅读框架全长１５７５ｂｐ，编码５０５个氨基酸的成熟糖蛋白及Ｎ－端１９个氨基酸的信号肽，该基因与其他株系相应基因比较，核酸序列同源性为８８％～９１％，氨基酸序列同源性为８７％～９０％，其中膜外区同源性高于膜内区及跨膜区同源性。糖蛋白中重要功能区段嗜乙酰胆碱受体区段、抗原位点３等在个株系间高度保守。

转内皮抑素基因通过抑制血管生成抑制甲状腺滤泡状癌生长的研究

目的 了解甲状腺滤泡状癌细胞中导入内皮抑素 (Endostatin ,ES)基因对体内外生长的影响 ,并探讨其作用机制。方法 用逆转录病毒载体将ES基因导入FTC133 细胞中 ,采用RT PCR和ELISA检测导入基因在肿瘤细胞的表达。观察肿瘤在裸鼠模型中的生长状况。用抗CD31抗体对肿瘤切片进行免疫组织化学染色检测微血管 ,计算微血管密度 (microvesseldensity ,MVD)。检测血清中ES和VEGF浓度。 结果 顺利将ES基因导入到FTC13 3 中得到稳定表达ES的肿瘤细胞系FTC133 rvEndo。后者在体外增值速度与母系相似。而在裸鼠模型中 ,其肿瘤生长速度明显慢于母系。种植 33天后 ,FTC133 组肿瘤大小为 ( 30 0 2± 44 1)mm3,FTC13 3 rvEndo组为 ( 5 5 7± 15 2 )mm3,两组间差异有显著性 (P =0 0 0 0 2 )。免疫组化染色表明FTC133 rvEndo肿瘤中血管内皮细胞数明显减少 ,MVD为 34 86± 10 6 8;而对照组为 6 4 71± 17 0 5 ,差异有显著性 (P =0 0 0 2 0 )。带瘤鼠血清人VEGF浓度FTC133 rvEndo组为 ( 8 99± 0 6 5 )ng/L ,明显低于对照组 ( 2 9 34± 5 5 5 )ng/L( P =0 0 0 98)。结论 利用逆转录病毒载体可将ES基因转入甲状腺滤泡状癌细胞系中 ,该基因的导入通过抑制血管生成使肿瘤体内生长速度减慢。其机制可能与抑制肿瘤细胞?

2010年广州市甲型H1N1流感病毒分离株HA基因变异分析

目的比较2010年广州市分离到的甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因和2009年中国大陆甲型H1N1流感病毒HA基因的变异情况,为甲型H1N1流感的监测和防控提供理论依据。方法收集2010年广州市有发热和呼吸道症状病人的咽拭子标本,用H1N1流感特异性引物进行PCR检测,扩增分离到的H1N1病毒HA片段,测序后与2009年的H1N1毒株进行比对和分析,并用生物信息学方法对抗原位点和糖基化位点进行分析。结果共收集到426份标本,甲型流感阳性211份,其中H1N1流感4株,与2009年分离的甲型H1N1流感相比,有12个氨基酸碱基位点发生了有意义突变,其中6个位点位于抗原位点上;4株毒株HA基因145位氨基酸都发生了变异;其中2株毒株在第180位氨基酸位点的抗原位点发生了变异。进化分析表明4株毒株与2009年中国大陆分离的8株毒株进化关系较远。结论 2010年广州市甲型H1N1毒株与2009年相比发生了较大变异。HA基因145位和180位氨基酸位点变异对H1N1毒株抗原变异有重要意义。本文分离的A/Guangdong/ZS03/2010(H1N1)和A/Guangdong/ZS01/2010(H1N1)毒株可能已经发生了抗原性漂移。

整合医学背景下的医学教育改革和实践

随着现代医学走上专业细化和专科分化的发展道路,以“分”为主的发展模式促进了医学知识的爆炸式增长.与此同时,基于医学知识的诊疗实践也在一定程度上呈现出碎片化倾向,甚至逐渐远离“以人为本”的核心价值.在这一背景下,现代医学具有如何重新整合的模式转变需求,并由此对医学人才培养提出加强整体观和整合诊疗能力的要求.一批医学院校对整合理念下的医学教育模式进行探索,积极策划和推动教学改革,大力推进教学领域的学科整合或融合.目前,医学课程体系设计和教学方法创新等方面已开始渗透整合医学理念,未来还需为适应整合医学模式发展而深化教改内涵.

滤泡状甲状腺肿瘤微血管密度检测及其临床意义的探讨

目的检测甲状腺滤泡状肿瘤微血管密度 (microvesseldensity ,MVD) ,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化染色检测 4 0例甲状腺滤泡状腺癌 (follicularthyroidcarcinoma ,FTC)和 2 0例滤泡状腺瘤 (follicularadenoma,FA) ,计算MVD ,分析临床资料 ,进行t检验和 χ2 检验。结果FTC组MVD为 (2 2 8± 91)个 ,FA组MVD为 (15 6± 73)个。两组间差异有显著意义 (t=2 76 3,P <0 0 5 )。FTC组中 ,MVD与肿瘤长径和有无甲状腺外浸润有关 ,而与年龄、性别、颈淋巴结转移和预后无关。结论FTC的MVD高于FA。FTC瘤体的MVD与肿瘤长径和有无甲状腺外浸润有关。