抗小鼠endolgin单克隆抗体杂交瘤的建立和初步应用(英文)

目的建立能够分泌特异性抗小鼠endoglin的单克隆抗体杂交瘤细胞系,为深入研究endoglin的新功能、诊断和治疗肿瘤血管生成提供物质基础。方法利用小鼠endoglin胞外段重组蛋白作为抗原免疫大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠endoglin单克隆抗体的杂交瘤系。利用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹方法明确筛选的单克隆抗体的特异性,免疫组化和免疫荧光初步判定获得的单克隆抗体是否可以应用于临床诊断。结果通过对90多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠endoglin的单克隆抗体杂交瘤细胞系,分泌的单克隆抗体亚型为IgG1,轻链亚型为kappa。免疫印迹显示该研究获得的单克隆抗体可以特异识别小鼠endoglin重组蛋白,该单克隆抗体可以结合实体肿瘤组织微血管上的特异抗原并将微血管有效染色。结论本研究所获得的抗小鼠endoglin单克隆抗体将有助于深入研究endoglin的新功能,为肿瘤血管生成的诊断和治疗提供了物质保障。

非霍奇金淋巴瘤组织中PTEN和p27蛋白的表达

目的 :研究非霍奇金淋巴瘤组织中PTEN和p2 7蛋白的表达作用。方法 :利用免疫组织化学技术检测77例淋巴结非霍奇金淋巴瘤 (non Hodgkin’slymphoma ,NHL)中PTEN和p2 7蛋白的表达。结果 :在NHL中 ,PTEN和p2 7蛋白的阳性率分别为 90 .9% (70 / 77)和 5 1 .9% (4 0 / 77) ;PTEN和p2 7蛋白的阳性表达强度之间呈明显正相关 (r=0 .6 84 1 ,P <0 .0 1 ) ;低度恶性组PTEN和p2 7蛋白的阳性表达强度均明显高于高度恶性组 (P <0 .0 1 ) ;B细胞性NHL中PTEN和p2 7蛋白的阳性表达强度与T细胞性NHL比较无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :在NHL的进展过程中 ,PTEN蛋白表达的缺失和降低可能导致p2 7蛋白表达减少 ,使其不能有效发挥细胞周期负调控因子的抑瘤作用 。

骨肉瘤VEGF和nm23表达及MV密度与肺转移的关系

目的:研究骨肉瘤VEGF和nm23表达及MV密度与肺转移的关系。方法:用免疫组织化学法检测40例骨肉瘤组织中VEGF、nm23的表达和MV密度。结果:骨肉瘤中VEGF的阳性率为65%26/40,其中有肺转移者的阳性率(87.5%,14/16)明显高于无肺转移者(50%,12/24),阳性信号主要位于细胞胞浆,其阳性信号强度与骨肉瘤的组织学类型无关,但与是否有肺转移显著相关(P<0.01);nm23阳性信号呈浆型和/或核浆型,阳性表达率为85%(34/40),其中有肺转移的病例阳性率为81.25%(13/16),无肺转移病例的阳性率为87.5%(21/24),无显著性差异(P>0.05);统计学分析显示骨肉瘤中VEGF表达强度与MV密度呈明显正相关(r=0.7256);有肺转移患者的骨肉瘤组织中MV密度明显高于无肺转移者(P<0.01)。结论:本文结果提示在骨肉瘤的发生发展中VEGF是促进MV生成的主要细胞因子;VEGF可能是通过促进MV生成而增加恶性肿瘤细胞侵入血管,导致早期血道转移,但nm23的表达水平与骨肉瘤的转移发生无关,检测VEGF表达与MV密度值可作为判断骨肿瘤预后的重要指标。

cyclinD1、bcl-2和fas蛋白与霍奇金淋巴瘤R-S/H细胞凋亡及增殖的关系

目的 :探讨cyclinD1蛋白与霍奇金淋巴瘤 (HL)R S/H细胞凋亡及增殖的关系。 方法 :利用免疫组化检测了 40例HL中R S/H细胞bcl 2、fas及cyclinD1的表达。结果 :bcl 2和fas蛋白阳性信号在R S/H细胞中主要呈浆 膜型。在HL 4种亚型 (LP、NS、MC和LD)中bcl 2阳性细胞密度逐渐增高 (P <0 0 5 ) ,而fas阳性细胞密度依次降低 (P <0 0 1) ,并呈明显负相关(r =- 0 5 6 90 )。在 40例HL中cyclinD1阳性表达率为 70 % (2 8/ 40 ) ,阳性信号主要位于核内 ;cyclinD1阳性病例中的bcl 2阳性细胞密度显著高于fas阳性细胞密度 (P <0 0 1) ,而在cyclinD1阴性病例中两者差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;在cyclinD1阳性和阴性病例中 ,bcl 2和fas阳性细胞密度均呈明显负相关 (分别r =- 0 6 131,r =- 0 7310 )。结论 :cyclinD1可能在HLR S/H细胞增殖中与bcl 2蛋白具有协同作用 ,并与fas蛋白一起调控R S/H细胞的增生与凋亡 ;bcl 2和fas的表达与HL不同组织学亚型及预后有关。

霍奇金病RS/H细胞bcl-2,fas和cyclin D1蛋白表达及其相关关系

该文利用免疫组化检测了４０ 例霍奇金病（ ＨＤ） 中ＲＳ／ Ｈ 细胞ｂｃｌ－ ２ 、ｆａｓ 及ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 的表达，并对其相关关系进行了研究。结果显示：ｂｃｌ － ２ 和ｆａｓ 蛋白阳性信号在ＲＳ／ Ｈ 细胞中主要呈浆膜型。在ＨＤ 四种亚型ＬＰ，ＮＳ，ＭＣ 和ＬＤ 中ｂｃｌ－ ２ 阳性细胞密度逐渐增高（ Ｐ＜ ０ ．０５） ，而ｆａｓ 阳性细胞密度依次降低（ Ｐ＜ ０ ．０５） ；并呈明显负相关（ｒ ＝ － ０ ．５６９０） 。在４０ 例ＨＤ 中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 阳性表达率为７０ ％ （２８／４０） ，阳性信号主要位于核内；ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 阳性病例中的ｂｃｌ－ ２ 阳性细胞密度显著高于ｆａｓ 阳性细胞密度（ Ｐ＜ ０ ．０１） ，而ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 阴性病例中两者无显著差异（ Ｐ＜０ ．０５） ；在ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 阳性和阴性病例中，ｂｃｌ － ２ 和ｆａｓ 阳性细胞密度均呈明显负相关（ 分别ｒ ＝ － ０ ．６１３１ ，ｒ ＝－ ０ ．７３１０） 。提示抗凋亡基因ｂｃｌ－ ２ 和促凋亡基因ｆａｓ 的表达与ＨＤ 不同组织学亚型及预后有关；ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 蛋白可能具有促进ｂｃｌ － ２ 的表达和／ 或抑制ｆａｓ 表达作用，从而导致ＲＳ／ Ｈ

霍奇金淋巴瘤细胞STAT3的活化对bcl-2蛋白表达的调控作用

【目的】探讨霍奇金淋巴瘤(HL) 细胞信号转导物与转录激活剂3(STAT3) 的活化对bcl2 蛋白表达的调控作用。【方法】采用SP免疫组织化学方法检测了40 例不同亚型HL 之RS/H 细胞及13 例反应性增生淋巴结(RH) 的STAT3 和抗凋亡基因蛋白bcl2 的表达。【结果】STAT3 及bcl2 蛋白在HL 不同亚型的RS/H 细胞中均呈过度表达( 阳性率分别为65 % 和67 .5 % ) ,且两者的阳性率呈明显的正相关( P < 0 .05) 。【结论】STAT3 的活化可能通过介导抗凋亡基因bcl2 的过度表达而使RS/H 细胞呈持续性增殖,并在HL 之RS/H 细胞恶性转化及演进中起重要作用。

非霍奇金淋巴瘤组织中PTEN/MMAC_1/TEP_1和MAPK的表达及其相互关系

目的:研究非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma,NHL)中PTEN/MMAC1/TEP1和p42/44MAPK的表达及其相互关系。方法:利用免疫组织化学技术检测77例淋巴结非霍奇金淋巴瘤中PTEN蛋白和p42/44MAPK的表达。结果:在NHL中,PTEN蛋白和p42/44MAPK的阳性率分别为91%(70/77)和84.4%(65/77),PTEN蛋白阴性表达率为9.1%(7/77);PTEN蛋白和p42/44MAPK的阳性表达强度之间呈明显负相关(r=-0.6452);低度恶性组PTEN蛋白的阳性表达强度明显高于高度恶性组(P<0.01);而p42/44MAPK则为高度恶性组的阳性表达强度明显高于低度恶性组(P<0.01);B细胞性NHL中PTEN蛋白和p42/44MAPK的阳性表达强度与T细胞性NHL比较无明显差异(P>0.05)。结论:提示在NHL的发生及进展过程中,可能是由于PTEN蛋白表达降低或缺失,不能有效抑制由致瘤因子异常激活的Ras/Raf/MAPK信号转导通路,使淋巴细胞异常增殖、分化和恶性转化。

胃MALT淋巴瘤Bcl-2和fas蛋白的表达及其临床预后的关系

目的:胃粘膜相关淋巴组织型(MALT)淋巴瘤Bcl-2和fas蛋白的表达及其与临床预后的关系。方法:利用免疫组织化学检测39例胃MALT淋巴瘤Bcl-2及fas蛋白的表达。结果:在低度恶性组Bcl-2蛋白的阳性表达率(83.3%,25/30)和阳性信号强度明显高于高度恶性组(33.3%,3/9)(P<0.01);而低度恶性组fas蛋白的阳性率(26.7%,8/30)和阳性信号强度明显低于高度恶性组(88.9%,8/9)(P<0.01);在低度恶性和高度恶性胃MALT淋巴瘤中Bcl-2和fas蛋白的阳性信号强度均呈明显的负相关(r=-0.6825和-0.6934,P<0.01)。有肌层及浆膜层侵犯者Bcl-2和fas蛋白表达分别明显低于和高于局限于粘膜下层者(P<0.05),但肌层与浆膜层浸润,Bcl-2和fas蛋白表达均无显著性差异(P>0.05);有淋巴结转移的Bcl-2蛋白表达明显低于无淋巴结转移者,而fas蛋白表达则相反(P<0.01)。结论:Bcl-2和fas蛋白参与胃MALT淋巴瘤的恶性转化,与其浸润、进展及其恶性生物学行为有关,检测两者可能作为判断该肿瘤生物学行为和临床预后的指标之一。

骨肉瘤中细胞增殖和细胞凋亡的关系及临床意义

目的:探讨骨肉瘤组织中细胞凋亡与细胞增殖的关系及临床意义。方法:采用原位末端转移酶法和免疫组织化学技术分别检测骨肉瘤和良性骨瘤中凋亡细胞密度和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:4种亚型骨肉瘤组织中凋亡细胞密度均明显低于良性骨肿瘤组织,而PCNA阳性细胞密度明显高于良性骨肿瘤组织;在骨肉瘤4种亚型中凋亡细胞密度和PCNA阳性细胞密度呈明显负相关,而在良性骨肿瘤中两者呈线性正相关。结论:在骨肉瘤的发生中可能普遍存在细胞凋亡机制的紊乱可能以低凋亡高增殖表现为多,并认为细胞凋亡检测尚难以作为一种独立的预后判断指标。

STAT3磷酸化对胃MALT淋巴瘤细胞凋亡的调控作用

目的 探讨STAT3磷酸化对胃MALT淋巴瘤细胞凋亡的调控作用。方法 采用SP免疫组织化学方法检测了 45例胃MALT淋巴瘤细胞及 13例滤泡型淋巴结反应性增生病 (RH)的p -STAT3、促凋亡基因 /蛋白fas和抗凋亡基因 /蛋白bcl-2的表达。结果 p -STAT3、fas及bcl-2蛋白在胃MALT淋巴瘤细胞中均呈过度表达 (阳性率分别为 64 .4%、60 .0 %和 66.7% ) ;低度恶性组的fas蛋白阳性信号强度明显低于高度恶性组 (P <0 .0 5 ) ,而bcl-2蛋白则明显高于高度恶性组 (P <0 .0 5 ) ,在低度与高度恶性组间的p -STAT3阳性表达强度无明显差异 (P >0 .0 5 ) ;p -STAT3与fas蛋白在胃MALT淋巴瘤细胞中的阳性表达呈明显的负相关 (r=-0 .6791,P <0 .0 5 ) ,而与bcl -2蛋白的阳性表达则呈明显的正相关 (r=0 .72 3 1,P <0 .0 5 )。结论 STAT3活化可能通过抑制细胞凋亡导致胃MALT淋巴瘤细胞的恶性转化及高增殖性 。

虾青素生产及其生物合成途径的研究进展

虾青素（astaxanthin）是从海洋动物（包括虾、蟹等甲壳类以及鲑鳟鱼类）中发现的一种红色类胡萝卜素。纯虾青素单质为暗红棕色粉末，但在体内虾青素可与蛋白质结合而呈青、蓝色。虾青素是一种氧化型类胡萝卜素，是类胡萝卜素生物合成途径中的终产物，化学名为3，3’-二羟基-4，4’～二酮基-β，β-胡萝卜素（3，3＇-dihydroxy-4，4＇-dione—p，p—taro—tene），分子式为C40H5204，结构式见图1[1-3].

霍奇金淋巴瘤MAPK和Stat3磷酸化及cyclin D1蛋白表达的意义

背景与目的:MAPK和Stat3信号级联是与细胞增殖和恶性转化密切相关的两条主要的细胞信号传导通路,MAPK和Stat3以磷酸化的方式激活。霍奇金淋巴瘤的瘤细胞产生的多种细胞因子可通过MAPK和Stat3信号通路介导引起其生物学效应。本文拟研究霍奇金淋巴瘤MAPK和Stat3磷酸化及cyclinD1蛋白表达的意义。方法:利用SP免疫组织化学方法检测了45例不同类型霍奇金淋巴瘤MAPK和Stat3磷酸化及cyclinD1蛋白的表达。结果:在45例霍奇金淋巴瘤中p-MAPK、p-Stat3和cyclinD1蛋白的阳性表达率分别为73.3%(33/45)、64.4%(29/45)和68.9%(31/45);在霍奇金淋巴瘤四种亚型中,p-MAPK和cyclinD1蛋白阳性表达水平依次增强(P<0.05),而p-Stat3表达强度无统计学意义(P>0.05);p-MAPK和cyclinD1蛋白的表达呈明显正相关(rs=0.7254,P<0.01),而p-Stat3与cyclinD1蛋白表达的相关性无统计学意义(rs=0.2197,P>0.05)。结论:提示MAPK活化在HL的发生与发展中,可能主要通过p-MAPK诱导cyclinD1过度表达,从而促使RS/H细胞维持高增殖状态,并导致其恶性表型增高。

中药“拮新康”对小鼠移植性白血病模型的作用研究

目的探讨拮新康对小鼠移植白血病模型的作用,为临床应用提供实验依据。方法采用急性粒、单核细胞白血病细胞株(WEHI-3B)接种于BALB/C小鼠体内建立移植性白血病模型。然后给小鼠移植性白血病模型采用拮新康不同剂量及长春新碱80进行试验,观察小鼠骨髓未分化细胞、脾脏的重量、脾脏未分化细胞浸润情况。结果拮新康不同剂量实验组小鼠骨髓中未分化细胞较对照组明显减少(P<0.01)。拮新康与长春新碱80联合作用较长春新碱80、拮新康单药组骨髓中未分化细胞明显减少(P<0.01)。拮新康不同剂量实验组小鼠脾重量明显低于模型对照组(P<0.01)脾脏病理所见未分化细胞浸润较对照组减少。结论拮新康对小鼠移植性白血病模型有一定的抑制作用,尤其是与长春新碱80联合抗白血病作用更加增强。

HIF-1α在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其与肿瘤细胞凋亡和增殖的关系

目的:研究HIF-1α在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其与肿瘤细胞凋亡和增殖的关系。方法:利用免疫组织化学检测了77例胃MALT淋巴瘤bcl-2及fas蛋白的表达。结果:在NHL中,HIF-1α中呈高表达,阳性率为89.6%,高度恶性组的阳性表达强度明显高于低度恶性组(P<0.01),但B细胞型与T细胞型之间比较无明显差异(P>0.05);Caspase-3阳性表达率为(79.2%),低度恶性组的阳性信号强度明显低于高度恶性组(P<0.05);PCNA的阳性率94.8%,高度恶性组的阳性表达强度明显高于低度恶性组(P<0.01);在B细胞型和T细胞型NHL中,低度恶性和高度恶性组中HIF-1α与Caspase-3及PC-NA的阳性信号强度均呈明显的正相关关系。结论:在NHL的发生发展过程中,HIF-1α通过调控肿瘤细胞的高增殖和高凋亡发挥作用,并在其恶性转化中可能起着重要作用。因此,检测HIF-1α有可能作为判断该肿瘤的生物学行为和临床预后的指标之一。

FITC标记葡聚糖粘附定量测定肿瘤组织血管密度

目的:测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标。方法:用endolgin疫苗免疫小鼠后,在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型,2周后将FITC-dextran注射入小鼠体内,然后手术完整摘取肿瘤组织和藻酸盐颗粒,取部分肿瘤组织进行免疫组化检测血管密度的同时,将其他组织和藻酸盐颗粒匀桨并离心,取上清检测荧光强度,分析二者之间是否存在直线相关关系。结果:免疫组化和肉眼观察显示2种测定方法均有明显的血管生成效应,用FITC-dextran粘附测定肿瘤组织血管相对密度和藻酸盐包被试验均能较好地量化测定抗血管生成效果,直线相关分析表示二者的疫苗免疫实验组FITC-dextran的测定值之间呈明显的正性相关关系(r=0.962,P<0.01)。结论:和藻酸盐包被试验相比,FITC-dextran测定肿瘤组织血管相对密度是一种简单有效的量化测定肿瘤组织血管生成水平的方法。

Fas、Bcl-2、C-myc蛋白在骨肉瘤和良性骨肿瘤中的表达及意义

目的研究F as、B cl-2、C-m yc蛋白在骨肉瘤和良性骨肿瘤中的表达。方法采用SABC免疫组化方法检测42例骨肉瘤和14例良性骨肿瘤中F as、B cl-2、C-m yc蛋白表达。结果42例骨肉瘤中F as、B cl-2、C-m yc蛋白阳性表达率分别为16.7%、71.4%和80.9%,14例良性骨肿瘤中F as、B cl-2、C-m yc蛋白阳性表达率分别为51.7%、35.7%和42.9%,骨肉瘤组织和良性骨肿瘤组织F as、B cl-2、C-m yc蛋白表达差异有显著性(P<0.05)。结论在骨肉瘤中F as蛋白的低表达和B cl-2、C-m yc蛋白的高表达可能共同参与骨肉瘤的发生。

夏侧金盏花虾青素合成相关基因Adketo和Adkc的表达

目的:研究夏侧金盏花中虾青素合成相关基因Adketo和Adkc在不同组织部位的表达,从而从基因表达角度探讨这两个基因与虾青素合成的关系。方法:根据GenBank上的Adketo和Adkc基因以及内参Adactin基因的序列设计荧光定量PCR引物,通过Real-time PCR分析Adketo和Adkc基因的组织部位表达情况。结果:Adketo和Adkc基因均只在花中大量表达(3%),其余组织内只能检测到少量或微量表达(10-5～10-3)。结论:虾青素主要在夏侧金盏花的花中合成具有正相关关系,为证明Adketo和Adkc是虾青素合成相关基因添加了又一证据。

猪endoglin胞外段DNA疫苗诱导抗小鼠结肠癌免疫反应

背景与目的:研究表明,endoglin是肿瘤血管生成的标志性分子,用抗endoglin单克隆抗体被动免疫治疗可以有效抑制肿瘤生长,而异种DNA疫苗可以打破自身同源分子的免疫耐受。因此,本研究用猪endoglin胞外段真核表达质粒(ppEDG)作为异种DNA疫苗,了解该DNA疫苗是否具有抑制小鼠结肠癌生长的作用,并探讨其作用的免疫学机理。方法:观察免疫治疗后的荷瘤小鼠肿瘤体积和生存情况,用免疫组化方法(抗CD31)观察肿瘤组织血管生长并计算肿瘤微血管密度,用Westernblot和ELISA方法检测荷瘤小鼠免疫治疗后的血清是否含有抗自身endoglin的抗体以及抗体亚型,用ELISPOT方法检测荷瘤小鼠脾脏中分泌抗自身endoglin抗体的B淋巴细胞。结果:肿瘤接种18天后,ppEDGDNA疫苗主动免疫治疗组肿瘤体积明显小于空质粒(e-p)对照组及生理盐水对照组(P<0.05),存活时间明显延长(P<0.001)。ppEDG组、e-p组和生理盐水组肿瘤组织微血管密度计数分别为19.2±4.5、76.9±14.4和81.4±16.9(P<0.001)。治疗组小鼠血清中含有抗自身endoglin的抗体,抗体亚型主要为IgG1和IgG2b。三组小鼠分泌抗自身endoglin抗体的B淋巴细胞数分别为82.5±14.1、3.6±1.3和4.7±2.0(P<0.001)。结论:ppEDGDNA疫苗诱导抗自身endoglin抗体产生,从而抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长。