诺卡氏菌产高活力腈水合酶补料分批发酵工艺的优化

[目的]优化诺卡氏菌产腈水合酶的发酵工艺,获得高活力的腈水合酶。[方法]对诺卡氏菌(Nocardiasp.)发酵产腈水合酶过程中菌体生长、pH变化以及葡萄糖消耗对腈水合酶合成的影响进行了分析。[结果]在分批补糖工艺中,使发酵液的葡萄糖浓度维持在1.5～6 g/L,发酵结束时,发酵液酶活达到2 814.3 U/ml,是优化前的8.7倍。[结论]分批补糖工艺增加了菌生长的生物量,大大提高了诺卡氏菌的产酶水平。

腈水合酶耐底物突变株的筛选及产酶条件优化

采用紫外诱变和梯度平板法筛选出耐底物的突变株,通过单因素实验考察发酵液起始pH值、装液量、发酵周期、接种量对产酶的影响,确定最佳的发酵条件;采用均匀设计实验优化发酵培养基。筛选出一株能耐受4%丙烯腈的腈水合酶产生菌,在最佳产酶条件下,耐底物突变株的腈水合酶酶活达到11.5MU/mL,与优化前相比,酶活提高了49.35%。腈水合酶耐底物突变株的最佳发酵条件为:初始pH 7.0、装液量16%、发酵周期58 h、接种量10%。最佳发酵培养基配方为:ρ(葡萄糖)=26 g/L,ρ(酵母膏)=2 g/L,ρ(尿素)=4 g/L,ρ(谷氨酸钠)=0.5 g/L,ρ(K2HPO4)=0.2 g/L,ρ(KH2PO4)=0.2 g/L,ρ(MgSO4)=0.05 g/L,φ(DXL)=0.5 mL/L。

结晶工艺及设备的最新进展

简单叙述了声场和磁场对结晶理论的最新进展,综述了反应结晶、真空结晶、无溶剂结晶、高压结晶、膜结晶、萃取结晶、蒸馏———结晶耦合、超临界流体(SCF)结晶、升华结晶等结晶技术及部分结晶器。

水溶液聚合法制备阳离子聚丙烯酰胺的研究与表征

对丙烯酰胺(AM)和甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(DMC)的水溶液聚合进行了研究与分析,采用复配引发体系,成功聚合出了阳离子型聚丙烯酰胺P(DMC-AM)。在成功聚合出所需的聚合物后,分析研究了不同工艺条件对聚合反应的影响;并通过红外光谱和核磁对聚合物的结构进行了确认。得到较好的工艺参数是:在偶氮化合物和氧化还原剂组合的复合体系作用下,阳离子单体量为16%,偶氮引发剂量为0.013%,氧化还原剂用量是0.015%,EDTA 2Na质量分数0.1%,尿素质量分数0.1%,得到特性粘度为10.59 d L/g,溶解时间为20 min。

关于力矩电机位式开关调节仪控制电路的技术改进

空气压缩机运转时受温度压力控制影响 ,频繁报警 ,误停车 ,影响生产维修 。

三重诱变选育腈水合酶高产菌株

[目的]获取高产的腈水合酶产生菌。[方法]以腈水合酶产生菌诺卡氏菌(Nocardia sp.)为出发菌株,采用加热、紫外线(UV)照射、硫酸二乙酯(DES)处理三重复合诱变,研究不同诱变剂量对致死率和正突变率的影响,选育腈水合酶高产菌株,并研究底物类似物乙腈对该菌株腈水合酶活性的影响。[结果]从中筛选出1株稳定、高活力的腈水合酶生产菌,所产腈水合酶最高活性提高到1 238万U。在一定浓度下,随着底物类似物乙腈浓度的增大,菌株正突变率和所产腈水合酶最高酶活增大,但超过一定浓度后正突变率和最高酶活反而下降。[结论]获得了1株稳定的腈水合酶高产菌株,所产腈水合酶活性高达1 238万U。底物类似物乙腈对该菌株的正突变率和所产腈水合酶最高酶活性有一定的影响。

用毛细柱气相色谱法测定丙烯酰胺的含量

用传统的填充柱气相色谱法测定AM含量,不但价格昂贵,而且需要大量人力。本文叙述了用毛细柱气相色谱法测定AM含量,寻找代替填充柱气相色谱法提供了另一种方法。

蒸汽管道吹扫的合适参数和流量

按吹扫力倍率确定吹扫蒸汽的参数和流量 ,改进吹扫方式 ,力求用效、节能。

腈水合酶在大肠杆菌中的表达纯化

微生物的腈水合酶是催化丙烯腈生成丙烯酰胺的重要生物催化剂,广泛应用于氨基酸、酰胺、羧酸及其衍生物的合成。通过PCR扩增得到诺卡氏菌的腈水合酶基因。实验先构建得到BL21-pGEX-4T-1/NHase重组菌,表达GST-NHase融合蛋白。由于GST的相对分子质量较大,阻碍了腈水合酶的β亚基与α亚基的正确结合,从而使腈水合酶表现不出酶活。于是又构建了BL21-pET-30c/NHase重组菌,IPTG诱导表达结果显示,腈水合酶α亚基基本没有得到表达,影响了腈水合酶的活性。经生物信息学分析发现,腈水合酶α亚基的起始密码子为gtg,可能不易被大肠杆菌的RNA聚合酶识别,于是通过点突变将gtg替换成atg,阳性重组子经IPTG诱导表达,结果显示腈水合酶β亚基和α亚基的表达量都有所提高。诱导表达的菌液经超声破碎,离心得到粗酶液,用EPI-30-ARG-IDA-Co2+亲和载体纯化带6×His tag的腈水合酶,气相色谱法检测腈水合酶的酶活达到200 U/mL。

产腈水合酶优良菌种的选育及其在生产中的应用研究

本文通过出发菌株Nocardia.sp.163摇瓶发酵96h后分别向发酵液中间歇加入丙烯腈和催化生成高浓度丙烯酰胺分别对菌丝的毒害和耐受作用以及发酵液中残存菌丝涂布平板置于18℃低温培养成单菌落,筛选到一株比出发菌株Nocardia.sp.163相对腈水合酶酶活提高了76%的24号优良菌株。该菌株在催化腈水合生成丙烯酰胺的反应中,产酰胺酶酶活性比出发菌株降低了近50%;丙烯酰胺水溶液的电导率比出发菌株降低了45%,反应次数提高了3.33次,丙烯酰胺放料浓度提高了5.93%。

分光光度法测定丙烯酰胺中的生物蛋白

微生物法丙烯酰胺水溶液中生物蛋白的测定,用考玛斯亮蓝试剂作蛋白质染料,使蛋白染色,用牛血清蛋白配制一系列标准液,在620nm处作标准曲线,用其同样的方法测定丙烯酰胺水溶液的吸光度,在标准曲线上查出蛋白浓度。

石化企业危险化工工艺风险等级评估指标体系研究

石化企业在市场经济的发展过程中，不断的进步和壮大，所生产的化工产品种类越来越多，涉及的危险化工工艺也越来越多，所以对于石化企业危险化工工艺的危险等级进行评估与划分是确保安全生产的关键环节，建立科学的风险等级评估指标体系对于石化企业危险化工工艺势在必行。