正交试验对密蒙花总黄酮分离纯化工艺的优化

优选密蒙花(Buddleja officinalis Maxim)总黄酮的分离纯化工艺条件。以总黄酮含量为指标,通过静态和动态试验确定较佳树脂,并通过单因素试验和正交试验优化密蒙花中总黄酮的分离纯化工艺。结果表明,采用AB-8型吸附树脂纯化效果较佳,其优化的密蒙花总黄酮分离纯化工艺为上样浓度2.24mg/m L,用3 BV 50%乙醇洗脱,洗脱流速为1.5 m L/min;处理后所得干膏中总黄酮的纯度为71.31%。其优选的工艺条件简单可行,可为工业化纯化密蒙花总黄酮提供参考。

青天葵F-box基因的克隆及其与ASK1蛋白互作分析

目的从濒危药用植物青天葵(Nervilia fordii)中克隆F-box基因,为寻找解决青天葵资源紧缺的方法提供依据。方法从青天葵转录组中筛选得到2个F-box基因的核心片段,以RACE技术获得基因的全长并克隆其编码区;通过荧光定量PCR(qRT-PCR)进行组织表达模式分析;利用酵母双杂交实验验证F-box蛋白的F-box区域与拟南芥ASK1蛋白的互作情况。结果从青天葵中克隆到F-box基因NfFBL3和NfFBL4,它们的开放阅读框(open reading frames,ORF)分别长1974、1833 bp,分别编码657、611个氨基酸。二者均包含F-box保守功能结构域,C端具有多个重复亮氨酸序列(Leucine rich repeats,LRRs);NfFBL3和NfFBL4蛋白均为不稳定的疏水蛋白,定位于细胞核,无信号肽及切割位点。系统进化分析表明,NfFBL3和NfFBL4分别与F-box/LRR-repeat protein 3蛋白、F-box/LRR-repeat protein 4蛋白聚在一起。二者均在青天葵的块茎中表达量较高。酵母双杂交实验中NfFBL3的F-box区域能与拟南芥ASK1蛋白互作,而NfFBL4不与ASK1蛋白互作。结论该研究从青天葵中克隆得到2个F-box基因,其中NfFBL3编码的蛋白可与拟南芥ASK1蛋白发生互作,为进一步研究青天葵中Skp1-Cullin-F-box(SCF)复合体的功能提供科学依据。

大学生创业孵化园对学生管理工作的影响分析

伴随我国经济水平的不断提升以及社会包容度的逐渐增加,创业逐渐成为更多年轻人的的选择,其中大学生成为创业团队中的主力军,越来越多的大学生选择自主创业作为个人发展方向.但大部分学生都是空有理论知识而缺少实际创业经验,在创业过程中会遇到诸多困难,而大学生创业孵化园的出现为学生打造了一个安全、便捷、高效的创业平台,不仅对学生创业有所帮助,更为学生的管理工作带来一定影响.本文简要概述了大学生创业孵化园、高校学生管理工作的基本概念及发展现状,并分析了创业孵化园对于学生管理工作的影响.

论石材产品生产过程中减低成本的方法

石材自从开始使用以来,一直都是建筑行业的主要用料之一,即使在现代建筑的发展中,石材仍然是必不可少的。但是同时我们也应该看到,随着经济的发展和建筑行业的革新,传统石材产业也凸显出一些不同的问题,尤其是在成本管控方面,成为了制约石材产业继续发展的阻碍之一,本文以此为出发点,首先对我国的石材产业发展历史进行了简述,然后就石材产品生产过程中的降低成本的具体方法进行了探讨,希望通过文章的撰写能够给石材生产厂家一些建议,为促进石材产业健康长远发展做一些微小的贡献。

青天葵中SKP1同源基因的克隆及原核表达

目的从青天葵Nervilia fordii克隆SKP1的同源基因NSKs,并对编码的蛋白进行生物信息学分析及原核表达,为了深入研究青天葵中SCF复合体的功能奠定基础。方法从青天葵转录组中筛选得到5条SKP1同源基因序列(NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11),构建pGEX-4T-NSKs原核表达载体于大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达GST-NSKs融合蛋白并进行纯化。结果 NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11的开放阅读框(ORF)分别为495、483、489、498和486 bp,编码164、160、162、165和161个氨基酸,蛋白相似性达到73.65%,均属于SKP1蛋白家族,具F-box和Cullin蛋白结合位点。亚细胞定位预测NSK2、NSK3和NSK5定位于细胞核,而NSK7和NSK11定位于细胞质和细胞核。系统进化树结果表明,NSK2、NSK3和NSK5聚为一簇,与小麦和玉米等的同源性较高;NSK7和NSK11聚为一簇,与多头绒泡菌的同源性较高。通过构建原核表达载体,确定了在大肠杆菌Rosetta (DE3)中的有利诱导条件,成功诱导表达并纯化得到5个GST-NSKs重组蛋白。结论成功克隆5个SKP1同源基因NSKs,获得NSKs蛋白,为深入研究青天葵中SCF复合体的功能提供了一定的基础。

青天葵NfD53基因的克隆及生物信息学分析

本研究克隆青天葵NfD53基因并分析其序列特征,可为今后深入研究Nf D53蛋白功能及独脚金内酯(SLs)对植物侧枝生长发育的影响提供参考依据。以濒危药用植物青天葵叶片为实验材料,利用RT-PCR及RACE技术克隆获得2条NfD53基因,分别命名为NfD53-1和NfD53-2,应用生物信息学软件分析其序列并进行功能预测。结果显示:NfD53-1基因全长3523 bp,编码974个氨基酸;NfD53-2全长3916 bp,编码1190个氨基酸。两者等电点分别为:8.34、6.33;亲水性平均数为:-0.250、-0.263;均为不稳定的亲水性蛋白,无信号肽及切割位点,定位于叶绿体。两蛋白都具有ClpA超家族核心序列,而Nf D53-1蛋白还具有ClpC超家族核心序列,并含有3个非特异性位点(ClpA,ClpC和AAA_(2)),Nf D53-2蛋白含有1个ClpA非特异性位点。蛋白的二级结构中均以无规则卷曲占比最高,分别占47.16%和51.21%;其次是α-螺旋,占38.70%和31.69%。系统进化分析表明,Nf D53-1与番茄等聚为一支,但氨基酸相似度较低(20.27%),Nf D53-2与铁皮石斛聚为一支,同源性较高(66.49%)。本研究为后续进一步探讨该基因的功能及SLs在植物生长发育中的作用提供数据参考。