HPLC法同时测定不同基原崖桑皮和桑白皮中7种活性成分含量

目的:建立同时测定重庆地区不同基原崖桑皮和桑白皮中7种活性成分含量的方法,为完善崖桑皮和桑白皮的质量控制标准以及比较两者质量等同性提供参考。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法测定58批崖桑皮和桑白皮药材中新绿原酸、桑皮苷A、绿原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和异槲皮素的含量,色谱柱为Diamonsil C_(18),流动相为0.1%甲酸溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。利用SPSS 22.0软件,采用独立样本t检验、主成分分析和聚类分析方法分析58批崖桑皮和桑白皮药材中上述7种活性成分的含量差异。结果:上述7种活性成分在各自质量浓度范围内与峰面积的线性关系良好(r≥0.9990),精密度、稳定性(24 h)、重复性、耐用性和加样回收率试验的RSD均小于3%。崖桑皮中新绿原酸、桑皮苷A、绿原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和异槲皮素的平均含量分别为0.304、22.462、1.730、1.308、1.593、2.842、0.657 mg/g,而桑白皮中上述7种活性成分的平均含量分别为0.305、22.995、2.486、2.438、2.916、4.158、1.264 mg/g。独立样本t检验结果显示,崖桑皮和桑白皮的上述7种活性成分中只有山柰酚的含量差异具有统计学意义(P<0.05);主成分分析和聚类分析结果均显示崖桑皮中上述7种活性成分的含量与桑白皮无明显差别。结论:所建HPLC法简便、灵敏、准确度高,可为完善崖桑皮和桑白皮的质量控制标准提供参考。崖桑皮和桑白皮在主要活性成分上具有一定的质量等同性,以华桑和鸡桑为来源的崖桑皮可作为桑白皮的代替品使用。

不同产地滇重楼药材及其根际土壤中6种重金属含量的比较

对不同产地栽培品和野生品滇重楼药材及其根际土壤中6种重金属元素的含量进行测定分析,为适宜滇重楼种植地区的选择提供参考。以云南、贵州、四川采集的27份滇重楼药材及其根际土壤为研究对象,通过微波消解法处理,采用原子荧光光谱法(AFS)和电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对铜(Cu)、镉(Cd)、铬(Cr)、铅(Pb)、砷(As)、汞(Hg)等6种重金属元素进行测定,参照相关限量标准对重金属元素进行安全性评价,并且利用主成分分析和聚类分析方法分析不同产地滇重楼药材及其根际土壤中重金属含量的相关性。结果表明,不同产地滇重楼药材及其根际土壤重金属含量存在显著性差异(P<0.05),其中大多数产地滇重楼药材Cu、Pb元素含量超过标准限量;从单因子污染指数>1可知,主要是Cd富集造成的土壤污染;同时,滇重楼药材对土壤中的Cu元素具有较强的富集作用;主成分分析表明,滇重楼药材重金属含量最高和最低分别是贵州省清镇市野生品和云南省芒市栽培品,而土壤重金属含量最高和最低分别是云南省保山市水寨乡和贵州省织金县栽培品;聚类分析结果表明,栽培产地滇重楼药材及其根际土壤重金属含量与野生产地无明显区别。栽培品滇重楼完全可以代替野生品使用,为滇重楼人工规模化种植及管理提供参考依据,以缓解野生滇重楼资源匮乏的困境。

鸡桑、华桑和桑的根皮中7种核苷类成分的含量测定

目的:采用高效液相色谱法(HPLC)对不同产地鸡桑、华桑和桑的根皮中腺嘌呤、腺苷、胞苷、次黄嘌呤、鸟苷、尿嘧啶和2'-脱氧腺苷等7种核苷进行测定与分析,为制订质量标准提供参考。方法:采用Venusil MP C18(5μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱,以甲醇和水为流动相,梯度洗脱,检测波长为260 nm,流速为1.0 mL/min,柱温30℃。结果:7种核苷成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.9998),平均回收率为97.49%~101.45%,RSD≤3%。不同产地鸡桑、华桑和桑的根皮中7种核苷的含量差异较大,其中华桑与鸡桑的根皮中尿嘧啶和次黄嘌呤含量整体较高,而不同样品次黄嘌呤含量差异性较大,胞苷含量最低。桑的根皮中鸟苷和腺嘌呤含量较高,2'-脱氧腺苷含量较低。鸡桑与华桑中核苷成分略低于桑。独立样本t检验结果表明,鸡桑、华桑和桑的根皮中7种核苷类成分无显著性差异(P>0.05),其核苷类成分具有一定的等同性。主成分分析和聚类分析结果表明,鸡桑、华桑和桑不能依据核苷类成分含量的差异加以区分,表明以华桑和鸡桑来源的崖桑皮可作为桑白皮的代替使用。结论:鸡桑、华桑和桑的根皮中核苷类成分含量无明显差异,本研究为鸡桑、华桑和桑质量等同性的研究提供了科学依据。

太白贝母不同部位生物碱类和核苷类化合物含量的比较研究

目的对比研究栽培品和野生品太白贝母不同部位核苷类和生物碱类含量。方法分别提取太白贝母鳞茎、茎、叶中的核苷类和生物碱类成分,采用高效液相色谱法和紫外-可见分光光度法进行含量测定,并利用独立样本t检验、聚类分析和相关性分析方法进行评价。结果太白贝母不同部位中核苷类和生物碱类含量差异性较大,含量大小整体表现为:叶>茎>鳞茎;在9种核苷中腺苷、尿苷、鸟苷含量相对较高,约占核苷总量的50%~80%;在鳞茎中胞苷和鸟嘌呤含量相对较低,约占鳞茎核苷总量的1%~8%;在茎中尿嘧啶含量最低,约占茎核苷总量的3%;而叶中的核苷类成分整体含量较高。总生物碱含量均符合2020年版《中国药典》要求;独立样本t检验结果表明,太白贝母野生品与栽培品中核苷类与生物碱类含量无显著性差异(P>0.05),说明栽培品能代替野生品入药;聚类分析结果表明,太白贝母不同部位有效成分含量差异性较大;相关性分析结果表明,各有效成分之间存在显著的相关性。结论太白贝母地上茎叶核苷类和生物碱类含量高于地下鳞茎,其茎叶存在进一步研究与开发的价值。

钾肥品种及配施比例对滇重楼根际土壤微环境及根茎生长调节的影响

【目的】研究氯化钾和硫酸钾2种钾肥及其配施比例对滇重楼根际土壤微环境的影响,为滇重楼规范化种植中的科学施肥提供理论依据。【方法】采用盆栽土培试验,以滇重楼生长过程中不施钾肥为对照(CK),设氯化钾和硫酸钾配施比例依次为100∶0(PF1)、75∶25(PF2)、50∶50(PF3)、25∶75(PF4)和0∶100(PF5)的5个施肥处理,测定滇重楼成熟期不同处理的根际土壤养分含量、微生物数量、土壤酶活性及根系活力和根茎钾含量。【结果】与CK相比,各钾肥处理的土壤pH均有所降低;除PF1外,其余处理不同程度地增加了根际土壤养分和土壤微生物数量,其中,PF4处理的调控效果最佳,可使速效氮、速效磷、速效钾和有机质含量依次增加107.98%、13.95%、31.32%和10.81%,使细菌数量增加58.93%;除中性磷酸酶活性外,多数施肥处理增加了土壤中其余6种酶的活性。与CK相比,施用外源钾肥时,多数处理可显著提高滇重楼根系活力。所有处理均显著增加滇重楼老根茎和新根茎钾含量(P<0.05,下同),其中PF4处理使滇重楼老根茎和新根茎内的钾含量达峰值,较对应CK显著提高134.57%和131.13%。【结论】外源施用钾肥对于滇重楼的生长发育和根际土壤微环境有积极影响,但不同钾肥配施比例对土壤微环境的调控效果存在差异,其中以氯化钾和硫酸钾按25∶75比例配施的调控效果最佳。

不同产地滇重楼须根中氨基酸类成分的UPLC分析与评价

建立柱前衍生-超高效液相色谱法测定滇重楼须根中15种氨基酸含量,对不同产地样品进行分析评价。采用UPLC-PDA仪器,使用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),流动相A为0.1 mol/L乙酸钠溶液(冰醋酸调节pH=6.5)-乙腈(97∶3),B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,检测波长254 nm,流速0.2 mL/min。滇重楼须根中检出15种氨基酸线性关系良好(r≥0.9997),平均回收率RSD均小于3.00%。各产地均以天门冬氨酸和谷氨酸含量为最高,栽培滇重楼须根氨基酸平均含量高于野生品。本研究建立了分析评价滇重楼须根中氨基酸类成分的方法,为滇重楼须根的资源开发与利用提供科学依据。

HPLC法同时测定还少胶囊中4种成分的含量

目的:建立同时测定还少胶囊中莫诺苷、马钱苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为中谱红RD-C18,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为240 nm(莫诺苷、马钱苷)、330 nm(松果菊苷、毛蕊花糖苷),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,进样量为10μL。结果:莫诺苷、马钱苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷检测质量浓度的线性范围分别为5.29~105.80、4.49~89.88、16.26~325.25、16.31~326.25μg/mL(r均为0.9999);精密度、稳定性(24 h)、重复性、耐用性试验的RSD均小于2.0%;加样回收率分别为94.34%~96.23%(RSD=0.81%,n=6)、97.04%~98.89%(RSD=0.73%,n=6)、96.23%~98.08%(RSD=0.82%,n=6)、95.40%~98.47%(RSD=1.23%,n=6)。11批还少胶囊中上述4种成分的含量分别为0.190~0.704、0.439~0.857、2.723~4.475、0.589~1.035 mg/g。结论:所建方法专属性强、精密度好,可用于还少胶囊中4种成分的含量测定。

钾肥配施对滇重楼生长、菌根生态特征和皂苷含量的影响

研究氯化钾和硫酸钾2种不同钾肥及其配施对滇重楼生长发育和入药品质的影响,为栽培滇重楼合理施肥提供科学依据。采用盆栽试验,以不施用钾肥为对照(CK),以每1 kg土中施用0.3 g K2O用量下KCl和K2SO4的配施比例分别为100∶0(PF1)、75∶25(PF2)、50∶50(PF3)、25∶75(PF4)和0∶100(PF5)为处理,观察不同钾肥配施对滇重楼根系菌根生态特征、光合参数、生物量以及有效成分含量的影响。结果显示:不同钾肥施用组菌根真菌侵染强度与CK相比显著增强;PF4的类胡萝卜素、叶绿素a和叶绿素b含量分别为CK组的107.19%、108.75%和174.27%;PF1、PF2和PF3的净光合速率分别为CK组的128.00%、116.47%和114.51%,蒸腾速率分别为CK组的174.98%、151.62%和129.42%,气孔导度分别为CK组的280.57%、263.75%和118.38%,胞间CO_(2)浓度分别为CK组的114.79%、118.38%和115.83%;PF1、PF2和PF5的超氧化物歧化酶活性分别为CK组的132.44%、121.50%和119.71%,PF3的过氧化物酶活性为CK组的135.62%,PF4可溶性糖和可溶性蛋白含量分别为CK组的111.60%和104.67%,PF5可溶性糖和可溶性蛋白含量分别为CK组的106.55%和103.31%;PF1、PF2和PF3的丙二醛含量较CK有显著降低;PF3、PF4组能明显提高滇重楼的生长指标;PF5和PF2组分别能够显著提高滇重楼新根茎的鲜重和折干率;所有钾肥施用组滇重楼新根茎重楼皂苷I、Ⅱ、Ⅶ以及总皂苷的含量较CK组有显著增加。综合来看,氯化钾和硫酸钾配施比例为75∶25(PF2)时效果最佳。

太白贝母接种促生菌对根际土壤无机元素的影响

采集接种5种不同微生物促生菌的太白贝母根茎及其土壤,分析太白贝母根茎及其土壤中10种无机元素的含量及变化规律,揭示接种不同促生菌对其产生的影响.结果表明,接种外源有益微生物对太白贝母根际内AM真菌的侵染强度具有调控(促进)作用.不同促生菌处理的样品中,根茎及土壤中均未检出As、Hg元素,其余8种无机元素含量存在显著性差异(P<0.05),Cc处理组K、Ca元素根茎中含量达到根际土含量的3倍,Mn与Zn元素最大差异达到近5倍.富集系数分析表明,根茎中K、Ca、Mg和微量元素Mn、Zn均有高于土壤的趋势;有害元素Cu、Pb、Cd有低于土壤的趋势.根际土壤中的金属元素含量较低,处于未污染范围内.相关性分析可知,药材、根际土壤、药材与根际土壤元素之间既有协同作用又拮抗作用.

丛枝菌根真菌对滇重楼根际土壤、须根和根茎中重金属元素的影响

本文主要研究接种不同丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi,AMF)混合菌剂后滇重楼根际土壤、须根和根茎中5种重金属残留量的变化规律,为滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)生物菌肥的研发提供参考。通过盆栽接种试验研究了在灭菌土壤中,接种不同AMF混合菌剂对滇重楼根际土壤、须根和根茎中Pb、Cu、As、Hg和Cr 5种重金属残留量的影响。与对照相比,接种AMF混合菌剂可以促进须根内上述5种重金属残留量的增加,而显著降低根际土壤和根茎内(新根茎和老根茎)上述5种重金属的残留量,其中,近明球囊霉、沙荒球囊霉、透明盾巨孢囊霉、美丽盾巨孢囊霉、巨大巨孢囊霉和球状巨孢囊霉6种单株AMF配置成的混合菌剂(S6混合菌剂)对滇重楼根际土壤和根茎内重金属残留量的调控效果最佳,可使根际土壤中重金属残留量平均减少11.32%、16.73%、54.53%、52.33%和30.44%,新根茎内重金属残留量平均减少23.43%、51.65%、15.04%、29.74%和29.66%,老根茎内重金属残留量平均减少40.13%、39.14%、30.99%、44.86%和37.91%。可见,外源接种AMF混合菌剂能显著降低滇重楼根茎对5种重金属元素的富集能力,其中,S6混合菌剂可供滇重楼大田栽培时作为降低重金属富集作用的参考依据。

不同丛枝菌根真菌组合对滇重楼光合生理和化学成分的影响

目的:研究接种不同丛枝菌根(AM)真菌组合对滇重楼幼苗的生长发育和入药品质的影响,为培育优质滇重楼药材提供参考。方法:通过室温盆栽接种试验方法,在灭菌栽培土壤中分别接种9组不同AM真菌组合,以不接种为空白组,观察不同AM真菌组合对滇重楼幼苗的根系侵染率、光合参数、生理指标及化学成分等的影响。结果:接种外源AM真菌组合显著增加滇重楼根际土壤中的孢子密度、根系AM真菌的侵染率和侵染强度,以及根内琥珀酸脱氢酶和碱性磷酸酶活性;与空白组相比,不同AM真菌处理组对滇重楼叶片叶绿素含量、丙二醛、可溶性糖和可溶性蛋白含量、抗氧化酶活性等均有不同程度的提高;接种混合AM真菌可以诱导滇重楼次生代谢过程的变化,总皂苷含量在T1至T2时期呈上升趋势,T2至T4时期急速减少,到T5时期有所提高。结论:不同混合AM真菌能与滇重楼根系形成良好的共生关系,提高菌根生活力,增强滇重楼对外界不利环境的抗逆性,促进滇重楼的生长发育以及提高根茎品质。从综合接种效应来看S5,S8,S9组AM真菌组合效果最佳,为滇重楼菌根生物技术的运用提供了参考价值。

根际促生菌剂对滇重楼生理特性及无机元素的影响

目的:研究接种不同根际促生菌剂(PGPR)对滇重楼幼苗的生长发育和入药品质的影响,为培育优质滇重楼药材提供参考。方法:通过室温盆栽接种试验方法,采用单因素完全随机设计,研究了5种不同PGPR对滇重楼生理特性及无机元素的影响。结果:接种外源不同PGPR可以不同程度地促进滇重楼的生长发育,延缓叶片的衰老,提高新根茎和老根茎的药用价值。其中,与未接种空白相比,外源接种复合微生物菌肥(FH)和三炬灌金液(SJ)可以增加根系活力及叶片内光合色素含量,增强叶片内的抗氧化酶活性[超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)],减少叶片中丙二醛(MDA)的产生,其减少幅度依次为10.46%~39.62%和20.99%~53.12%,随着生育进程的推进,MDA的抑制率逐渐增加,这有效地延缓了滇重楼叶片的衰老。此外,外源接种不同PGPR可以不同程度地增加新根茎和老根茎内营养元素含量,降低重金属元素含量,提高了滇重楼根茎的药用价值。结论:FH和SJ对滇重楼幼苗生长的促进作用及根茎药用价值的调控效果最佳,为PGPR在滇重楼上的应用推广提供了参考依据。

超高效液相色谱法测定野生与栽培滇重楼根茎及须根中9种甾体皂苷的含量

目的建立超高效液相色谱(UPLC)法同时测定滇重楼根茎及须根中伪原薯蓣皂苷、重楼皂苷VII、重楼皂苷H、重楼皂苷VI、重楼皂苷II、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷I、重楼皂苷V等9种甾体皂苷含量的方法,并对32个野生品与栽培品滇重楼的甾体皂苷含量进行评价。方法采用UPLC法,色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×150 mm,1.7μm),流动相为乙腈-水,检测波长为203 nm,流速为0.2 mL·min-1,进样体积为5μL,柱温为30℃。结果9种甾体皂苷分离良好,方法学考察均满足分析要求。32个不同产地滇重楼样品甾体皂苷含量差异较大,其中根茎中多数都能检测到9种甾体皂苷,重楼皂苷I、重楼皂苷II含量丰富,重楼皂苷VI、纤细薯蓣皂苷含量相对较低。须根均不含有伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷V,但重楼皂苷VI、VII、H含量丰富,且含量远高于根茎。主成分分析和聚类分析结果表明,多数产地野生滇重楼与栽培滇重楼根茎及须根中甾体皂苷未能完全分开。独立样本t检验结果表明,除根茎中重楼皂苷VII、须根中重楼皂苷H外,其余活性成分含量均无显著差异,无法区分野生品与栽培品,与聚类分析结果相一致。结论滇重楼栽培品可以代替野生品药用,以保护匮乏的野生滇重楼资源,须根可被保留,用作药物原料。

须根自然腐解对滇重楼生长及其活性成分含量的影响

目的:研究添加外源性须根在自然腐解条件下对滇重楼生长发育和入药品质的影响。方法:通过室温盆栽试验,研究不同须根施用量自然腐解对滇重楼根系菌根侵染率、生理生化指标以及重楼皂苷含量的影响。结果:施加不同须根量自然腐解处理对滇重楼根系丛枝菌根(AM)真菌的侵染率无显著性影响,与侵染强度存在部分显著性差异;滇重楼叶片光合色素含量随须根施用量的增加显著降低,叶绿素总量最大降幅达78.7%;滇重楼叶片中可溶性蛋白、可溶性糖和丙二醛含量总体呈上升趋势,3种保护酶活性反应程度不同,过氧化物酶和丙二醛最大增幅达181.6%和200.0%;在滇重楼根系中上述6种成分含量有不同程度减少,过氧化物酶和丙二醛最大降幅达44.6%和69.7%;不同须根处理会降低滇重楼活性成分的含量,4种皂苷总含量降幅最大达58.9%,总皂苷含量最大降幅达46.9%。结论:须根自然腐解会影响滇重楼的根系土壤微生物环境、减少滇重楼叶片光合色素含量和破坏滇重楼细胞稳定性等,干扰滇重楼的生长发育,降低其药用成分含量,导致滇重楼发生连作障碍。