组胺H4受体在胃腺癌组织中的表达及临床意义

目的:研究胃癌腺癌(gastric adenocarcinoma,GAC)中组胺H4受体的表达水平及其临床意义。方法:60例GAC组织(病例组)与配对癌旁组织(adjacent normal tissue,ANT)中应用免疫组织化学技术检测组胺H4受体的表达,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测组胺H4受体mRNA的表达,统计分析组胺H4受体表达与临床病理特征之间的关系。结果:①胃腺癌组织中组胺H4受体蛋白的阳性表达率(11.7%)显著低于癌旁正常组织(96.7%)。②胃腺癌组织中组胺H4受体mRNA水平较癌旁组织明显降低(p<0.001)。③组胺H4受体蛋白和mRNA表达异常和肿瘤的病理分级有相关性(p=0.0027和p=0.0011),也与有无胃周淋巴结转移有关(p<0.001和p=0.0049)。结论:组胺H4受体在胃腺癌组织有表达异常,表达量与病理分期相关。组胺H4受体表达异常和组胺水平紊乱可能在胃癌发生发展过程中有重要作用。

皮肤癌中原钙黏蛋白10基因启动子甲基化水平及意义

目的探讨皮肤癌组织中原钙黏蛋白10(protocadherin 10,PCDH10)基因的甲基化水平及临床意义。方法取67例皮肤鳞状细胞癌、85例皮肤基底细胞癌患者手术切除癌组织和癌旁正常组织标本,43例光化性角化病患者活检病变组织及正常组织标本,提取DNA进行甲基化修饰。高分辨率熔解曲线法检测各浓度标准品荧光信号强度,运用软件分析得到甲基化分型图谱,判断样本曲线在标准曲线上的位置,获得样本甲基化程度的数据。结果鳞状细胞癌、基底细胞癌组织中PCDH10基因启动子高甲基化比率(89.6%、87.1%)均高于癌旁组织(11.9%、8.2%)(P<0.05);光化性角化病病变组织PCDH10基因启动子高甲基化比率(51.2%)高于癌旁正常组织(9.3%)(P<0.05);鳞状细胞癌、基底细胞癌组织中PCDH10基因启动子高甲基化比率高于光化性角化病病变组织(P<0.05);鳞状细胞癌组织中PCDH10基因启动子超甲基化比率为23.9%。结论高水平的PCDH10基因甲基化可能被用作皮肤癌的标志物,其中超甲基化可作为鳞状细胞癌的标志,而低水平的PCDH10甲基化可作为皮肤病早期发现的指标。

circZfp609在小鼠成肌细胞系C2C12细胞中表达及意义

目的探讨circZfp609在小鼠成肌细胞系C2C12细胞增殖和分化过程中的作用及意义。方法采用核质分离实验观察增殖期与分化期C2C12细胞circZfp609核质分布情况;增殖期与分化期C2C12细胞分别分为circZfp609敲低组、Zfp609敲低组和对照组,分别转染特异性敲低circZfp609的siRNA、特异性敲低Zfp609的siRNA和对照siRNA。采用实时荧光定量PCR法检测增殖期C2C12细胞circZfp609及Zfp609 mRNA相对表达量,采用CCK8法检测增殖期C2C12细胞的细胞增殖率;采用免疫荧光法观察分化期C2C12细胞肌细胞生成素(myogenin,MYOG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)蛋白表达情况,采用Western blot法检测分化期C2C12细胞MYOG、MHC蛋白相对表达量。结果增殖期C2C12细胞质中circZfp609占52.75%,分化期C2C12细胞质中circZfp609占71.38%。增殖期C2C12细胞circZfp609敲低组circZfp609相对表达量(0.124±0.008)低于对照组(1.000±0.064)(t=59.262,P<0.001),Zfp609 mRNA相对表达量(1.269±0.173)与对照组(1.000±0.052)比较差异无统计学意义(t=2.533,P=0.131);Zfp609敲低组circZfp609相对表达量(1.063±0.138)与对照组(1.000±0.159)比较差异无统计学意义(t=0.931,P=0.442),Zfp609 mRNA相对表达量(0.580±0.062)低于对照组(1.000±0.121)(t=12.936,P=0.007)。增殖期C2C12细胞circZfp609敲低组培养第3、4天细胞增殖率[(62.93±14.35)%、(49.96±8.14)%]均低于对照组[(100.00±11.63)%、(100.00±16.76)%](t=11.431,P=0.002;t=8.245,P=0.003);Zfp609敲低组培养第2、3天细胞增殖率[(139.06±7.58)%、(157.12±13.50)%]均高于对照组[(100.00±9.25)%、(100.00±23.68)%](t=3.324,P=0.037;t=6.062,P=0.009),培养第4天细胞增殖率[(109.73±17.94)%]与对照组[(100.00±14.59)%]比较差异无统计学意义(t=0.834,P=0.465)。在C2C12细胞分化期,与对照组比较,circZfp609敲低组细胞MYOG、MHC蛋白表达增强,细胞纤维长度增长,极化明显,出现细胞融合;Zfp609敲低组细胞MYOG、MHC蛋白表达呈不同程度降低,细胞纤维长度缩短,极化不明显,细胞融合减少。分化期C2C12细胞circZfp609敲低组MYOG和MHC蛋白相对表达量(1.281±0.091、1.698±0.104)均高于对照组(1.000±0.056、1.000±0.132)(t=0.045,P=0.013;t=0.012,P=0.005),Zfp609敲低组MYOG和MHC蛋白相对表达量(0.657±0.125、0.395±0.028)均低于对照组(1.000±0.056、1.000±0.132)(t=0.049,P=0.025;t=0.028,P=0.014)。结论circZfp609参与了小鼠成肌细胞系C2C12细胞的增殖和分化过程,有可能成为骨骼肌增殖及分化异常疾病诊断与治疗的新靶点。

微小RNA-107对气道平滑肌细胞增殖和迁移的影响研究

背景微小RNA-107(miRNA-107)在多种肿瘤(如膀胱癌、乳腺癌)的发生发展过程中具有重要作用,但其在过敏性哮喘发生发展中的作用尚不完全清楚。目的探讨miRNA-107对气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖和迁移的影响。方法本研究时间为2019年9月—2020年12月。原代培养SPF级雌性BABL/c小鼠的ASMCs,运用免疫荧光鉴定ASMCs。将细胞随机分为miRNA-107模拟物组(miRNA-107 mimic组)、模拟物对照组(mimic NC组)和miRNA-107抑制剂组(miRNA-107 inhibitor组)、抑制剂对照组(inhibitor NC组)。miRNA-107 mimic组和mimic NC组的细胞分别转染5μl 20μmol/L的miRNA-107 mimic或5μl 20μmol/L的mimic NC+7.5μl viafect+200μl Opti-MEM无血清培养基;miRNA-107 inhibitor组和inhibitor NC组的细胞分别转染10μl 20μmol/L的miRNA-107 inhibitor或10μl 20μmol/L的inhibitor NC+15μl viafect+200μl Opti-MEM无血清培养基。采用荧光定量试剂盒检测各组ASMCs中miRNA-107相对表达水平,BrdU细胞增殖检测试剂盒(比色分析法)检测各组细胞增殖能力(吸光度差值),穿梭小室检测各组细胞迁移能力(迁移细胞数)。分别比较miRNA-107 mimic组与mimic NC组、miRNA-107 inhibitor组与inhibitor NC组ASMCs中miRNA-107相对表达水平、细胞增殖能力和细胞迁移能力。结果ASMCs从组织块周围呈放射状萌出,7 d后逐渐长满培养瓶,呈谷峰状;首次传代后,ASMCs呈梭形,多有突起,生长致密且平行排列;培养2代后的ASMCs经免疫荧光鉴定后有绿色荧光;经鉴定,99%以上的细胞均是ASMCs。miRNA-107 mimic组ASMCs中miRNA-107相对表达水平高于mimic NC组,吸光度差值、迁移细胞数低于mimic NC组(P<0.05)。miRNA-107 inhibitor组ASMCs中miRNA-107相对表达水平低于inhibitor NC组,吸光度差值、迁移细胞数高于inhibitor NC组(P<0.05)。结论miRNA-107可以抑制ASMCs的增殖和迁移。抑制miRNA-107的表达可以促进ASMCs的增殖和迁移,这可能是哮喘患者发生气道重塑的机制之一。因此,miRNA-107有望作为抑制气道重塑的一个靶点,为哮喘的治疗提供新的方法。