仁化县河道纳污能力及污染排放量预测研究

采用一维衰减模型对仁化县河道纳污能力进行计算,并对该县未来点源、面源污染的排放量进行预测。结果表明,仁化县部分河道纳污能力较好,而部分河道COD及NH3-N污染排放量超过河道纳污上限,需采用适当管控措施以确保河道水质。对此提出针对性建议及措施。研究所用方法及预测手段可为中小河流污染管理提供指导。

割胶和水杨酸刺激对胶乳中蛋白质代谢及β-1,3-葡聚糖酶活性的影响

以新开割和第3割年的热研7-33-97无性系为材料,研究割胶和外源水杨酸刺激对橡胶树胶乳中的蛋白质含量与种类以及茁-1,3-葡聚糖酶活性的影响。结果表明,橡胶树开割以后,不但胶乳中总蛋白质的含量增加,而且蛋白质种类也增多;采用外源水杨酸刺激第3割年的橡胶树,可提高胶乳中茁-1,3-葡聚糖酶的活性。

心理护理联合疼痛护理对无痛分娩产妇的应用价值研究

目的探究心理护理联合疼痛护理对无痛分娩产妇的应用价值。方法选取2019年2月~2021年2月我院妇产科收治的无痛分娩产妇60例,按护理方案不同分成对照组和观察组各30例。对照组行基础护理,观察组在对照组基础上实施心理护理联合疼痛护理,对两组护理效果进行观察比较。结果观察组产程时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);护理后,观察组疼痛评分、焦虑与抑郁评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组产妇、新生儿不良事件发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组新生儿Apgar评分、护理满意度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在基础护理上为无痛分娩产妇实施心理护理联合疼痛护理干预,对产程时间缩短、疼痛与负面情绪改善、分娩结局改善、护理满意度提升存在积极影响。

舒腹散联合艾灸、腹部按摩干预老年髋部骨折合并便秘临床观察

[目的]探讨舒腹散联合艾灸、腹部按摩治疗老年髋部骨折合并便秘患者的临床疗效。[方法]选取老年髋部骨折合并便秘患者80例,按随机数字表法分为两组,各40例。对照组予常规骨科和便秘护理,必要时予口服枸橼酸莫沙必利和乳果糖口服溶液,观察组在对照组常规护理基础上予舒腹散外敷联合艾灸,辅以腹部按摩中医护理,两组治疗观察7 d,比较两组治疗后首次排便时间、便秘评分、疗效和患者满意度。[结果]观察组首次排便时间、便秘评分、患者满意度、总有效率与对照组比较,均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]采取外敷舒腹散联合艾灸,辅以腹部按摩中医护理干预髋部骨折便秘患者,可促进患者肠蠕动、改善便秘症状,提高患者的满意度。

茉莉酸刺激的橡胶树胶乳cDNA消减文库的构建及其序列分析

采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建了外源茉莉酸刺激条件下橡胶树胶乳与未处理橡胶树胶乳差异表达的cDNA消减文库,经蓝白斑筛选共得到121个含有插入片段的阳性克隆。通过菌落PCR的方法分别对阳性克隆的插入片段进行扩增,结果表明,95％左右阳性克隆插入片段的大小在200-600 bp之间。随机选取25个克隆进行测序,并对所得的25条表达序列标签(EST)序列用Blastn(基本局域联配搜寻工具)检索基因文库(genbank),其中10条EST片断可找到碱基序列相似性大于80％以上的同源基因序列,其余15条EST为没有任何功能线索的未知序列。外源茉莉酸刺激条件下橡胶树胶乳cDNA消减文库的构建和在此基础上克隆橡胶树胶乳中JA信号的候选应激基因,将为开展茉莉酸调控橡胶树胶乳代谢和橡胶生物合成的分子机理研究打下基础。

巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳及质谱分析

【目的】分析巴西橡胶树(Hevea Brasiliensis Müll.Arg.)橡胶粒子的蛋白质构成,探索未知的橡胶粒子蛋白质。【方法】采用16-BAC/SDS PAGE双向电泳分离橡胶粒子蛋白质,采用MALDI/TOF-TOF质谱技术进行蛋白质鉴定;此外,利用磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)化学辅助质谱测序法进行肽段的从头测序,获得未知蛋白质肽段的氨基酸序列。通过搜索橡胶树胶乳转录组测序获得的EST数据库,获取已知部分氨基酸序列蛋白质的全序列,或通过部分肽段获取为未知蛋白质编码的EST序列。【结果】获得了橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳图谱,鉴定了17个橡胶粒子蛋白质;获得1个小橡胶粒子蛋白(small rubber particle protein,SRPP)亚家族成员SRPP(gi|37622210)的完整氨基酸序列以及1个橡胶延伸因子(rubber elongation factor,REF)亚家族新成员(hbREF2)的C端87个氨基酸残基序列,此蛋白质的氨基酸序列与已知的REF(gi|38122474)具有高度的相似性。【结论】采用16-BAC/SDS-PAGE双向电泳有效地分离了橡胶粒子蛋白质,展现了橡胶粒子蛋白质的相对含量,研究结果表明构成橡胶粒子的主要蛋白质组分是REF和SRPP亚家族蛋白质。橡胶粒子的蛋白质组分的全面鉴定,将有助于揭示橡胶粒子的生物学功能。

橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库的构建与EST测序分析

【目的】构建橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库,降低胶乳中存在的高丰度表达基因的拷贝数,提高胶乳表达基因的分离鉴定和EST测序分析效率。【方法】以橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳为材料,将胶乳全长cDNA与Gateway供体载体pDONR222重组,构建了橡胶树胶乳的非剪切型全长cDNA原始文库,经检测原始文库的滴度为6.0×106 cfu/mL,平均插入片段长度大于1.5 kb,重组率约为100%,全长cDNA比例约为76%;利用基因组DNA饱和杂交技术对胶乳原始cDNA文库进行均一化处理,构建橡胶树胶乳的均一化全长cDNA文库。【结果】胶乳均一化全长cDNA文库的总库容量(总CFU)为1.87×105,重组率大于95%。定量RT-PCR检测表明,橡胶树胶乳2个高丰度表达基因,即小橡胶粒子蛋白(SRPP)和橡胶延长因子(REF)基因,在均一化cDNA文库中的表达量均下降了约1 000倍。【结论】构建了均一化效果良好的橡胶树胶乳全长cDNA文库,并对文库中随机的12 000个克隆进行了测序,获得高质量的有效EST(expressed sequence tag)序列为11 951条,经拼接共获得单一基因(unigene)为3 394个,其中包括片段重叠群(contig)2 061个和单一EST序列(singlet)1 333个。此cDNA文库将可用于橡胶树功能基因组研究、新基因筛选、高通量EST测序以及橡胶树胶乳cDNA芯片的制备。

外源茉莉酸诱导巴西橡胶树乳管分化的酶学研究(Ι)

以巴西橡胶树(HeveabrasiliensisMull.Arg.)无性系热研7-33-97芽条增殖苗圃中具有3篷稳定叶的萌条和橡胶树无性系RRIM600成龄树为材料,研究外源茉莉酸对萌条树皮组织的脂氧合酶、苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶的活性与过氧化物酶同工酶以及对成龄树胶乳和树皮组织脂氧合酶活性的影响。结果表明,(1)外源茉莉酸处理使橡胶树7-33-97萌条第1篷(顶篷)叶和第3篷叶伸长单位树皮组织的脂氧合酶活性升高,外源茉莉酸与脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈伤木酚(nordigyroguaiareticacid,NDGA)一起作用时可降低外源茉莉酸对脂氧合酶的诱导效应,并相应地抑制了外源茉莉酸刺激橡胶树乳管分化的作用;(2)外源茉莉酸可显著地诱导成龄开割橡胶树RRIM600胶乳的脂氧合酶活性,而对其树皮组织的脂氧合酶活性几乎没有影响;(3)外源茉莉酸大幅度地提高了橡胶树7-33-97萌条第1篷叶和第3篷叶伸长单位树皮组织的苯丙氨酸解氨酶活性;(4)外源茉莉酸处理中,橡胶树7-33-97萌条第1篷叶和第3篷叶伸长单位树皮组织的过氧化物酶对外源茉莉酸的反应不同,即外源茉莉酸对萌条第3篷叶伸长单位树皮组织的过氧化物酶活性及其同工酶谱没有影响,但使萌条第1篷叶伸长单位树皮组织的过氧化物酶活性升高,其同工酶谱也发生了相应的变化。因此,橡胶树萌条次生乳管的?

巴西橡胶树HbNAC24基因克隆和表达分析

该研究以巴西橡胶树为实验材料,从橡胶树胶乳cDNA中克隆了NAC转录因子基因（HbNAC24）完整开放阅读框（ORF）,并通过酵母实验和实时荧光定量PCR技术,进行转录激活活性分析和表达分析.结果显示：（1）HbNAC24基因ORF为1 167 bp,编码388个氨基酸,在N端第7～174氨基酸之间含有一个典型的NAC结构域.（2）酵母实验表明,HbNAC24具有转录激活活性,转录激活区在高度变异C端,具备了NAC转录因子的基本特征.（3）序列比对和系统进化分析表明,HbNAC24蛋白属于NAC转录因子家族中的TIP亚族.（4）实时荧光定量PCR分析结果发现,HbNAC24基因在叶中的表达量显著高于其他部位;割胶和茉莉酸（JA）处理均能够诱导HbNAC24表达上调.研究认为,HbNAC24基因可能参与植物的生长发育和胁迫应答过程.

应用酵母双杂交系统筛选橡胶延长因子REF的互作蛋白

利用酵母双杂交系统,以橡胶树(Hevea brasiliensis)橡胶延长因子基因REF的开放阅读框(ORF)构建无自激活性的诱饵表达载体pBD-GAL4-REF,并筛选以pAD-GAL4-2.1载体构建的橡胶树胶乳cDNA文库,对阳性克隆的cDNA插入片段进行测序及生物学功能分析。通过酵母双杂交筛选,共获得5种可能与REF互作的候选蛋白质,它们分别为与诱饵蛋白REF高度同源的REF家族成员、小橡胶粒子蛋白(SRPP)、翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)、激发子响应蛋白和泛素耦联酶E2,这表明橡胶延长因子REF除了与自身高度同源蛋白质可能存在相互作用之外,还可能与TCTP和激发子响应蛋白等其它蛋白质发生相互作用。这些结果有助于揭示橡胶粒子的生物学功能。

植物NAC转录因子的研究进展

NAC(NAM、ATAF1、ATAF2和CUC2)转录因子是植物特有的一类转录因子,在多种陆生植物基因组中发现有超过100个成员,是植物基因组中最大的转录因子家族之一。该家族转录因子的共同特点是其N端具有保守的NAC结构域,C端则为高度变异和具有转录激活功能的调控区。具有多种生物功能NAC家族转录因子在植物生长发育、胁迫应答和激素调节等过程中具有重要作用。就植物NAC转录因子的基本结构特征和生物学功能最新研究进展进行综述。

巴西橡胶树小橡胶粒子蛋白(SRPP)基因启动子的克隆及其功能分析

小橡胶粒子蛋白(SRPP)是巴西橡胶树中参与橡胶生物合成的重要蛋白因子之一。SRPP的氨基酸序列与橡胶延长因子(REF)和菜豆胁迫相关蛋白(PVSRP)的同源性分别为72%和68%。为了进一步研究SRPP基因表达及其调控的机制,作者采用接头连接介导的PCR散步法(ligation-mediated PCR),克隆了SRPP基因的启动子。序列分析表明,SRPP基因启动子中与光诱导相关的顺式元件占39%,可能属于光诱导型启动子,因此,SRPP基因的表达可能受光信号的调控。此外,SRPP基因启动子还具有热激响应元件(HSE)、干旱胁迫响应元件(MBS)、防卫和胁迫响应元件(TC-richrepeats)、脱落酸响应元件(ABRE)、赤霉素响应元件(GARE)和激发子响应元件(EIRE,Wbox)等,这表明橡胶树SRPP基因不仅参与调控橡胶生物合成,而且可能是橡胶树中响应逆境信号的抗性基因,在橡胶树抵御逆境胁迫的生理过程中发挥重要作用。

橡胶无性系PR107胶乳生理参数的季节性变化

结果表明，橡胶无性系ＰＲ１０７的胶乳干胶含量、每株割次干胶产量、胶乳蔗糖含量、总酸性磷酸酶活性、胶乳硫酸、无机磷、镁含量和乳管堵塞指数有明显的季节性变化。ＰＲ１０７经过冬季休割后重新割胶初期，胶乳干胶含量、镁含量下降，而干胶产量、胶乳蔗糖含量、总酸性磷酸酶活性及堵塞指数逐渐上升。在５月份有一个产胶小高峰。第２次抽叶对胶乳的干胶含量影响不大，但此期胶乳的镁含量下降幅度最大，乳管堵塞指数最高，橡胶产量降至峰谷。抽叶后橡胶树的乳管堵塞指数下降，产胶量上升，至１０月达到全年最高峰。到冬季胶乳干含、产胶量及总酸性磷酸酶活性明显下降，而胶乳硫酸和无机磷含量显著上升，其它生理参数保持在较低值。胶乳蔗糖含量保持上升趋势至１１月份，胶乳硫酸和无机磷含量与气温变化里极显著负相关。

巴西橡胶树橡胶粒子研究进展

橡胶粒子是橡胶树乳管细胞质中进行橡胶生物合成的一种特殊细胞器,其内部的主要成分橡胶烃分子,是天然橡胶的直接来源。橡胶生物合成是在橡胶粒子膜上进行的,橡胶转移酶和橡胶延长因子等是参与橡胶生物合成的重要橡胶粒子膜蛋白,它们决定着橡胶粒子的橡胶生物合成速率,并影响橡胶树胶乳产量和橡胶质量。橡胶粒子膜上存在与橡胶生物合成相关的茉莉酸和乙烯信号响应蛋白,茉莉酸、乙烯可能是通过橡胶粒子膜上的茉莉酸、乙烯信号响应蛋白对橡胶生物合成产生调控作用。从橡胶粒子的基本结构、起源和发育、橡胶粒子膜蛋白的组成和功能3个方面对橡胶粒子细胞组织学和分子生物学的研究进展进行综述,可为橡胶树产胶生理学的深入研究提供参考。

巴西橡胶树胶乳核酸含量与产量及死皮关系的研究

初步研究了无性系RRIM600健康与死皮橡胶树胶乳的核酸、蔗糖、无机磷和硫醇的含量及核糖核酸酶的活性，分析了它们与胶乳产量和死皮之间的关系，认为死皮树胶乳中核糖核酸酶活性的增强和核酸含量的下降是割面局部组织衰老现象的反映。

橡胶树皮乳管组织茉莉酸诱导相关因子AP2/EREBP基因的克隆与表达分析

茉莉酸(jasmonic acid,JA)可诱导橡胶树(Hevea brasiliensis Muell.Arg.)乳管分化,是乳管分化的关键信号分子。目前,对JA诱导橡胶树乳管分化的分子机理仍然不清楚。在前期研究中通过筛选JA刺激乳管分化时期的橡胶树树皮组织cDNA差减文库,获得了4条与茉莉酸诱导乳管分化相关的AP2/EREBP家族转录因子基因的EST。该研究在此基础上,采用RACE法完整地克隆了这4个AP2/EREBP转录因子基因的开放阅读框,蛋白氨基酸序列分析表明其中3个属于ERF亚类,1个属于RAV亚类;表达分析发现,这4个基因在乳管分化时期的橡胶树树皮组织的表达受JA诱导,随JA处理时间的延长,其表达量先增强后减弱,推测它们可能在JA诱导橡胶树乳管分化过程中起着重要的调控作用。

橡胶树胶乳cDNA文库的构建及其EST序列的功能分析

为了分离和克隆橡胶树胶乳中与胶乳代谢、橡胶生物合成和茉莉酸生物合成等途径相关的功能基因,以橡胶树无性系热研7-33-97品系新开割树的胶乳为材料,用SDS裂解法提取胶乳总RNA,磁珠法纯化mRNA,逆转录合成第1链cDNA,并合成双链cDNA,经电泳检测,双链cDNA的大小主要在1.0～2.0kb之间,收集大于500bp的cDNA片段,以DH10B为宿主菌,pBluescriptII为载体,构建未经扩增的橡胶树胶乳cDNA初级文库。该文库的库容大于5.0×105Pfu/mL,重组率大于90%。随机对文库的3200个克隆进行了EST测序,用所测序列与GenBank非冗余蛋白质数据库进行BlastX比对,并将比对上的基因进行生物学功能注释和分类。研究结果表明,所构建的胶乳cDNA初级文库质量较高,适合包括低丰度表达基因在内的橡胶树胶乳功能基因的筛选,是研究橡胶树胶乳中重要功能基因的最主要资源和开展橡胶树胶乳代谢与橡胶生物合成的分子机制研究的基础。

巴西橡胶树NAC转录因子HbNAC1基因的克隆及生物信息学分析

为了研究植物特有的NAC(NAM,ATAF1/2和CUC2)转录因子在巴西橡胶树生长发育、胁迫应答和激素调节中的功能,对巴西橡胶树NAC转录因子进行了克隆和分析。根据橡胶树胶乳cDNA文库中筛选到的NACEST序列,利用RACE-PCR技术克隆了橡胶树HbNAC1的cDNA序列。生物信息学分析显示HbNAC1基因开放阅读框(ORF)为891bp,编码了一个296个氨基酸组成的中性不稳定水溶性蛋白,该蛋白的N-端具有保守的NAC结构域,C-端高度变异,具备了NAC转录因子的基本特征。HbNAC1定位在细胞核中,具有3个糖基化位点和21个磷酸化位点,三级结构由3个α-螺旋和9个β-折叠组成。序列比对和系统进化分析显示HbNAC1蛋白属于NAC转录因子家族中的ANAC011亚族,推测其可能作为一种氨基酸合成相关的调节酶参与调控植物的免疫反应。

巴西橡胶树HbNAC1基因启动子的克隆及序列分析

NAC转录因子是植物特有的一类转录调控因子,在植物的生长发育、激素调节和境胁迫应答中具有重要的功能。为研究NAC转录因子在巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)抗逆胁迫中的功能,本项目组根据巴西橡胶树NAC转录因子-HbNAC1基因序列,通过Genome Walking方法从巴西橡胶基因组DNA中获得了长度为1861bp的HbNAC1基因的5'调控区片段,序列分析表明该段序列含有一个典型的真核生物核心启动子区域,转录起始位点T位于起始密码子上游52bp处。该启动子序列除了含有TATA-box、CAAT-box等基本顺式作用元件外,还具有茉莉酸响应元件以及大量光顺式作用元件和逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件,这表明HbNAC1基因在橡胶树逆境胁迫应答过程具有重要功能,其启动子可能是一个光诱导型和组织特异性启动子。

巴西橡胶树膜结合NAC转录因子HbNTL1的克隆及生物信息学分析

根据巴西橡胶树胶乳cDNA文库中筛选到的NAC EST序列,克隆了橡胶树膜结合NAC转录因子,HbNTL1的cDNA和基因组DNA序列。生物信息学分析显示HbNTL1基因包含6个外显子和5个内含子,开放阅读框(ORF)为1704bp,编码了567个氨基酸。HbNTL1编码蛋白的相对分子量为62.52kDa,理论等电点PI为4.62,N-端具有保守的NAC结构域,高度变异的C-端有一个跨膜结构域(TM)。序列比对和系统进化分析表明,HbNTL1蛋白属于NAC转录因子家族中的NAC2亚族,推测其可能与橡胶树生长发育和胁迫应答有关。