1株罕见的可疑沙门氏菌鉴定结果的确认与分析

目的确认盲样考核样品中分离到的罕见可疑沙门氏菌。方法依据GB4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物检验沙门氏菌检验》将可疑沙门氏菌通过分离纯化、生化鉴定、16S测序、Ribo-printer基因指纹鉴定、MALDI Biotyper质谱鉴定以及血清型分型等方法对其进行确认。结果全自动细菌鉴定/药敏系统对该分离菌的鉴定结果为大肠埃希菌,而16S测序结果为沙门氏菌属,基因指纹鉴定结果为沙门氏亚利桑那亚种,质谱鉴定结果为沙门氏菌双相亚利桑那亚种,且血清型分型也表明该菌应为IIIb型,综合判断该检出菌应为沙门氏菌双相亚利桑那亚种。结论采用基于不同原理的多种鉴定手段联用的鉴定方法更能确保实验结果的可靠有效。

耐热高活性荧光素酶在单细菌检测中的应用

[目的]开发活性和稳定性提高的荧光素酶突变体,建立单细菌检测方法。[方法]运用定点突变的方法,向荧光素酶LGR中逐步引入提高荧光素酶稳定性的氨基酸位点,构建荧光素酶突变体LGR-A215L、LGR-E354K和LGR-LK,并建立基于单细菌检测的快速无菌检查方法。[结果] LGR-A215L、LGR-E354K和LGR-LK的活性分别提高了9、26和140倍,45℃的稳定性提高了约2.9、1.3和2.7倍;此外,NaCl、培养基和生物制品溶液对LGR-LK的活性影响较小,活性变化在74%~181%之间。LGR-LK与ATP之间的亲和力显著提高,能灵敏的检测到小于10 CFU/mL菌悬液中的细菌,信号/背景值≥200;在48 h以内检测到TSB培养基中的金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,相较于LGR的检测灵敏度提高了约1.5倍。[结论]开发了热稳定高活性荧光素酶突变体LGR-LK,其活性提高了140倍,45℃的热稳定性提高了2.7倍,并且其活性不受生物制品、NaCl和培养基的影响,能灵敏的快速检测单个细菌,可用于生物制品快速无菌检查。