COX-2/PGE2/EP4轴诱导巨噬细胞功能活化在NSCLC发展过程中的作用

背景与目的肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)是肿瘤发生、发展的重要因素之一,其中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)进展中起着重要作用。然而,TAMs在NSCLC发展过程中的作用机制仍不清楚,因此本研究旨在探讨TAMs在NSCLC发展过程中的作用,并寻找潜在的治疗靶点。方法使用GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库分析前列腺素E2受体4(prostaglandin E2 receptor 4,EP4)mRNA在NSCLC和正常肺组织中的表达情况;利用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)方法检测120例NSCLC组织及24例癌旁组织标本中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、EP4、分化簇86(cluster of differentiation 86,CD86)、CD163、CD31的蛋白表达水平;建立裸鼠肺腺癌细胞A549与巨噬细胞RAW264.7共移植瘤模型,使用EP4抑制剂E7046灌胃,收集样本行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)、IHC和免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色,免疫印迹(Western blot)检测各组裸鼠肿瘤组织上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)相关蛋白表达情况;全长转录组测序技术筛选引起肿瘤肝转移的关键基因并进行KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析。结果EP4 mRNA在NSCLC组织中表达水平普遍低于正常肺组织(P<0.05);COX-2、EP4、CD163、CD31蛋白在NSCLC组织和癌旁组织中差异性表达且在NSCLC患者多项临床病理参数中存在差异;RAW264.7缩短了A549的成瘤潜伏期,促进肿瘤增殖及肿瘤肝转移,E7046可降低裸鼠肿瘤细胞增殖活性、肿瘤组织血管密度及M2型巨噬细胞浸润;IF染色显示巨噬细胞主要分布在肿瘤转移灶周围;Western blot结果显示与A549单独移植组相比,A549与RAW264.7共移植组小鼠肿瘤组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)相对表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),N-钙黏蛋白(N-cadherin)相对表达量上调,但差异无统计学意义(P>0.05);全长转录组差异基因主要富集的通路为PI3K-AKT、MAPK信号通路。结论在NSCLC发生发展过程中,COX-2/PGE2/EP4轴可能通过诱导巨噬细胞功能活化来促进肿瘤的进展,EP4可能是具有潜力的肿瘤免疫治疗新靶点。本研究为深入探讨NSCLC的发生发展机制提供了新的视角和思路,同时为开发新的NSCLC治疗策略提供了理论依据。

腮腺透明细胞型嗜酸细胞腺瘤1例

腮腺嗜酸细胞腺瘤是一种涎腺良性肿瘤,其发病率低,既往文献少有报道,而以透明细胞为主型的嗜酸细胞腺瘤病例报道更为少见。该肿瘤临床表现及影像学检查无特异性,在诊疗中与涎腺其他肿瘤如嗜酸细胞癌以及转移性肾透明细胞癌鉴别困难,易导致误诊误治。为探讨涎腺透明细胞为主型嗜酸细胞腺瘤的诊断和治疗,提高对该肿瘤的临床病理组织学特征的认识,现报告1例腮腺透明细胞为主型嗜酸细胞腺瘤病例,并对以往相关文献进行回顾复习。

Ig/TCR基因重排分析联合EBER原位杂交检测在原发性胃肠道淋巴瘤诊断中的应用

目的探讨Ig/TCR基因重排分析联合EBER原位杂交检测在原发性胃肠道淋巴瘤(gastrointestinal lymphomas,GIL)中的诊断价值。方法选取常规石蜡包埋的GIL病理标本35例(包括成熟B淋巴细胞肿瘤29例,成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤6例),淋巴结反应性增生病变10例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析,并采用原位杂交方法检测EB病毒编码的小RNA(EBER)。结果 35例GIL中,共检测出34例克隆性重排。其中29例成熟B细胞淋巴瘤均扩增出Ig克隆性重排,敏感性为100%,且联合应用IgH与IgK引物Ig单克隆性重排的检出率最高;6例成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤中5例扩增出TCR克隆性重排,敏感性为83.3%;10例淋巴结反应性增生病例均未检测到Ig及TCR克隆性重排条带,其检测特异性为100%。29例成熟B细胞淋巴瘤及10例淋巴结反应性增生组织经EBER原位杂交检测均为阴性,6例成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤中2例EBER原位杂交检测阳性,且均为鼻型NK/T细胞淋巴瘤。结论 BIOMED-2标准化的基因重排分析系统检测石蜡包埋组织中Ig基因和TCR基因克隆性重排的敏感性和特异性均很高,对GIL的诊断和鉴别诊断具有重要的临床应用价值,EBER原位杂交检测对基因克隆性重排阴性的淋巴瘤也具有一定的辅助诊断作用。

T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用

目的探讨T细胞受体(T cell receptors,TCR)基因重排检测对T细胞性淋巴瘤诊断的价值。方法收集T细胞性淋巴瘤30例和淋巴反应性增生组织30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的56条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析结果。结果 30例T细胞性淋巴瘤标本中TCRβ、TCRγ、TCRδ的检出率分别为83.3%(25/30)、93.3%(28/30)、13.3%(4/30),三者联合检测的检出率为96.7%(29/30),30例淋巴反应性增生组织中均未检测出TCR基因重排。结论利用BIOMED-2引物系统检测TCR基因重排可作为T细胞性淋巴瘤的辅助诊断工具。

分子病理诊断的现状与思考

分子病理诊断是近年来发展起来的新技术,应用于遗传性疾病的诊断与分型、感染性疾病病原体检测、肿瘤易基因检测、肿瘤分子分型、药物伴随诊断和预后评估等领域,在疾病的诊断和治疗中起重要作用。我国从上世纪80年代起开展分子病理诊断,目前已应用于临床的分子病理技术有显色原位杂交、荧光原位杂交、PCR扩增、实时定量PCR、DNA测序等等,补充了传统病理诊断的不足,将病理诊断推向了新的高度。随着技术的转化,还将有更多的分子病理技术走向临床。但我国分子病理诊断存在发展不平衡、政策不配套、实验室建设不规范、质控监督不到位的问题,需要政府、医院、行业协会共同努力,促进其健康有序发展。

BIOMED-2引物系统检测T淋巴母细胞性淋巴瘤/急性淋巴细胞白血病中Ig/TCR基因重排

目的探讨BIOMED-2引物系统检测T淋巴母细胞性淋巴瘤(T lymphoblastic lymphoma,T-LBL)/急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)/T细胞受体基因(T-cell receptor,TCR)重排的敏感性,分析Ig/TCR基因重排方式。方法采用BIOMED-2引物系统扩增35例T-LBL/ALL中Ig/TCR重排基因,核酸分子异源双链凝胶电泳分析基因重排结果。结果 35例T-LBL/ALL中16例检测出TCR基因重排,检出率为45.7%,其中TCRβ单重排6例(37.5%),TCRγ单重排4例(25.0%),TCRβ和TCRγ双重排3例(18.8%),TCRδ单重排2例(12.5%),TCRγ和TCRδ双重排1例(6.3%)。4例患者同时检测出Ig和TCR基因重排,Ig基因检出率为11.4%。28例T-LBL中11例检测出TCR基因重排(39.3%),7例T-ALL中6例检测出TCR基因重排(85.7%)。结论利用BIOMED-2引物系统可检测出部分T-LBL患者的Ig/TCR基因重排,是一种辅助诊断工具。

荧光定量PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌

目的改进石蜡组织的处理,提高结核分枝杆菌在石蜡组织中检测的敏感性。方法选择荧光定量PCR检测石蜡组织结核分枝杆菌检测结果为临界值的蜡块标本,行HE染色、抗酸染色及荧光定量PCR石蜡组织结核分枝杆菌DNA检测。通过对其石蜡组织少修片、混合多个蜡块、选择干酪样坏死及肉芽肿病变较多的蜡块以及适量增加模板量的多种方法,对比其在荧光定量PCR法中的检出率。结果各实验组Ct值减小,扩增曲线均有不同程度的升高。结论改进操作措施后可以提高蜡块中结核分支杆菌检测的敏感度。

恒河猴、比格犬、树鼩、兔、大鼠及小鼠消化管的比较组织学

目的对恒河猴、比格犬、树鼩、日本大耳白兔、SD大鼠及昆明小鼠(KM小鼠)的消化管进行比较组织学研究,为实验动物病理学检测标准及以它们为基础的科学研究提供理论依据。方法选取按照现行实验动物质量国家检测标准检测合格的恒河猴30只、比格犬16只、树鼩20只、日本大耳白兔18只、SD大鼠20只及KM小鼠20只,经麻醉后处死并剖检。选取消化管组织经10%中性福尔马林固定,常规石蜡切片,行HE、免疫组化及特殊染色,光镜观察,比较它们在组织学结构方面的异同。结果所有动物直肠的组织学结构基本一致,下列部位组织学存在差异:(1)舌肌的排列方式及舌腺的组成类型,舌乳头发达程度及其内味蕾的多少;(2)食管黏膜表面上皮形态、有无食管腺及其组成类型、肌层的排列方式;(3)胃的大体结构,有无贲门腺、胃底腺及幽门腺等组织学结构,胃底表面上皮细胞形态及AB染色情况;(4)十二指肠、空肠及回肠黏膜下层的组织学结构;(5)结肠黏膜层组织学结构及部分实验动物的特有结构;(6)炎症是消化管普遍存在的自发性病变。结论 (1)通过对上述实验动物消化管的剖检及组织学观察,获得宝贵的组织学资料;通过比较分析,揭示了不同物种组织学特点和进化规律,丰富了比较组织学的研究资料。(2)消化管是与外界相通的开放性管道,易受外界影响而产生自发性病变。

Ig基因重排检测在B细胞性淋巴瘤诊断中的应用

目的探讨Ig基因重排检测在B细胞性淋巴瘤中的诊断价值。方法选取B细胞性淋巴瘤30例、淋巴组织反应性增生30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的47条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析Ig基因重排结果。结果 30例B细胞性淋巴瘤中检测出Ig克隆性重排,包括IGH(A+B)克隆性重排23例,IGK克隆性重排23例,IGL克隆性重排5例,IGH(A+B)+IGK克隆性重排30例,IGHA+IGK克隆性重排29例;在30例淋巴组织反应性增生中未检测到Ig克隆性重排。结论 Ig基因重排是诊断B细胞性淋巴瘤的有用工具。

膜式和沉降式宫颈液基细胞学制片方法的比较研究

目的分析评价膜式和沉降式宫颈液基细胞学制片方法和质量,以寻求提高宫颈液基细胞学制片质量的方法。方法对我院妇产科送检的液基细胞学标本310份行相关处理后加入原细胞保存液1倍体积的保存液,充分振荡后取一半标本保存液置入另一个干净的保存瓶中。2瓶标本保存液分别按照膜式和沉降式两种制片方法制作涂片,所有涂片均经95%乙醇固定后行改良巴氏染色,并于肉眼及光学显微镜下观察染色情况。结果肉眼观察膜式法所制涂片细胞分布不均,涂片周围细胞较多或较厚,部分区域细胞缺如或过厚;沉降式法所制涂片细胞分布均匀,有时细胞较厚,偶见较大细胞团块沉积。光学显微镜下见膜式法制作的涂片背景干净,细胞分布不均匀,涂片周围细胞较多或重叠严重,部分区域细胞缺如或重叠较多,有些细胞固缩明显,红细胞或炎细胞污染较少,染色不鲜艳;沉降式法制作的涂片背景尚干净,细胞分布均匀,有时细胞层次较多,细胞固缩或重叠较少,偶有红细胞或炎细胞污染,染色鲜艳。结论本研究中沉降式法制作宫颈液基细胞学涂片可控性较膜式法好,制片质量较高。

弥漫性大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白基因重排特点及规律研究

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)生发中心B细胞型(GCB)及非生发中心B细胞型(non-GCB)中Ig基因重排的特点及规律。方法采用免疫组化法检测46例DLBCL中CD10、BCL-6、MUM1表达,采用Hans免疫分型方法将DLBCL分为GCB和non-GCB;同时提取所有样本基因组DNA,利用BIOMED-2克隆分析系统进行PCR扩增Ig基因,核酸分子异源双链凝胶电泳分析基因重排情况,并以15例反应性增生病变作为阴性对照。结果46例DLBCL样本中GCB 12例、non-GCB 34例,其中45例样本扩增出Ig基因的克隆性重排条带,检测敏感性为97.8%,15例反应性增生病变均未检测到重排条带,检测特异性为100.0%。GCB和non-GCB重链IGH重排差异无统计学意义(P>0.05),但轻链IGκ-A、IGκ-B和IGλ重排差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GCB和non-GCB的Ig基因轻链重排条带分布具有显著的特点和规律,可为病理诊断和临床应用提供更为准确的依据。

石蜡包埋脱钙骨组织中结核杆菌DNA不同提取方法比较

目的探讨石蜡包埋的10%硝酸脱钙骨组织中简易有效的结核杆菌DNA提取方法并进行验证。方法以20例石蜡包埋、10%硝酸脱钙的坏死性肉芽肿炎疑为骨结核的组织标本为研究对象,常规法直接采用德国QIAGEN公司的QIAampDNA FFPE Tissue Kit方法提取DNA,而改良法中加入QIAampDNA Micro Kit试剂盒中的carrier RNA,以两种方法分别提取20例标本中结核杆菌DNA,通过荧光定量PCR,比较常规试剂盒提取法和改良提取法对结核杆菌检测结果的影响。结果改良法提取的DNA[(35.32±3.48)ng/μl]比常规法[(6.68±3.72)ng/μl]提取的DNA显著增多(P<0.05),改良法提取的DNA经荧光定量PCR检测结核杆菌的阳性率(55%)明显高于常规法(15%,P<0.01)。结论改良法提取石蜡包埋脱钙骨组织中结核杆菌DNA具有高效简便的特点,是较为理想的方法,值得在puncture和极微小石蜡样本中推广。

左腓骨伴有毛细血管扩张型骨肉瘤特征的成骨细胞型骨肉瘤1例

患者男性，13岁。1年前外伤后出现左腓骨头处疼痛不适伴活动受限。当地医院行x线及CT检查未见明显异常，保守治疗后患肢疼痛改善不明最并有加重。2013年12月于成都军区昆明总医院以“左腓骨上段骨肿瘤”收入院。查体：跛行入科．左小腿上段肿胀明显，局部皮肤稍红，皮温稍高，无破溃、出血及渗出，纵向叩击痛（＋），远端肢体感觉、血运可，踝关节不能背伸，足背动脉博动可触及，但较弱。

亚高原地区大、小鼠血液指标正常参考值实验研究

目的探讨亚高原地区SD大鼠和KM小鼠血液指标参考值及其变化规律。方法将2 w龄SD大鼠和KM小鼠各60只按饲养地区分为亚高原组(海拔1890 m)和平原组(海拔540 m),分别于4、6、10 w龄时检测血液常规指标,比较两组的差异。结果取得亚高原组不同周龄、不同性别SD大鼠和KM小鼠的血液学指标均值;亚高原组不同周龄和性别的SD大鼠和KM小鼠的RBC、WBC和WBC分类计数呈规律性变化:6 w龄时RBC和WBC随周龄增加而增加,10 w龄时下降;6 w龄时WBC分类计数以嗜中性粒细胞增高为主,10 w龄时以淋巴细胞增高为主;两组同周龄、同性别大鼠和小鼠Hb比较均未见统计学差异(P>0.05)。结论确定了亚高原地区不同周龄、不同性别SD大鼠和KM小鼠的血液学常规指标数据库,为该地区生物医学研究奠定了基础,也为亚高原地区KM小鼠和SD大鼠标准化鉴定和质量控制提供了可靠的依据。

高海拔地区FISH法检测乳腺癌HER2基因的方法改进

目的在高海拔地区改良并简化乳腺癌HER2 FISH法检测的预处理步骤,节省实验时间,扩大FISH检测试剂盒的临床应用。方法以10例HER2免疫组化染色结果为++以上的乳腺癌标本为研究对象,采用美国PanPath公司的HER2 FISH检测试剂盒,将其中的预处理步骤改良为高压煮沸处理,比较常规法与改良法对HER2基因扩增结果的影响。结果两种方法检测乳腺癌HER2基因的阳性率无统计学差异,并且均能使细胞间质完全消化,细胞或重叠或孤立,细胞核中红绿信号清晰。结论改良FISH法可以替代常规预处理步骤,简化了步骤,节省了时间,扩大了FISH检测试剂盒的临床应用。

人工饲养条件下死亡实验恒河猴肠道病理改变特点分析

目的观察人工饲养条件下实验恒河猴肠道病理改变,探讨实验猴肠道疾病分布规律和病理改变特点,丰富实验猴自发病变基本研究资料。方法对1998～2008年云南地区饲养的自然死亡的155只恒河猴(年龄2～20岁)的肠道进行病理检查,按年龄分为幼年组、成年组、老年组,并对观察结果进行统计学分析。结果 155例恒河猴中58例检出肠道病变,有慢性肠炎、急性肠炎、黏膜充血水肿、出血、糜烂、溃疡、穿孔、寄生虫共8种主要病变,出现率最高的为急性肠炎(20.00%)。实验猴不同年龄组肠道病变类型分布基本相同,肠道病变率随年龄增长而增高,不同年龄组间统计学分析差异无显著性。结论人工饲养条件下死亡实验猴肠道病变检出率较高,急性肠炎是实验猴的主要致死原因之一,实验猴肠道病理改变随年龄增长而病变加重。对实验猴饲养和研究时,应重视肠道病变因素,尤其是急性肠炎。死亡实验猴肠道病变研究对实验猴的质量控制和相关动物实验有重要指导价值。

EB病毒与乳腺癌的相关性

目的探讨EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)与乳腺癌发生、发展的相关性。方法随机选取不同发展阶段的乳腺病变组织246例,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、原位杂交(in situ hybridization,ISH)、激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)、免疫组化染色En Vision法检测EBV DNA、RNA、蛋白质水平,分析EBV与乳腺癌发生、发展的关系。结果免疫组化标记246例乳腺病变均未检测到EBV潜伏膜蛋白LMP1的表达。PCR法在乳腺癌(12/23)、原位癌(0/10)以及乳腺良性病变(0/15)中检测到EBV DNA,但用地高辛标记的EBV DNA探针对48例乳腺良、恶性病变组织(包括PCR扩增阳性的12例乳腺癌标本)进行ISH检测,在癌细胞、乳腺上皮细胞和间质淋巴细胞内均未检测到阳性杂交信号。采用LCM PCR检测12例PCR扩增阳性和12例阴性乳腺标本的乳腺上皮细胞和间质淋巴细胞,在12例PCR阳性标本的间质细胞中扩增出EBV DNA,癌组织中未检出EBV DNA。用EBV RNA探针和ISH方法在75例乳腺良恶性病变组织中均未检测到EBER表达。结论在该文选择的标本中,乳腺癌发生、发展与EBV感染无关。

亚高原地区大、小鼠生化指标正常参考值实验研究

目的探讨亚高原地区SD大鼠和KM小鼠血液生化指标变化规律,确立参考值。方法将2 w龄SD大鼠和KM小鼠各60只,按饲养地区分为亚高原组(海拔1890 m)和平原组(海拔540 m),分别于4、6、10 w龄时检测血液生化指标,比较两组肝功能、肾功能、血脂及血糖的差异。结果取得亚高原地区不同周龄、不同性别SD大鼠和KM小鼠的血液生化指标均值。亚高原组的肝功能指标普遍高于平原组,以谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白的改变为主(P<0.05);亚高原组肾功能指标也高于平原组(P<0.05),特别是习服时间越长,改变越明显;亚高原组血脂指标高于平原组(P<0.05);除平原组雄性KM小鼠血糖(GLU)高于亚高原组(P<0.05)外,其余亚高原组大、小鼠GLU均高于平原组(P<0.05)。结论建立了亚高原地区不同周龄、不同性别SD大鼠和KM小鼠的血液生化指标数据库,为该地区生物医学研究奠定了基础,也为亚高原地区KM小鼠和SD大鼠标准化鉴定和质量控制提供了可靠依据。

良性淋巴组织中Ig/TCR基因重排分析

目的探讨良性淋巴组织Ig/TCR基因重排特点,为临床病理诊断提供更为可靠的依据。方法选取淋巴结反应性增生、扁桃腺炎、阑尾炎淋巴组织标本各20例和正常人外周血淋巴细胞标本15例,提取DNA,利用BIOMED-2引物系统进行Ig/TCR PCR扩增和核酸分子异源双链凝胶电泳分析。结果 75例均扩增出与BIOMED-2克隆分析系统规定的单克隆性重排大小和范围一致的产物,分别是IGH-A的320 bp片段和IGH-C的130 bp片段,其中IGH-A占77.3%,IGH-C占76.0%。所有样品均扩增出BIOMED-2克隆分析系统规定的非特异性重排产物,全部为IGH-E的100 bp片段和211 bp片段。结论 BIOMED-2系统存在一定的非特异性产物,主要集中在IGH-A、IGH-C、IGH-E;正确认识非特异性产物可为病理诊断和临床应用提供更为准确的依据。

亚高原习服大、小鼠消化管组织学观察

目的探讨亚高原习服SD大鼠及KM小鼠消化管的组织学特征，为毒理学、新药安全性评价等提供依据。方法选取按照现行实验动物质量国家检测标准检测合格的SD大鼠20只、KM小鼠20只，按饲养地区分为平原组及亚高原组各10只，分别处死并剖检。选取消化管组织经体积分数10％甲醛固定，常规石蜡切片，HE染色，显微镜下观察组织结构和细胞的异同。结果（1）炎症是消化管普通存在的自发性病变，亚高原组炎症反应较平原组重。（2）亚高原组舌肌内链核增多，肌间隙增宽。（3）亚高原组小肠上皮黏膜内有杯状细胞化生。（4）亚高原组肌胃内更容易观察到肥大细胞浸润。其余组织学结构未见明显差异。结论SD大鼠与KM小鼠消化管组织学结构基本相同。亚高原组与平原组在消化管的组织学结构上存在一定的差异，主要表现为细胞和组织的适应性反应，研究人员在进行实验研究、药物安全性评价时应予充分考虑。