细粒棘球绦虫Innexin-unc9基因在不同发育阶段的表达分析

目的探究胆汁酸盐(胆盐)对细粒棘球绦虫(E.granulosus,E.g)发育分化的影响,分析E.gInnexin-unc9(EgInx)基因在体外有无胆盐-牛磺胆酸钠(Sodium taurocholate)培养的原头蚴(PSC)的表达水平,为研发犬抗E.g疫苗奠定基础。方法采用含与不含T4009(牛磺胆酸钠的商品型号缩写)的单相培养基分别进行PSC培养,在不同培养时间点对比分析PSC外翻率和发育状态;利用反转录荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blotting检测不同培养点样本的EgInx相对表达量。结果不同时间点平行培养的原头蚴外翻情况不同,在培养30 min时和10 d以后,无T4009组的PSC外翻率急剧下降;RT-qPCR结果显示:与从体内刚采集的PSC相比,其EgInx的表达量在培养30 min的T4009组较高,且此时T4009组表达量高于平行无T4009组,且差异具有统计学意义(P<0.05),培养到17 d时,得到类似的结果;Western Blotting和RT-qPCR结果一致。结论提示在有牛磺胆酸钠的环境中,E.gInnexin-unc9在关键节点表达升高,可能参与调控细粒棘球绦虫的生长发育。

新疆株细粒棘球蚴Innexin-unc9ORF的克隆鉴定及蛋白生物信息学分析

目的分子克隆新疆株细粒棘球绦虫缝隙连接通道蛋白(也称内联蛋白,EgInnexin unc9,EgInx)的完整开放阅读框(ORF)并鉴定,利用生物信息学软件分析该蛋白的分子特性,为进一步研究EgInx的功能和研制犬抗细粒棘球绦虫疫苗奠定基础。方法从新疆株细粒棘球蚴中扩增EgInx-ORF全长,克隆到pMD20-T上并测序;利用Expasy ProtParam、ProtScale、SignalP-5.0、TMHMM2.0、NetPhos3.1、ProtCompv9.0、NetSurfP-2.0和SOPMA、SWISS-MODEL等生物信息学分析软件分析EgInx的理化特性、信号肽序列、跨膜结构域、磷酸化位点、蛋白翻译后修饰位点及亚细胞定位、二级结构及三级结构;采用BLAST进行蛋白序列的同源性分析,采用Mega7进行系统进化分析。结果EgInx-ORF全长约1317 bp,编码438个氨基酸残基的EgInx蛋白;该蛋白等电点7.19,不稳定系数48.05,为不稳定蛋白;亲水性平均系数0.086,为疏水性蛋白,存在4个跨膜结构域;该蛋白不含信号肽序列,可能是非分泌跨膜蛋白。EgInx具有42个丝氨酸(Ser)磷酸化位点,29个苏氨酸(Thr)磷酸化位点,10个酪氨酸(Tyr)磷酸化位点;该蛋白有多个翻译后修饰位点,主要定位于细胞膜、高尔基体和线粒体。预测其二级结构以α-螺旋为主,占53.42%;三维结构以八聚体形式组装。EgInx与扁形动物门绦虫纲的多房棘球绦虫(Em)、小口膜壳绦虫(Hm),涡虫纲的东亚三角头涡虫(Dj),吸虫纲的中华枝睾吸虫(Cs)、日本血吸虫(Sj)的Innexin unc 9的氨基酸序列一致性分别为98.14%、58.97%、33.66%、33.11%、33.69%。进化树分析显示,EgInx与Em、Hm的Inx在一个分支上。结论成功克隆了EgInx-ORF,预测EgInx蛋白为疏水性跨膜蛋白,且含有多个磷酸化位点,可为EgInx的功能研究提供参考。

咔唑氨基醇化合物H1402对棘球蚴感染小鼠组织淋巴细胞及其亚群的影响

目的 分析咔唑氨基醇化合物H1402对棘球蚴感染小鼠的淋巴细胞及其亚群的影响。方法 分别采集细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫原头蚴,经肝门静脉接种建立感染小鼠模型。建模60 d后,分别用低剂量(50 mg/kg)和高剂量(80mg/kg)H1402每天灌胃干预两种棘球蚴病小鼠30 d。灌胃结束4周后留存肝组织观察病理变化,分离肝脏、脾脏和血液淋巴细胞,用流式细胞术检测小鼠组织淋巴细胞。结果 H1402治疗后棘球蚴感染小鼠肝脏病灶大小和数量减少,病理结果显示炎症反应减弱(P<0.05)。多房棘球蚴感染治疗组中,H1402高剂量组肝B细胞比例(24.35±7.46)%明显高于感染模型组(17.74±4.57)%(P<0.05);肝脏T细胞(1.15±1.14)%,包括Treg,CD4^(+)T,CD8^(+)T和活化的T细胞比例H1402高剂量组明显低于低剂量组(36.00±5.68)%(P<0.05)。脾脏T细胞比例H1402高剂量组(22.86±12.49)%显著低于低剂量组(46.29±7.22)%和感染模型组(42.16±7.44)%(P<0.05)。在血液中活化的T细胞比例,尤其是CD8^(+)T细胞比例H1402高剂量组(16.62±5.72)%显著低于低剂量组(34.63±5.06)%(P<0.05);B细胞比例尤其是活化的B细胞H1402低剂量组(0.32±0.06)%显著低于感染模型组(0.74±0.21)%(P<0.05)。细粒棘球蚴感染小鼠,肝脏T细胞,包括Treg和CD8^(+)T细胞均明显高于空白组,CD8^(+)T细胞比例H1402高剂量组(40.54±7.22)%显著高于模型组(9.88±5.93)%(P<0.05)。脾脏T细胞比例尤其是活化的T细胞均明显低于空白组(P<0.05)。血液淋巴细胞CD4^(+)T细胞比例H1402高剂量组(31.59±27.94)%显著降低(P<0.05)。结论 H1402对棘球蚴感染治疗有效,明显降低多房棘球蚴和细粒棘球蚴感染肝脏和脾脏的T细胞比例,多房棘球蚴感染小鼠药物干预后活化的CD4^(+)T细胞和活化的CD8^(+)T细胞比例上升,可能参与免疫调节,抑制多房棘球蚴的病理反应。

砷和雌激素水平与甲状腺乳头状癌的关联研究

目的分析砷和雌激素水平与甲状腺乳头状癌的关联,为预防甲状腺乳头状癌提供依据。方法选择2018年在新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市2家三甲医院治疗的57例甲状腺乳头状癌患者纳入病例组,同期57名甲状腺功能正常的健康体检者为对照;通过问卷调查收集研究对象的性别、年龄、民族、职业和甲状腺疾病史等资料。采用高效液相-氢化物发生原子分光光度法检测血清二甲基砷酸(DMA)和一甲基砷酸(MMA);采用放射免疫法检测血清甲状腺激素(TSH);采用酶联免疫吸附试验检测雌二醇(E_(2));采用蛋白质印迹法检测雌激素受体(ER)α和ERβ。采用多因素lo⁃gistic回归模型分析砷和雌激素与甲状腺乳头状癌的关联。结果病例组男性16例,占28.07%;女性41例,占71.93%;年龄为(42.63±11.01)岁。对照组男性21人,占36.84%;女性36人,占63.16%;年龄为(40.89±11.30)岁。病例组与对照组的年龄(χ^(2)=0.373,P=0.542)、性别(χ^(2)=1.000,P=0.317)和民族(χ^(2)=0.291,P=0.590)构成差异均无统计学意义。病例组血清TSH、E_(2)、ERα、ERβ、DMA和MMA分别为2.85(1.61)μmol/L、74.93(120.44)pmol/L、1.49(1.13)、1.59(0.55)、116.02(100.48)μg/L和56.92(47.90)μg/L,均高于对照组的2.45(1.79)μmol/L、61.60(37.35)pmol/L、0.70(0.31)、0.72(0.36)、32.33(56.06)μg/L和27.90(24.99)μg/L,差异有统计学意义(Z=-2.414、-2.292、-4.923、-5.167、-5.448、-4.019,均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,DMA(OR=1.013,95%CI:1.003~1.024)和E_(2)(OR=1.020,95%CI:1.004~1.036)水平与甲状腺乳头状癌患病存在统计学关联。结论砷负荷增加、E2水平升高可能与甲状腺乳头状癌的发生发展有关。

Innexin在生物体中的研究进展

缝隙连接蛋白或称内联蛋白(innexin,Inx;connexin,Cx和pannexin,Px)存在于无脊椎或脊椎动物体内并构成细胞之间的缝隙连接(gap junction,GJ),或在细胞膜上形成半通道,其生物学功能主要表现在细胞间信号(电和化学)交流、物质运输及离子交换等方面。近年来研究发现缝隙连接蛋白Inx在物种进化中有着密切的关系,同一个体存在多种异构体,而在不同的物种有相同基序,编码Inx的基因(Inx或inx)的表达对生物个体周期中(特别是生命早期)有着非常重要的作用,主要是在卵子形成、胚胎发育及中枢神经发育中表达程度较高。然而Inx在无脊椎动物(主要是节肢动物和蠕虫)中的种类与作用缺乏系统的阐述,我们主要综述Inx基因及其表达的蛋白在节肢动物和蠕虫体内的种类、生物学结构及功能,Inx蛋白有望成为寄生虫病防治的干预靶点,为寄生虫病的防治提供新思路。