鸡抗人B7同源物4(B7-H4)IgY多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗人B7同源物4(B7-H4)IgY多克隆抗体,建立合适的双抗体夹心ELISA检测人血清中可溶性B7-H4(sB7-H4)蛋白。方法筛选人源B7-H4蛋白合适的B细胞表位肽免疫新海兰灰蛋鸡,收集鸡蛋纯化鸡抗人B7-H4 IgY抗体;检测抗体的纯度、浓度及效价,并用ELISA、Western blot、流式细胞术验证抗体的特异性和功能;建立双抗体夹心ELISA法并检测临床样本;同时采用商品化的ELISA试剂盒对相同样本进行对比检测。结果制备了鸡抗人B7-H4 IgY抗体并证明该抗体对人B7-H4蛋白有高特异性;采用该抗体检测临床样本发现卵巢癌和良性卵巢肿瘤患者血清中sB7-H4含量明显高于健康人,这与使用商品试剂盒获得的检测结果一致;采用IgY抗体建立的ELISA灵敏度高于商品试剂盒。结论成功制备了鸡抗人B7-H4 IgY多克隆抗体,并用其建立了一种适合检测人血清中sB7-H4蛋白的双抗体夹心ELISA。

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨等位基因频率分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1 5位点在高分辨基因分型水平上的等位基因频率特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用直接计数法计算各位点基因频率。结果在718名捐献志愿者中,共检出28个HLA-A等位基因、61个HLA-B等位基因、30个HLA-C等位基因、40个HLA-DRB1等位基因、18个HLA-DQB1等位基因;其中HLA-A位点最常见等位基因为A*1101(21.66%)、A*2402(16.37%)、A*0201(13.79%);HLA-B位点最常见等位基因为B*4001(11.49%)、B*4601(9.54%);HLA-C位点最常见等位基因为Cw*0702(15.74%)、Cw*0102(15.32%)、Cw*0304(11.56%);HLA-DRB1位点最常见等位基因为DRB1*0901(14.69%)、DRB1*1501(12.40%)、DRB1*0701(9.89%);HLA-DQB1位点最常见等位基因为DQB1*0301(20.54%)、DQB1*0303(15.81%)、DQB1*0601(10.79%)。结论本研究在高分辨基因分型水平提供了一套有关中国人群HLA-A,-B,-C,-DRB1和-DQB1 5位点基因频率数据。

黄芩甙对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

采用Ｃａ２＋指示剂Ｆｕｒａ２作为细胞内钙离子的荧光探针，用荧光分光光度计检测了黄芩甙对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞内游离钙浓度Ｃａｉ＋２的影响。结果表明，随黄芩甙浓度的增加，可剂量依赖性地显著降低平滑肌细胞静息Ｃａｉ＋２，并显著抑制去甲肾上腺素和高Ｋ＋引起的细胞Ｃａｉ＋２的升高，提示黄芩甙可通过阻断平滑肌细胞膜上的电压依赖型钙通道和受体操纵型钙通道，抑制细胞Ｃａｉ＋２的增高，这可能与其降压作用机制有关。

黄芩甙对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤的保护作用

利用异丙肾上腺素造成大鼠急性心肌缺血模型，观察黄芩甙对大鼠缺血心肌的保护作用。２８只Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为正常对照组、缺血模型组、黄芩甙Ⅰ组、黄芩甙Ⅱ组。观察黄芩甙对各组大鼠心电图、血清磷酸肌酸激酶及心肌组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和脂质过氧化物丙二醛（ＭＤＡ）的影响。结果表明，黄芩甙可对抗异丙肾上腺素所致大鼠急性心肌损伤，使心肌缺血大鼠的心电图ＳＴ段异常抬高数减少，血清磷酸肌酸激酶（ＣＰＫ）降低，并可增加心肌组织ＳＯＤ的活力，减少ＭＤＡ生成。提示黄芩甙对大鼠心肌缺血有保护作用，其机制可能与抗脂质过氧化反应有关。

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨单体型频率初步分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB15位点在高分辨基因分型水平上的单体型频率及连锁不平衡特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用Arle-quin3.1软件以最大似然法分析单体型频率。结果双座位连锁不平衡分析显示,HLA-C与HLA-B、HLA-DRB1与HLA-DQB1呈现较为显著的连锁不平衡;多位点单体型频率分析结果显示,最常见的2、3、4、5位点单体型分别为:A*0207-B*4601(7.34%)、Cw*0102-B*4601(8.71%)、B*1302-DRB1*0701(6.19%)、DRB1*0901-DQB1*0303(14.27%)、A*3001-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、A*0207-B*4601-Cw*0102(7.06%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(6.12%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(5.29%)。结论本研究提供了中华骨髓库718名捐献者HLA5位点高分辨单体型频率遗传学数据,将为临床寻找HLA匹配的无关供者、法医学鉴定、HLA与疾病相关研究等提供分子遗传学参考。

2009-2014年全国HLA低分辨基因分型检测室间质量评价结果分析

目的为进一步提高全国临床实验室人类白细胞抗原(HLA)基因分型检测水平提供有价值的参考。方法利用常规统计方法归纳总结2009-2014年全国医疗机构和商业临床实验室HLA低分辨基因分型检测室间质量评价(EQA)结果,分析在连续6年的EQA活动中,回报结果的错误率、错误类型以及导致错误结果的原因。结果2009-2014年全国参加HLA低分辨基因分型检测EQA项目的临床实验室数目从63家增至83家;在连续6年EQA活动中,回报HLA分型数据共计7 836份,总体错误率为2.12%(166/7836);2009-2014年每年出现错误的实验室比例分别为1.59%(1/63)、11.48%(7/61)、0.00%(0/69)、2.74%(2/73)、2.82%(2/71)、10.84%(9/83);连续6年EQA活动中错误数据共计166份,主要包括HLA基因分型错误23份、血清型和基因型混淆错误14份、录入错误108份,漏报错误21份。结论目前我国临床实验室HLA低分辨基因分型整体检测水平仍不容乐观,错误比例过高;反映了从业人员在HLA基因分型技术上和规范化管理上存在不容忽视的问题。

阿尔茨海默病动物模型的概况(综述)

阿尔茨海默病(AlzheimerDisease,AD)是一种进行性神经退行性疾病,关于AD的病因有多种学说,并依据其病因建立了多种动物模型。该文就目前各种动物模型及其优缺点作一综述。

葛根素对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤的保护作用

采用异丙肾上腺素造成大鼠急性心肌缺血模型 ,观察葛根素对大鼠心电图、血清磷酸肌酸激酶 (CPK)、心肌组织超氧化物歧化酶 (SOD)和脂质过氧化物丙二醛 (MDA)的影响。发现葛根素可对抗异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠的心电图ST段的异常升高 ,使血清CPK降低 ,并可增加心肌组织SOD的活力 ,减少MDA生成。提示

黄芩甙对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用

采用大鼠心肌缺血再灌注模型观察黄芩甙对缺血再灌注后心律失常和心肌损伤的保护作用。实验大鼠分为假手术组、缺血再灌注组、黄芩甙I组、黄芩甙II组和维拉帕米组。观察对各组大鼠心电图、血清磷酸肌酸激酶(CPK)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)及心肌组织内超氧化物歧化酶 (SOD)、脂质过氧化物丙二醛 (MDA)的影响。结果表明 ,黄芩甙可显著减少再灌注性心律失常发生率 ,降低CPK活性和MDA含量 ,升高SOD和GSH PX活性。提示黄芩甙对再灌注心肌具有保护作用 。

银杏叶注射液对实验性大鼠局灶性脑缺血的保护作用

以行为障碍、脑梗死范围、脑含水量、脑组织病理改变为观察指标，研究银杏叶注射液（ＧＢＥ）对大鼠大脑中动脉闭塞所致局部脑缺血的防治作用。结果表明，ＧＢＥ２０、４０ｍｇ／ｋｇ静脉注射可显著降低大鼠脑梗死范围和脑含水量，改善行为障碍。脑组织形态学检查显示，ＧＢＥ４０ｍｇ／ｋｇ组动物脑组织缺血病变较轻。提示ＧＢＥ对局灶性脑缺血具有保护作用。

快速老化痴呆模型小鼠SAMP8学习记忆能力的增龄性变化

目的对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8学习记忆能力的增龄性变化进行较系统的研究,为利用该模型进行其他研究提供实验依据。方法此实验选用1、4、8、12月龄的快速老化痴呆模型小鼠SAMP8,与同龄的正常老化小鼠SAMR1作对照,从老化度评分、避暗实验、Morris水迷宫实验和自主活动实验等方面观察了SAMP8小鼠学习记忆能力的增龄性变化。结果与对照组SAMR1相比,SAMP8小鼠随月龄增加老化度评分呈增高趋势,在8、12月龄的老化度评分值显著高于同龄对照组(P<0.05);避暗实验中,8、12月龄的SAMP8小鼠在电击24h后进入暗箱的潜伏期比同龄SAMR1小鼠显著缩短(P<0.05);Morris水迷宫实验中,1、4月龄SAMP8小鼠找到暗台的潜伏时间与同龄SAMR1小鼠相比差异无显著性,而8、12月龄SAMP8小鼠与同龄对照组相比,潜伏时间显著延长(P<0.05);从自主活动实验看,1、4、8月龄SAMP8小鼠单位时间内自主活动次数与同龄SAMR1小鼠相比无显著变化,而12月龄SAMP8小鼠与同龄对照组相比单位时间内自主活动次数显著减少(P<0.05)。结论SAMP8小鼠随月龄增长学习记忆能力逐渐减退;与同龄对照组相比,8、12月龄SAMP8小鼠出现明显衰老特征,表现出学习记忆能力明显低下,故可作为老化痴呆的动物模型用于痴呆有关研究。

2006-2014年中华骨髓库HLA基因分型抽检质量评价结果分析

目的总结分析2006-2014年中华骨髓库志愿者HLA基因分型抽检质量评价结果,为提高中华骨髓库入库数据的HLA基因分型质量提供参考依据。方法针对2%的随机抽检标本进行HLA基因分型复核,与入库时分型数据进行比对,统计分析各实验室HLA基因分型的错误率。结果 1)2006年1月-2014年11月,实际抽检来自全国31家HLA基因分型实验室的32 154份检测标本(2.0%);2)2009-2014年抽检标本的中、高分辨基因分型数据比例逐年增加,从2012年,起高分辨基因分型数据占每年抽检标本总数的90%以上;3)2010-2014年抽检标本中5位点HLA基因分型数据入库比例逐年增加,2014年度HLA 5位点基因分型数据占全年抽检标本总数的50%以上;4)2006-2014年全部抽检标本基因分型总错误率评价结果显示,在2006年和2010年出现2次错误率高峰,2006-2009年低分辨分型数据的错误率由1.14%降至0.19%;2010-2014年中、高分辨基因分型数据的错误率由0.51%降至0.17%;5)2006-2014年,各HLA基因分型实验室的抽检标本基因分型平均错误率评价结果显示,有2家实验室连续错误率超标(>2%)。结论 HLA基因分型抽检数据质量评价项目对中华骨髓库志愿者HLA基因分型数据错误率的降低发挥了积极作用。

MTH2蛋白与8-氧鸟嘌呤脱氧核苷在阿尔茨海默病患者海马组织中的表达变化

目的:观察8-氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(MTH2)及8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxodG)在阿尔茨海默病(AD)患者海马组织标本中的表达变化,探讨在AD患者海马中二者表达的相关性。方法:选用临床及病理均诊断为AD的尸检海马组织石蜡切片作为实验组,年龄匹配且临床及病理诊断均排除AD的尸检海马组织石蜡切片作为对照组,每组各3例,用免疫组化的方法分别检测人脑海马中8-oxo-dG的含量及MTH2蛋白的表达。结果:免疫组化定量结果显示,在人脑海马组织CA1及CA3区,AD患者8-oxo-dG的表达显著高于年龄匹配对照组,而AD患者MTH2的表达显著低于年龄匹配的对照组。结论:在人脑海马组织中,DNA氧化产物8-oxo-dG含量在AD患者比年龄匹配对照组有显著提高,抗氧化修复蛋白MTH2的表达量却显著降低,提示人脑海马组织中MTH2蛋白表达量的减少及8-oxo-dG含量的增加与AD的发病过程相关。

一寻常型银屑病家系的HLA等位基因分析

目的分析北方一寻常型银屑病家系的发病与HLA-A、B、DRB1等位基因的相关性。方法采用序列特异性寡核苷酸探针-聚合酶链反应(PCR-SSO)方法检测一北方家系16人的HLA-A、B、DRB1等位基因。结果家系中共有6人患寻常型银屑病,其中4个早发寻常型银屑病患者(Ⅱ-2、Ⅱ-4、Ⅲ-1、Ⅲ-5)发病均在30岁以前,B位点均为B*13、DRB1位点均为DRB1*07;家系中有6人携带单倍型11-15-15,其中4人发病(Ⅰ-2、Ⅱ-2、Ⅱ-4、Ⅲ-1),年龄稍小的2人未发病(Ⅲ-3、Ⅲ-4)。结论此家系中寻常型银屑病的发病涉及多个易感位点,携带B*13-DRB1*07基因的早发病者可能与对遗传因素和/或环境因素敏感性增加有关;易感单倍型携带者的发病受环境因素和/或其他易感因素的影响。

MTH2和MTH3蛋白在快速老化模型鼠SAMP8胸腺中增龄性表达的比较研究

目的检测抗核酸氧化酶蛋白MTH2和MTH3在快速老化小鼠SAMP8胸腺中的表达,探讨其与SAMP8增龄性变化的相关性。方法选用1、4、8、12月龄的SAMP8小鼠及同龄的抗快速老化小鼠R1(SAMR1)作为实验对象。采用免疫印迹法检测胸腺中MTH2和MTH3蛋白的表达。结果免疫印迹结果显示,在SAM鼠胸腺中MTH3蛋白的表达量均显著高于MTH2。定量结果显示,1、4、8、12月龄的SAMP8胸腺中MTH3表达的灰度值(grey level)分别为0.546、0.322、0.207、0.164,显著低于同龄SAMR1(P<0.05),而MTH2在SAMP8和SAMR1胸腺中的表达却没有显著性差异(P>0.05)。与同组1月龄小鼠相比,MTH3在4、8、12月龄的SAMP8鼠胸腺中的表达量分别下降41%、62%、70%;在SAMR1鼠中分别下降19%、43%、67%,差异有统计学意义(P<0.05)。而MTH2在SAMP8和SAMR1胸腺中的表达也存在相同的增龄性下降的变化趋势(P<0.05)。结论MTH2和MTH3蛋白在SAMP8和SAMR1小鼠胸腺中的表达量均呈增龄性下降,提示MTH2和MTH3蛋白表达量的减少在SAM鼠胸腺的衰老过程中具有重要意义,其中MTH3蛋白表达量的减少可能与SAMP8小鼠胸腺的快速衰老密切相关。

基于血清胸苷激酶1的甲状腺异常增殖风险预测模型的构建

目的:为减少甲状腺癌诊疗领域存在的过度诊断现象,开发一种基于体检数据进行甲状腺异常增殖风险的数学预测模型。方法:研究数据来源于福建泉州中国人民解放军第910医院健康管理中心,分析研究了血清胸苷激酶1(STK1)与甲状腺影像报告及数据系统(TI-RADS)分级的相关性。以TI-RADS分级作为终点事件,以STK1检测结果联合常规体检指标为自变量,通过不平衡类学习算法(IKIL)构建了甲状腺异常增殖风险的风险预测模型,并绘制受试者工作特征曲线(ROC),以评价此模型在受检者甲状腺异常增殖风险评估中的应用价值。结果:K-S检验结果显示STK1值呈偏态分布。由Kruskal-Wallis检验可知,随着TI-RADS分级数的升高,STK1水平呈现单调递增趋势。从TR-1进展到TR-2时细胞增殖水平显著增加;在TR-2到TR-4区间,细胞增殖水平存在升高趋势,但相邻级别之间差异并不显著。通过IKIL法获得的甲状腺增殖风险指数公式为:y=-3.50+0.29×STK1+0.06×总蛋白+0.01×乳酸脱氢酶-0.0046×尿酸-1.35×高密度脂蛋白胆固醇+0.34×CEA,该模型的ROC验证AUC值为0.848,标准误差0.00925,95%置信区间为(0.827,0.865)。Youden指数最大的增殖风险指数为0.52,使用该点为阈值预测甲状腺异常增殖风险的敏感性、特异性分别为66.98%、94.22%,提示风险预测模型对甲状腺异常增殖风险具有较好地预测能力。结论:研究开发了基于STK1水平联合其他体检指标对受检者的甲状腺异常增殖风险的预测模型。该风险预测模式的限制条件少,可操作性强,对社会自然人群的甲状腺结节/肿瘤的健康管理具有较好现实意义。

2005年至2008年全国HLA低分辨基因分型检测室间质量评价结果分析

目的 总结并分析2005年至2008年全国医院临床实验室HLA低分辨基因分型检测室间质量评价（EQA）结果，为进一步提高临床实验室HLA基因分型检测水平提供有价值的参考。方法根据HLA低分辨基因分型检测的特点，用常规统计方法归纳了连续4年EQA活动的结果，分析了近4年EQA活动中回报结果的错误率以及导致错误结果的可能原因。结果2005年至2008年，参与HTJA低分辨基因分型检测EQA项目的临床实验室从22家增加到61家；连续4年EQA活动中回报数据共计2844份，总体错误率为1．05％（30／2844）；每年出现错误的实验室比率分别为13．6％（3／22）、10．7％（3／28）、10．6％（5／47）、16．4％（10／61）；连续4年EQA活动中错误数据共计30份，错误类型主要包括HIA基因分型错误25份、人为错误5份。结论目前我国临床实验室HLA低分辨基因分型检测错误的比例过高；由于错误类型以基因分型错误和人为错误为主，反映了从业人员在HLA基因分型技术上存在不容忽视的问题。

磁捕法对传染性非典型肺炎冠状病毒RNA富集体系的初步研究

目的 初步研究建立磁捕法对传染性非典型肺炎又称严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒RNA的富集、纯化体系,以提高逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SARS冠状病毒RNA的敏感性。方法 根据国际基因库公布的SARS冠状病毒基因序列,自行设计引物、探针,体外克隆目的RNA片段作为标准物质;利用标准RNA以及模拟SARS血清标本的RNA,评价自行设计的SARS冠状病毒巢式RT-PCR检测体系和磁捕法SARS冠状病毒RNA富集检测体系的检测效果。结果SARS冠状病毒巢式RT-PCR检测体系,对于模拟血清SARS标本RNA的最低检测样本浓度为20拷贝/μl,而磁捕法SARS冠状病毒RNA富集检测体系的最低检测样本浓度为1拷贝/μl。结论 初步建立的磁捕法SARS冠状病毒RNA富集检测体系,可有效地对低浓度的RNA样本进行浓缩、纯化,有效提高SARS RT-PCR检测方法的敏感性。

共享科技新创意 搭建检验医学发展平台

随着基础医学和临床医学的发展,检验医学作为“古老”而又“新兴”的综合学科在临床诊断工作中发挥着越来越重要的作用。先进的高新技术和现代化仪器的广泛应用,特别是20世纪末,数理科学在生物学领域广泛渗透,在结构基因组学、功能基因组学和环境基因组学蓬勃发展的形势下,分子诊断学技术取得了突破性进展。这些工作正逐步从实验室基础研究进入临床实践,也给检验医学带来崭新的领域,为学科发展提供了新的机遇,同时也使检验医学的管理模式和人才结构发生了根本变化。