香鱼HSP90β的克隆、序列特征及表达分析

热休克蛋白(Heat Shock Proteins,HSPs)是一种分子伴侣,具有广泛的生物学活性。从香鱼(Plecoglossus altivelis)肝c DNA文库获得HSP90β亚型(Pa HSP90β)c DNA全序列。Pa HSP90β全长2726 bp,包含1个由2175 bp组成的开放阅读框,编码724个氨基酸,预测相对分子质量为83.30 ku,等电点为4.83。氨基酸序列分析显示,Pa HSP90β含有HSP90的5个保守信号区,氨基酸序列第34~188处具有HATPase(histidine kinase-like ATPases)结构域;与白鲑(Coregonus lavaretus)HSP90β亲缘关系最近,氨基酸序列同源性高达95.8%。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,q PCR)结果表明,Pa HSP90βmRNA主要在香鱼中表达量最高,脾脏次之。镉胁迫后,香鱼肝、脾、肾、鳃和肠组织中Pa HSP90βmRNA表达显著上调;盐度胁迫后,除肠组织外,其他组织中Pa HSP90βmRNA表达总体显著上调。综上,Pa HSP90β与重金属及盐度胁迫密切相关,可能参与鱼类抵抗环境胁迫的生理过程。

香鱼ApoC-Ⅰ的克隆、序列分析及其镉胁迫下的表达

载脂蛋白C-Ⅰ（Apolipoprotein C,ApoC-Ⅰ）是载脂蛋白家族中分子质量最小的成员,在脂类摄入、转运和分泌中发挥重要作用。通过c DNA文库随机测序获得了香鱼（Plecoglossus altivelis）ApoC-Ⅰ（Pa ApoC-Ⅰ）全长c DNA序列。Pa ApoC-Ⅰ由574个核苷酸组成,包含一个长度267 bp的开放阅读框,编码88个氨基酸,预测分子量为10.08 ku,N-末端1-20位氨基酸残基为信号肽序列。氨基酸序列多重比对结果表明,Pa ApoC-Ⅰ与虹鳟（Oncorhynchus mykiss）ApoC-Ⅰ同源性最高,为67.0%;系统进化树分析表明,哺乳动物、爬行动物、两栖类和鱼类的ApoC-Ⅰ分别成簇,Pa ApoC-Ⅰ位于鱼类ApoC-Ⅰ簇中,且与虹鳟ApoC-Ⅰ进化相关性最高。基因组结构分析表明,Pa ApoC-Ⅰ基因组DNA序列由2个内含子和3个外显子组成。实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）结果显示,Pa ApoC-ⅠmRNA表达量在香鱼肝组织中最高,镉胁迫后在肝、脾、肾和肠中显著上调,在鳃中表达量显著下调。综上,Pa ApoC-Ⅰ的表达与镉胁迫密切相关,可能作为水环境中重金属镉污染的生物分子标记。研究结果为进一步研究鱼类ApoC-Ⅰ的功能及其在重金属胁迫中的作用机制提供了基础资料。