肺癌患者外周血中表面活性蛋白D mRNA的表达及临床意义

背景与目的:循环癌细胞的灵敏检测对于肺癌患者的预后及选择合适的治疗方法很重要。为此,我们建立了利用表面活性蛋白D(surfactantproteinD,SP-D)作为基因标志的RT-PCR方法,检测肺癌患者外周血中的癌细胞,并初步探讨其临床意义。方法:采用优化的套式RT-PCR方法,对26例伴肺外转移肺癌患者,37例无转移肺癌患者,15例良性肺疾病患者及15例健康志愿者外周血中SP-DmRNA的表达进行分析。结果:1)该方法灵敏度可达1×10-6,特异性强;2)采用此方法,伴肺外转移和无转移肺癌患者外周血中SP-DmRNA的检出率分别为92.3%(24/26)和24.3%(9/37),所有良性肺疾病患者和健康对照外周血中均未见SP-DmRNA的表达。结论:SP-DmRNA可能是检测肺癌患者外周血中是否存在癌细胞的一个有价值的指标,对肺癌的转移倾向有一定的提示作用,并有可能为制定治疗方案和评估预后提供重要的参考依据。

三种特殊群体血清中SARS抗体检测分析

目的 了解新生儿、1～10岁儿童以及与SARS患者密切接触的医护人员血清中出现SARS病毒抗体的情况,并加以分析。方法 应用间接ELISA法,对15例新生儿、30例1～10岁儿童以及我院50例在SARS病房工作15天以上的医护人员的血清进行了SARS相关冠状病毒抗体IgM、IgG水平的检测。结果 15例新生儿以及50例医护人员中未检测到SARS抗体IgM、IgG,30例1～10岁儿童中,检测出3例SARS抗体IgG阳性,阳性率为10％,无一例SARS抗体IgM阳性。结论 我院一线医护人员中可能无SARS病者隐性感染者,儿童中SARS抗体IgG阳性率较高,这可能是此次SARS爆发中儿童感染率较低的原因之一。

肝硬化患者外周血内毒素水平及其临床意义

体循环内毒素血症在各种严重肝病，尤其是肝硬化时发生率很高，影响病情发展及预后〔１〕。本文应用鲎试剂改良基质显色法，定量检测了５０例肝硬化患者、３０例乙型肝炎患者及２０例同期无肝脏疾病、肝功能正常的胃肠疾病患者的外周血内毒素水平。结果显示，肝硬化患者内毒素水平显著增高。

RT-PCR检测外周血中肺癌细胞的研究进展

外周血循环中癌细胞的检测是判断肺癌患者复发、转移和疗效的有价值指标 ,应用RT PCR技术检测外周血中肺癌细胞是近年发展起来的新方法 。

利用基因芯片分析拉米夫定治疗过程中HBV DNA的基因变异

依据乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus;HBV)聚合酶基因序列研制HBV基因芯片,此芯片可分析HBV的7个基因型、4种血清型和HBV聚合酶基因rtV173、rtL180、rtM204和rtV207位点的突变。利用此芯片对A、B两组共计45例拉米夫定治疗12个月的患者进行服药前和服药后3、6、9、12个月的动态检测,其中C基因型39例,且血清型均为adr:B基因型6例,其血清型均为adw。在完成全程检测的38例患者中,17例ALT升高的A组出现1例拉米夫定耐药变异株,而21例ALT正常的B组出现4例变异株,且所有变异株均为rtM204V/rtL180M,其中2例野生株和变异株共存。rtM204V变异最早在服药6个月时出现,随后出现rtL180M变异。10份PCR产物测序分析表明,芯片检测结果与测序结果基本一致,仅在rtL173位点出现1例差异。进一步分析HBV DNA变异与HBV DNA含量、ALT水平和HBeAg血清转换率的相关性,初步结果表明变异株的出现与治疗过程中的DNA反弹呈正相关,而与起始HBV DNA水平、ALT值无关联。HBV基因芯片可初步用于HBV DNA 检测,可能是临床追踪评价抗病毒治疗效果的较好方法之一。

p16真核表达载体的构建及其对肝癌细胞的作用

研究p16基因对肝癌细胞的作用;构建pcDNA3.0/p16真核表达质粒转导到大鼠肝癌细胞CBRH-7919中,对其p16基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析;转染细胞p16蛋白免疫组化阳性,MTY法结果显示,50×103/cm2细胞经培养24h～96h后,每组细胞数均有不同程度的增加,但经pcDNA3.0/p16转染的CBRH-7919细胞数比对照明显减少。与空白对照比,细胞在24h,48h,72h和96h的生长抑制率分别为29％,29％,40％和52％,流式细胞仪检测细胞周期显示经pcDNA3.0/p16转染的CBRH-7919细胞有显著的细胞凋亡现象和G0/G1期阻滞。pcD-NA3.0/p16真核表达质粒转导到大鼠肝癌细胞CBRH-7919中能够抑制细胞的增殖活性,p16基因可能通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用。

利用组织芯片技术分析肝细胞癌组织P21^(WAF1/CIP1)、PCNA和Ki-67的表达及意义

利用组织芯片技术检测P2 1WAF1/CIP1、PCNA与Ki - 6 7在肝细胞癌组织中的表达与分布 ,初步探讨P2 11WAF1/CIP1、PCNA与Ki- 6 7在肝细胞癌发生机制以及预后评估方面的作用。采用免疫组化技术结合临床病理资料检测了 6 1例肝癌和 5 0例癌旁组织的P2 1WAF1/CIP1、PCNA、Ki- 6 7的表达情况。PCNA和Ki- 6 7表达与肝癌的分化程度相关 ,PCNA与肝癌的侵袭转移潜力有关 (P <0 0 5 ) ,P2 1WAF1/CIP1在实验中未见有明显差异 ,但在表达程度与肝癌组织的分化程度之间亦存在着一定的相关关系。应用组织芯片高效检测临床组织样本具有快速、方便、经济、准确的优点。P2 1WAF1/CIP1、PCNA与Ki- 6

丙型肝炎病毒基因分型芯片的研制和临床应用

目的 研制丙型肝炎病毒 (HCV)基因分型的寡核苷酸探针芯片 ,并用此方法对 76例HCVRNA阳性的肝炎患者进行检测。方法 根据HCV 5′ 非编码区和核心抗原区序列设计聚合酶链反应 (PCR)引物和寡核苷酸探针 ,探针经一定修饰后固定到尼龙膜上 ,即成为HCV基因芯片。采用PCR参入法标记地高辛分子 ,其中 6份标本PCR产物同时进行测序分析。结果 此芯片可分析HCV 11个基因型的 15种亚型。 76例HCV肝炎患者芯片杂交结果均阳性 ,而 2 0名健康对照血清均阴性。 76例患者阳性标本的分型结果 :1b型 6 4例 ,2a型 11例 ,3a型 1例 ,未见混合型感染。 6份标本的序列分析表明 ,芯片杂交和测序的分型结果完全一致。结论 此芯片可初步用于检测血清HCVRNA ,并对HCV基因 (亚 )

应用组织微阵列技术检测肝癌中血管内皮生长因子及P16和P53的表达及意义

目的 利用组织芯片技术检测肝癌中血管内皮生长因子及P16 ,P5 3的表达 ,初步探讨血管内皮生长因子及P16 ,P5 3的表达在肝细胞癌发生机制以及预后评估方面的作用。方法 采用免疫组化技术结合临床病理资料检测 6 1例肝癌和 5 0例癌旁组织的VEGF及P16 ,P5 3的表达情况。结果 VEGF ,P16和P5 3的表达与肿瘤的恶性程度密切相关。在癌旁组织中 ,P16蛋白全表达 ,而P5 3蛋白全不表达。随着肿瘤恶性程度的提高 ,P16表达降低而P5 3表达水平增高 ,VEGF亦随着癌变进程表达逐渐增高 ,差异非常显著 (P <0 0 0 1)。在不同侵袭转移倾向组中三者的表达也存在着显著性差异 (P <0 0 5 )。三者的相关性分析提示VEGF和P16之间存在负相关 (r=- 0 72 3,P <0 0 5 ) ;VEGF和P5 3之间存在正相关 (r=0 36 4 ,P >0 0 5 ) ,P16和P5 3之间存在负相关 (r=- 0 2 78,P >0 0 5 ) ,但相关不显著。结论 应用组织芯片高效检测临床组织样本具有快速、方便、经济、准确的优点。VEGF及P16 ,P5 3的异常表达可能与肝癌的发生发展、侵袭转移有密切关系。

不同引物对扩增SEN病毒的实验研究

为了解国内SENV的感染状况,根据SENV的5'非编码区和编码区ORF1的保守序列设计引物,采用巢式聚合酶链反应(nPCR)检测SENV,对PCR产物进行序列分析.

野生小鼠抗肺肿瘤基因差异表达文库的构建

目的构建野生小鼠抗肺肿瘤基因差异表达文库。方法应用抑制性消减杂交(SSH)技术对TAF1小鼠与A/wy近交系小鼠中差异表达的抗肺肿瘤基因进行筛选,构建消减cDNA文库,并对部分克隆进行核苷酸序列分析,利用BLAST检索分析其可能代表的基因。结果166个差异表达克隆测序后进行BLAST分析,其中134个克隆与87个已知小鼠的mRNA或cDNA序列同源,32个克隆与14个DNA序列同源;87个已知基因按功能分为7大类。其他32个克隆中,20个克隆与9个鼠DNA序列同源,其中可能含有新基因,2个克隆与1个细菌序列同源,3个克隆为克隆载体。结论应用SSH技术成功构建了野生小鼠抗肺肿瘤基因差异表达文库。