基于PINK1/parkin信号转导通路研究灵芝孢子对糖尿病心肌损伤的保护作用

目的探讨灵芝孢子对糖尿病(DM)大鼠心肌损伤的保护作用及对PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(parkin)信号通路的作用机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分成对照(NC)组、高脂高糖饮食(HFD)组、DM组和灵芝孢子(GLS)组各10只。12 w末,记录各组末次体质量及空腹血糖。麻醉处死大鼠后,采集心脏组织,计算心脏指数,并检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。苏木素-伊红染色(HE)和马松(Masson)染色观察心脏病理学变化。Western印迹检测PINK1/parkin通路蛋白、自噬相关蛋白及凋亡相关蛋白,免疫组织化学技术验证PINK1、parkin的表达水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色评估细胞凋亡情况。结果与NC组相比,HFD组体质量明显增加,DM组体质量明显减轻,血糖水平明显升高(P<0.05);HFD组和DM组心脏指数、MDA含量、PINK1、parkin、p-parkin、微管相关蛋白轻链(LC)3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2同源结构域蛋白抗体(beclin)1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)/Bcl-2蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率及血管周围胶原含量明显增加,SOD活性、p62蛋白表达水平显著下降(均P<0.05)。与DM组相比,HFD组和GLS组体质量、SOD活性、p62蛋白表达水平明显增加,血糖水平、心脏指数、MDA含量、PINK1、parkin、p-parkin、LC3、beclin1、Bax/Bcl-2蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率、血管周围胶原含量明显降低(均P<0.05)。结论灵芝孢子可减轻DM大鼠心肌损伤,改善纤维化程度,具有良好的抗氧化活性,可逆转心肌细胞过度自噬,抑制细胞凋亡,其保护作用可能与下调PINK1/parkin信号通路有关。

灵芝酸对锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元的保护作用

目的观察灵芝酸对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元p-Akt、Akt蛋白表达的影响,并通过应用wortmannin阻断PI3K/Akt通路,探讨灵芝酸是否具有抗癫痫作用及其作用机制。方法选取雄性SD大鼠50只,随机分为5组(n=10),A组:生理盐水对照组,B组:癫痫模型组,C组:灵芝酸干预组,D组:wortmannin抑制剂组,E组:二甲基亚砜(DMSO)对照组。每组给予相应药后,对大鼠进行行为学观察、HE染色法检测海马神经元细胞形态学变化,免疫组化法检测各组大鼠海马区p-Akt、Akt蛋白表达。结果与A组相比,B、C、D、E组p-Akt、Akt的表达量相对较高(P<0.01);灵芝酸干预后,C、D、E组p-Akt、Akt的表达量明显比B组增高(P<0.05);PI3K/Akt通路被阻断后,C、E两组p-Akt、Akt的表达量明显比D组增高(P<0.05)。结论灵芝酸对海马神经元具有一定的保护作用,并且其机制与PI3K/Akt通路的活化并影响其下游蛋白的表达有关。

基于PINK1/Parkin通路探讨灵芝孢子对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的基于PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(Parkin)通路研究灵芝孢子对糖尿病肾病(DN)模型大鼠的肾脏细胞凋亡的影响。方法32只SPF级雄性SD大鼠(180~200 g),随机分成正常对照(NC)组、高脂高糖(HF)组、DN模型(DN)组和灵芝孢子(GLSP)组。除NC组外,其余各组均采用高脂、高糖饲养,同时DN组和GLSP组均联合腹腔注射2%链脲佐菌素(STZ,50 mg/kg)。GLSP组每日灌胃给予灵芝孢子〔300 mg/(kg•d)〕持续3个月,其余组均灌胃给予等量生理盐水〔10 ml/(kg•d)〕。每周测定各组空腹血糖。12 w后评估肾脏功能,用试剂盒检测尿素氮、血清肌酐、24 h尿蛋白等生化指标。苏木素-伊红(HE)、过碘酸希未反应(PAS)和Masson染色用于检查肾脏病理学。通过TUNEL法观察大鼠肾脏组织凋亡细胞的分布及凋亡率情况。通过免疫组化检测肾脏组织中P62、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。Western印迹检测PINK1/Parkin通路涉及的关键蛋白PINK1、Parkin及微管相关蛋白1轻链(LC)3、P62、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved)-Caspase3、Bax、Bcl-2表达水平。结果与NC组相比,DN组尿中出现大量尿蛋白,血清肌酐及尿素氮水平明显升高(P<0.01),肾小体直径增大、肾小囊腔变小、肾小球内细胞数增多并有糖原累积、肾小球内含有大量的胶原纤维,肾组织中PINK1、Parkin、LC3的蛋白表达显著降低、P62表达显著升高,凋亡相关蛋白Caspase3、Cleaved-Caspase3表达明显升高,Bcl-2/Bax表达明显降低(P<0.01),肾脏凋亡荧光强度明显增加(P<0.01)。与DN组相比,GLSP组肾脏滤过功能明显改善(P<0.01),肾脏病理损伤缓解,肾小球体积有明显减小、肾组织胶原纤维覆盖面积明显降低、糖原明显减少;肾组织中PINK1、Parkin表达明显升高、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显增加,P62表达明显下降,且凋亡相关蛋白Caspase3、Cleaved-Caspase3表达明显下降,Bcl-2/Bax表达明显升高(P<0.01),肾脏凋亡荧光强度明显降低(P<0.01)。结论灵芝孢子可能调控PINK1/Parkin途径,激活肾脏细胞自噬有关,抑制重要的促凋亡蛋白的表达,减轻高糖水平对肾脏的损害,抑制细胞凋亡。

显微摄像活动在组织学实验教学中的实施及其意义

随着智能手机的广泛应用,手机摄像在日常生活中随处可见。为了完善组织学教学模式,课题组选择未列入实验教学课堂的数字切片为对象,以课外教学活动的方式组织学生用手机拍摄电脑屏幕上切片的显微图片,并将其插入电子文档中加以标示和描述,制作成显微摄像作品,然后供学生和教师进行评价,可增强学生的自主观察能力,拓宽学生的知识面,加深学生对组织学知识的理解,对实验课堂教学有积极的辅助作用。

细辛、杜仲及其合剂对亚急性衰老小鼠睾丸及血清睾酮影响的实验研究

目的研究细辛、杜仲及其合剂对亚急性衰老小鼠睾丸、精子及血清睾酮的影响。方法选昆明系雄性小鼠,用D-半乳糖制备衰老模型。应用光镜、电镜技术检测细辛、杜仲及其合剂治疗前后衰老小鼠睾丸及精子的形态学改变;放射免疫技术检测血清睾酮的变化。结果衰老小鼠睾丸重量减轻,生精细胞缺如,精子密度及活动率下降,血清睾酮含量明显降低(模型组与青年组比较:P<0.01);用药后,睾丸重量增加,生精小管增粗,生精细胞增多,生精过程活跃,精子密度及活动率明显提高,血清睾酮含量增加(P<0.05)。合剂组的作用优于杜仲组和细辛组(P<0.05)。结论细辛,杜仲及其合剂可改善衰老小鼠的生精功能,明显抑制衰老小鼠血清睾酮含量的下降,具有一定延缓衰老的作用。

凋亡抑制蛋白Survivin在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的:通过研究凋亡抑制蛋白Survivin在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达情况及其与临床病理特征之间的关系,探讨Survivin在HCC发生、发展中的作用。方法:采用流式细胞术(FCM)及免疫组化(SP)法对30例肝癌组织、20例癌旁组织及10例正常肝组织中的Survivin蛋白进行定量检测,并结合临床资料进行分析。结果:①Survivin在HCC组织中的表达率显著高于癌旁组织及正常肝组织(P<0.05);②Survivin蛋白在癌旁正常组织中无表达;③Survivin蛋白的表达与肿瘤的大小、部位、包膜、AFP无关联(P>0.05),而与镜下门静脉癌栓形成有关联(P<0.05)。结论:Survivin基因蛋白在HCC组织中过表达是反应HCC生物学行为的有效指标,Survivin基因蛋白表达的特异性有望成为HCC基因诊断与治疗的靶点。

环氧合酶-2在原发性肝细胞癌中的表达及其与HCC临床病理特征之间的关系

目的:探讨COX-2在原发性肝细胞癌组织、癌旁组织及正常肝组织中表达情况及其与临床病理特征之间的关系。方法:采用流式细胞术(FCM)及免疫组化(SP)法对30例肝癌组织、20例癌旁组织及10例正常肝组织中的COX-2蛋白进行定量检测,并对临床资料进行回顾性分析。结果:(1)COX-2在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织和正常肝组织,差异具有显著性(P<0.05)。(2)COX-2蛋白的表达与肿瘤的大小、部位、包膜、AFP、镜下门静脉癌栓的有无均无关(P>0.05)结论:COX-2在HCC组织中具有较高表达,其过表达是反应HCC生物学行为的有效指标,对HCC的发生发展具有一定作用有望成为HCC基因治疗的靶点,为肝癌的化学预防提供理论依据。

CXC趋化因子配体5对前列腺癌细胞生长的作用

目的研究CXC趋化因子配体(CXCL)5受体(CXCR2)蛋白在前列腺癌细胞株PC-3、DU145和LNCaP细胞中的表达情况及CXCL5对LNCaP细胞生长的影响。方法应用Western印迹技术检测CXCR2在3种前列腺癌细胞株PC-3、DU145和LNCaP细胞中的表达情况,筛选出表达量最高的细胞株,然后用MTT法检测5、10、20 ng/ml浓度CXCL5对CXCR2蛋白表达量最高的前列腺癌细胞生长的影响。结果在PC-3、DU145和LNCaP细胞中均有CXCR2蛋白的表达,LNCaP细胞中最高(1.65±0.089),DU145细胞次之(1.44±0.107),PC-3细胞中最低(0.36±0.056)(P<0.05);5、10、20 ng/ml CXCL5浓度组作用LNCaP细胞6 d后,吸光度值分别为0.55±0.06,0.61±0.08和0.73±0.10,与对照组(0.52±0.14)比较,20 ng/ml CXCL5浓度组增长率明显增高(P<0.05)。结论 CXCL5可通过作用于其自身受体CXCR2进而促进LNCaP细胞生长。

肾透明细胞癌组织中趋化因子CXC配体3的表达及意义

目的研究趋化因子CXC配体(L)3在肾透明细胞癌及癌旁组织的表达差异,探讨CXCL3表达与肾透明细胞癌临床病理参数的相关性。方法利用免疫组织化学染色方法检测肾脏组织芯片中CXCL3的表达。结果与肾透明细胞癌组织比较,癌旁组织CXCL3表达量显著提高(P=0.000);癌组织和癌旁组织肾透明细胞癌Ⅲ级组织CXCL3表达水平均显著高于Ⅱ级(P=0.044;P=0.037);CXCL3表达水平与肾透明细胞癌临床病理参数无相关性。结论 CXCL3表达水平与肾透明细胞癌临床分级呈正相关,其可能主要经旁分泌机制参与肾透明细胞癌进程。

Survivin-ASODN对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的促进作用及其机制

目的:应用反义寡核苷酸(ASODN)技术靶向抑制生存素(survivin)基因,研究其对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,阐明survivin反义寡核苷酸(survivin-ASODN)促进SMMC-7721细胞凋亡的作用机制。方法:设计合成survivin-ASODN序列(FAM荧光素标记)。利用脂质体介导法分别用浓度为100、200、300、400和600nmol·L-1 survivin-ASODN转染SMMC-7721细胞(ASODN转染组),并设空白对照组、空脂质体对照组和正义寡核苷酸(SODN)对照组。应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度survivin-ASODN体外转染SMMC-7721细胞24、48和72h后SMMC-7721细胞凋亡率及细胞周期;Western blotting法检测survivin蛋白表达水平。结果:与各对照组比较,荧光素标记的ASODN转染SMMC-7721细胞24h后,细胞生长开始受到抑制,细胞凋亡率增加,呈现剂量-时间依赖性(P<0.05);作用48h后,ASODN转染组细胞在G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞明显减少(P<0.05),G2/M期细胞显著增加(P<0.05),细胞被阻滞于G2/M期。与各对照组比较,不同浓度ASODN转染组SMMC-7721细胞survivin蛋白表达水平下降(P<0.05),且随作用时间的延长而降低(P<0.05)。结论:survivin-ASODN通过抑制survivin蛋白表达、改变细胞周期进程等机制促进SMMC-7721细胞凋亡,并且呈现时间-剂量依赖性。

细辛、杜仲及其合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠睾丸影响的形态学研究

目的探讨细辛、杜仲及其合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用。方法应用光镜电镜技术测定小鼠睾丸的重量、生精小管直径、生精上皮细胞数、间质细胞数的随龄变化,同时观察了细辛、杜仲及其合剂对上述指标的影响。结果随增龄,睾丸重量减轻,生精小管直径缩小。衰老时生精细胞缺如,仅剩支持细胞或见散在分布,间质细胞随龄递减。细辛、杜仲及其合剂可以使小鼠的生精小管增粗,生精过程活跃,生精细胞增多,间质细胞增多。结论细辛,杜仲及其合剂具有一定的抗衰老作用,合剂的抗衰老作用优于细辛组和杜仲组。

分析多媒体教学的利弊促进教改创新

多媒体教学以其题材丰富形象、形式新颖、良好的交互性、极大的资源共享性、丰富的表现力等优点促进了教学内容、教学方法和教学过程的全面优化,收到了良好的教学效果,但现阶段的多媒体教学还存在一些需要改进之处。本文对目前存在的问题加以分析并探讨解决方法,目的在于充分发挥多媒体技术的优势与作用,联系网络教学,使多媒体教学应用形成规模和整体优势,为教学改革寻找创新点和突破口。

WPBL教学法在循环内科教学中的应用研究

目的:探讨WPBL教学法在"循环内科"教学中的效果。方法:对我校2010级临床医学专业内科学的课程中"冠心病"和"心律失常"的部分教学内容进行了WPBL教学尝试,自行撰写PBL案例"我胸痛了"和"我心慌了"应用于教学实践中,并设立以传统教学方式授课班级为对照组。通过考核和问卷调查形式来评价教学效果。结果:WPBL教学组的考试成绩平均分高于对照组(P<0.01)。问卷调查结果显示,86.21%的学生对WPBL教学法持肯定态度。90.68%的学生学习兴趣高涨,并且分析问题的能力、小组合作的能力及自主学习的能力得到较大程度提高。结论:WPBL教学法有利于学生自主学习等多种能力的提高,显著提高学生学习兴趣,并且有助于提高学习成绩,因此,WPBL在临床医学专业教学实践中具有一定的推广应用价值。

WPBL教学法在神经内科教学实践中的应用

目的:探讨WPBL教学法在神经内科教学中的效果。方法:对我校2010级临床医学专业神经病学课程"神经系统退行性疾病——老年痴呆症"进行了WPBL教学尝试,自行撰写PBL案例《我找不到家了》应用于教学实践中,并设立以传统教学方式授课班级为对照组。通过考核和问卷调查形式评价教学效果。结果:实验组的考试成绩平均分高于对照组(P<0.05)。问卷调查结果显示,88.32%的学生对WPBL教学法持肯定态度。89.68%的学生学习兴趣高涨,并且分析问题、小组合作及自主学习的能力得到较大程度提高。结论:WPBL教学法有利于培养学生的创新思维和自主学习能力,在临床医学专业教学实践中具有一定的推广应用价值。

细辛对D-半乳糖所致衰老小鼠睾丸的形态学研究

本文研究了细辛对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用,应用光镜电镜技术测定小鼠睾丸的重量、生精小管直径、生精上皮细胞数、随龄变化的间质细胞数,同时观察了细辛对上述指标的影响。结果 1.随增龄,睾丸重量减轻,生精小管直径缩小。衰老时生精细胞缺如,仅有支持细胞或散在分布,间质细胞随龄递减。2.细辛可以使小鼠的曲细精管增粗,生精过程活跃,生精细胞增多,间质细胞增多。结论 细辛有一定抗衰老作用。

细辛和杜仲合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠睾丸的形态学研究

目的 本实验研究了细辛与杜仲合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用。方法 应用光镜电镜技术测定小鼠睾丸的重量、生精小管直径、生精上皮细胞数、间质细胞数的随龄变化,同时观察了细辛、杜仲合剂对上述指标的影响。结果 1.随增龄,睾丸重量减轻,生精小管直径缩小。衰老时生精细胞缺如,仅剩支持细胞或见散在分布,间质细胞随龄递减。2.细辛与杜仲合剂具有一定的抗衰老作用,可以使小鼠的生精小管增粗,生精过程活跃,生精细胞增多,间质细胞增多。结论 细辛与杜仲合剂具有一定的抗衰老作用。