新型断裂内含肽介导的可控性C端断裂(英文)

内含肽介导的蛋白质断裂被广泛地应用于蛋白质纯化、连接和环化.但目前的方法都是用传统的连续的内含肽来介导蛋白质断裂反应,因而往往存在自发性断裂、产率低等问题.本实验选择3个S1型新型断裂内含肽Ter ThyX、Ssp GryB和Rma DnaB来实现蛋白质断裂反应的可控性.在可控性C端断裂反应中,S1型断裂内含肽的C端片段(IC)与硫氧还蛋白(T)融合作为前体蛋白,加入化学合成的Ssp DnaB S1型断裂内含肽的N端小肽与二硫苏糖醇(DTT)共同诱导C端断裂反应.结果表明,该小肽可以诱导这3个不同的S1型断裂内含肽的前体蛋白发生C端断裂反应.该方法为利用内含肽C端断裂介导的蛋白质纯化提供了更多的选择,并为内含肽的结构与功能的关系研究提供了有用的线索.

基于蛋白质反式剪接在大肠杆菌中表达鲎C因子CES多肽

鲎C因子是鲎血细胞中一种对内毒素具有高亲和力的丝氨酸蛋白酶原,可替代鲎试剂用于内毒素检测。鲎C因子N端Cys-EGF-sushi1-sushi2(CES)片段中的sushi1区域是与内毒素结合的关键部位。本研究在sushi1结构域中的特定位点断开CES与内毒素结合的功能片段,然后分别和蛋白质内含肽Ssp DnaX的N端片段(IN)和C端片段(IC)连接,并在大肠杆菌中表达,表达产物经亲和层析纯化、复性以及内毒素去除后,利用蛋白质反式剪接系统,在体外诱导该蛋白质内含肽发生剪接,重新得到C因子的CES蛋白,并检测其活性。实验结果表明此重组CES蛋白具有结合内毒素活性,提示在大肠杆菌系统中开发低成本内毒素检测试剂的可行性。

依托课堂提问,培养生物科学科研思维

提问作为课堂教学的重要环节,其质量直接决定了课堂教学效果。文章提出项目式提问的方式,要求教师精心设计问题,以课本知识为基础,但要跳出课本知识,结合学生自身经验和实践,查阅资料,深度分析,辩证地看待问题,这种问题没有固定的答案,旨在对学生各种能力的全面培养。作为生物科学类的学生,更要密切关注国内外重大事件、科技前沿等新兴领域。教师将问题抛给学生,让学生带着问题学习,激发他们的求知欲和探索精神,为国家培养高素质高水平的科研人才。

基础医学研究生培养中劳动教育的实施策略

劳动教育是中国特色社会主义教育体系的重要内容,基础科研类研究生是我国重要的人才储备,引导其尊重劳动,树立正确的劳动价值观对于形成正确的择业观及爱岗敬业的工作态度有重要作用。当前研究生的培养侧重在专业知识的获取及专业技能的掌握,对劳动价值观的培养不够重视。研究阐述了新时期高校践行劳动教育的重要性与迫切性,并以苏州大学生物医学研究院研究生为实践对象,探索了在新生理论知识学习及实验技能培训过程中显性和隐性渗透劳动教育的具体策略。

卡纳抗性结核杆菌RecA intein蛋白剪接抑制剂筛选系统

结核分枝杆菌中的3个蛋白分别受intein调控,必须经过翻译后的蛋白剪接将intein去除才能成为有活性的蛋白,并且它们对结核杆菌的生长繁殖非常重要。这表明intein可以作为抗结核药物的一个新的作用靶点。因此,建立一个蛋白剪接抑制剂的高通量筛选系统对于大规模筛选抗结核新药尤为重要。将结核杆菌的RecA intein插入卡那霉素抗性蛋白基因中破坏其卡那霉素抗性,再通过intein剪接将其恢复。利用卡那霉素的LB平板筛选和Western Blot验证,结果表明依赖卡那霉素抗性的筛选系统可以精确地反映intein的剪接效率,因此可以作为intein剪接抑制剂的筛选系统。为了验证该系统的可行性,在含有卡那霉素的液体LB培养基中加入对intein剪接有抑制作用的顺铂,结果表明大肠杆菌的生长受到严重影响,从而直接反映顺铂对intein的剪接抑制作用。