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慢病毒介导siRNA抑制O型口蹄疫病毒ON株病毒复制
被引量:
4
1
作者
齐兴财
秦晓东
+3 位作者
甘晓丽
张淑敏
马友记
李志勇
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期360-367,共8页
探究RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术对口蹄疫病毒复制的抑制作用,本研究选取O型口蹄疫病毒ON株,以ON株口蹄疫病毒3C、3D、VP1蛋白基因作为靶基因。对每一个靶基因设计并合成两对小片段发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)引物,分别...
探究RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术对口蹄疫病毒复制的抑制作用,本研究选取O型口蹄疫病毒ON株,以ON株口蹄疫病毒3C、3D、VP1蛋白基因作为靶基因。对每一个靶基因设计并合成两对小片段发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)引物,分别命名为VP1-1、VP1-2、3C-1、3C-2、3D-1、3D-2,依据RNAi的原理构建6个shRNA的重组表达质粒,转染BHK21细胞后并接种ON口蹄疫病毒,通过对TCID50的测定和使用实时荧光定量PCR的检测筛选出能高效抑制ON口蹄疫病毒复制的重组质粒;将能够高效抑制ON口蹄疫病毒复制的重组质粒进行慢病毒的制备并筛选稳定的BHK21细胞系,通过对TCID50的测定和使用实时荧光定量PCR的检测慢病毒干扰载体对ON口蹄疫病毒复制的抑制作用。结果显示,构建的6个shRNA重组表达质粒抑制率均在71.5%~93.2%,其中PLKO.1-VP1-2和PLKO.1-3D-1的抑制效果最为明显,分别为93.2%和90.8%;慢病毒干扰载体PLKO.1-VP1-2和PLKO.1-3D-1的抑制效率在88.3%~95.49%。对研究结果表明,在细胞的水平上挑选出有效抑制ON口蹄疫病毒复制的基因干扰片段,并成功制备慢病毒干扰载体,为后续抗口蹄疫病毒的转基因羊生产培育奠定了实验基础。
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关键词
RNA干扰
口蹄疫病毒
BHK21
抑制
慢病毒
下载PDF
职称材料
藏绵羊PFKM基因克隆、生物信息学及组织表达分析
2
作者
雒瑞瑞
齐兴财
+4 位作者
刘子龙
李讨讨
王彩莲
郎侠
宋淑珍
《中国草食动物科学》
CAS
2024年第5期1-10,共10页
本研究旨在分析藏绵羊PFKM的序列特征、生物信息学及其在不同发育阶段(1日龄、3月龄、1岁龄和3岁龄)肌肉组织中的表达模式。以成年(3岁龄)藏绵羊的背最长肌cDNA为模板,克隆PFKM基因的编码区序列,并进行生物信息学分析。利用实时荧光定量...
本研究旨在分析藏绵羊PFKM的序列特征、生物信息学及其在不同发育阶段(1日龄、3月龄、1岁龄和3岁龄)肌肉组织中的表达模式。以成年(3岁龄)藏绵羊的背最长肌cDNA为模板,克隆PFKM基因的编码区序列,并进行生物信息学分析。利用实时荧光定量(RT-qPCR)技术检测PFKM基因在背最长肌、心肌、冈上肌、肱二头肌、肺脏、肝脏、脾脏和肾脏中的表达情况,并检测不同发育阶段上述组织中PFKM mRNA表达水平的变化。同时,用Western Blot检测不同年龄阶段藏绵羊背最长肌中PFKM蛋白的表达水平。结果表明,藏绵羊PFKM基因的CDS区全长2 556 bp,共编码851个氨基酸,与绵羊参考序列相比存在19个突变位点,与绵羊(98.82%)和山羊(98.59%)具有较近的亲缘关系;预测PFKM蛋白为亲水性蛋白,不存在信号肽,主要分布在细胞质中,蛋白的二级结构以α-螺旋为主,PFKM蛋白与10个糖酵解相关蛋白质分子间存在潜在的相互作用;RT-qPCR结果显示,随着年龄的增加,PFKM mRNA在藏绵羊各组织中基本呈现先上升后下降(1日龄<3月龄<1岁龄>3岁龄)的表达趋势,背最长肌中PFKM蛋白的表达也先上调后下调。本研究获得了藏绵羊PFKM基因完整的CDS区,发现其在物种间的保守性较高,并在藏绵羊肌肉生长发育过程中发挥重要的作用。
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关键词
藏绵羊
PFKM基因
克隆
生物信息学分析
组织表达
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职称材料
O型口蹄疫病毒缅甸98株衣壳蛋白的表达及抗原性分析
被引量:
1
3
作者
胡高维
马凯凯
+4 位作者
齐兴财
常兴妮
殷相平
李志勇
张志东
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1094-1099,共6页
口蹄疫病毒空衣壳是由口蹄疫病毒衣壳蛋白构成的不含核酸成分的衣壳结构,具有与完整病毒相似的构象和免、疫原性。本研究以O型口蹄疫缅甸98株(O/MYA98/BY/2010株)为研究对象,利用其P12A-3C基因构建重组杆状病毒,间接免疫荧光试...
口蹄疫病毒空衣壳是由口蹄疫病毒衣壳蛋白构成的不含核酸成分的衣壳结构,具有与完整病毒相似的构象和免、疫原性。本研究以O型口蹄疫缅甸98株(O/MYA98/BY/2010株)为研究对象,利用其P12A-3C基因构建重组杆状病毒,间接免疫荧光试验检测到Sf9昆虫细胞成功表达重组衣壳蛋白。对收集的蛋白分析发现,重组衣壳存在于未被裂解的前体蛋白和中间体蛋白中。双抗夹心ELISA检测到重组衣壳蛋白相比灭活病毒有较高的抗原结合效价。蔗糖密度梯度离心纯化空衣壳,空衣壳所在梯度表现出最强抗原性。研究结果证实了重组衣壳蛋白具有良好的抗原性,可为口蹄疫病毒空衣壳疫苗的深入研究提供参考。
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关键词
O型口蹄疫病毒
缅甸98株
空衣壳
抗原性
原文传递
题名
慢病毒介导siRNA抑制O型口蹄疫病毒ON株病毒复制
被引量:
4
1
作者
齐兴财
秦晓东
甘晓丽
张淑敏
马友记
李志勇
机构
甘肃农业大学动物科学技术学院
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期360-367,共8页
基金
甘肃省科技重大专项计划(143NKDA019)
文摘
探究RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术对口蹄疫病毒复制的抑制作用,本研究选取O型口蹄疫病毒ON株,以ON株口蹄疫病毒3C、3D、VP1蛋白基因作为靶基因。对每一个靶基因设计并合成两对小片段发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)引物,分别命名为VP1-1、VP1-2、3C-1、3C-2、3D-1、3D-2,依据RNAi的原理构建6个shRNA的重组表达质粒,转染BHK21细胞后并接种ON口蹄疫病毒,通过对TCID50的测定和使用实时荧光定量PCR的检测筛选出能高效抑制ON口蹄疫病毒复制的重组质粒;将能够高效抑制ON口蹄疫病毒复制的重组质粒进行慢病毒的制备并筛选稳定的BHK21细胞系,通过对TCID50的测定和使用实时荧光定量PCR的检测慢病毒干扰载体对ON口蹄疫病毒复制的抑制作用。结果显示,构建的6个shRNA重组表达质粒抑制率均在71.5%~93.2%,其中PLKO.1-VP1-2和PLKO.1-3D-1的抑制效果最为明显,分别为93.2%和90.8%;慢病毒干扰载体PLKO.1-VP1-2和PLKO.1-3D-1的抑制效率在88.3%~95.49%。对研究结果表明,在细胞的水平上挑选出有效抑制ON口蹄疫病毒复制的基因干扰片段,并成功制备慢病毒干扰载体,为后续抗口蹄疫病毒的转基因羊生产培育奠定了实验基础。
关键词
RNA干扰
口蹄疫病毒
BHK21
抑制
慢病毒
Keywords
RNA interference
foot-and-mouth disease virus
BHK21
inhibition
lentivirus
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
藏绵羊PFKM基因克隆、生物信息学及组织表达分析
2
作者
雒瑞瑞
齐兴财
刘子龙
李讨讨
王彩莲
郎侠
宋淑珍
机构
甘肃省农业科学院畜草与绿色农业研究所
出处
《中国草食动物科学》
CAS
2024年第5期1-10,共10页
基金
甘肃省科技计划资助项目(23JRRA1338)
甘肃省农业科学院科研条件建设及成果转化项目(博士基金)(2022GAAS60)。
文摘
本研究旨在分析藏绵羊PFKM的序列特征、生物信息学及其在不同发育阶段(1日龄、3月龄、1岁龄和3岁龄)肌肉组织中的表达模式。以成年(3岁龄)藏绵羊的背最长肌cDNA为模板,克隆PFKM基因的编码区序列,并进行生物信息学分析。利用实时荧光定量(RT-qPCR)技术检测PFKM基因在背最长肌、心肌、冈上肌、肱二头肌、肺脏、肝脏、脾脏和肾脏中的表达情况,并检测不同发育阶段上述组织中PFKM mRNA表达水平的变化。同时,用Western Blot检测不同年龄阶段藏绵羊背最长肌中PFKM蛋白的表达水平。结果表明,藏绵羊PFKM基因的CDS区全长2 556 bp,共编码851个氨基酸,与绵羊参考序列相比存在19个突变位点,与绵羊(98.82%)和山羊(98.59%)具有较近的亲缘关系;预测PFKM蛋白为亲水性蛋白,不存在信号肽,主要分布在细胞质中,蛋白的二级结构以α-螺旋为主,PFKM蛋白与10个糖酵解相关蛋白质分子间存在潜在的相互作用;RT-qPCR结果显示,随着年龄的增加,PFKM mRNA在藏绵羊各组织中基本呈现先上升后下降(1日龄<3月龄<1岁龄>3岁龄)的表达趋势,背最长肌中PFKM蛋白的表达也先上调后下调。本研究获得了藏绵羊PFKM基因完整的CDS区,发现其在物种间的保守性较高,并在藏绵羊肌肉生长发育过程中发挥重要的作用。
关键词
藏绵羊
PFKM基因
克隆
生物信息学分析
组织表达
Keywords
Tibetan sheep
PFKM gene
cloning
bioinformatics analysis
organizational expression
分类号
S826.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
O型口蹄疫病毒缅甸98株衣壳蛋白的表达及抗原性分析
被引量:
1
3
作者
胡高维
马凯凯
齐兴财
常兴妮
殷相平
李志勇
张志东
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
西北师范大学生命科学学院
甘肃农业大学动物科学技术学院
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1094-1099,共6页
基金
中国农业科学院创新团队基金资助项目
国家自然科学基金资助项目(31572522,31201943)
文摘
口蹄疫病毒空衣壳是由口蹄疫病毒衣壳蛋白构成的不含核酸成分的衣壳结构,具有与完整病毒相似的构象和免、疫原性。本研究以O型口蹄疫缅甸98株(O/MYA98/BY/2010株)为研究对象,利用其P12A-3C基因构建重组杆状病毒,间接免疫荧光试验检测到Sf9昆虫细胞成功表达重组衣壳蛋白。对收集的蛋白分析发现,重组衣壳存在于未被裂解的前体蛋白和中间体蛋白中。双抗夹心ELISA检测到重组衣壳蛋白相比灭活病毒有较高的抗原结合效价。蔗糖密度梯度离心纯化空衣壳,空衣壳所在梯度表现出最强抗原性。研究结果证实了重组衣壳蛋白具有良好的抗原性,可为口蹄疫病毒空衣壳疫苗的深入研究提供参考。
关键词
O型口蹄疫病毒
缅甸98株
空衣壳
抗原性
Keywords
foot-and-mouth disease virus type O
Myanmar's 98 strain
empty capsid
antigenicity
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
R535 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
慢病毒介导siRNA抑制O型口蹄疫病毒ON株病毒复制
齐兴财
秦晓东
甘晓丽
张淑敏
马友记
李志勇
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
4
下载PDF
职称材料
2
藏绵羊PFKM基因克隆、生物信息学及组织表达分析
雒瑞瑞
齐兴财
刘子龙
李讨讨
王彩莲
郎侠
宋淑珍
《中国草食动物科学》
CAS
2024
下载PDF
职称材料
3
O型口蹄疫病毒缅甸98株衣壳蛋白的表达及抗原性分析
胡高维
马凯凯
齐兴财
常兴妮
殷相平
李志勇
张志东
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
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