基于PCR的基因差异表达分析技术

基因差异表达分析是研究许多生物学过程的分子基础的一条直接、有效的途径。自DDRT-PCR技术建立以来,一系列基于PCR的基因差异表达分析技术,如SAGE、SSH、RDA和DNA微阵列等相继发展起来,为分析和克隆差异表达的基因提供了更为快速、灵敏的工具。本文对这几种方法进行了简要综述,比较了不同方法的优缺点,并展望了今后基因差异表达研究技术的发展方向。

甜菜无融合生殖系AFLP指纹图谱试验体系的建立

通过利用单酶切和单接头连接体系,在T4连接酶作用下进行连接,以连接产物为模板,在选择引物和ExTaq聚合酶作用下进行PCR特异扩增,扩增产物用琼脂糖凝胶检测分析。通过对甜菜叶片基因组DNA的分析,确立了适合于甜菜无融合生殖系的最适宜的AFLP试验体系。该方法操作简单、费用低,有利于该项技术的推广和应用。

放线菌MY02发酵液活性组分的HPLC分离方法研究

放线菌MY02的发酵提取物对黄瓜枯萎病有显著的抑菌活性,由紫外光谱分析结果初步判断其为四烯大环内酯类化合物。采用高效液相色谱法(HPLC)分离其活性组分,通过分析参数的优化,确定了最佳色谱分离条件:Sinochrom ODS-BP柱(300×4.6 mm i.d.,5μm),流动相为V(甲醇)∶V(水)=80∶20等度洗脱,流速0.4 mL/min,20℃,检测波长304 nm。方法可满足对MY02发酵液活性组分的分离要求。

线粒体DNA及其应用

线粒体DNA是在真核生物中普遍存在的一种核外遗传物质,具有分子小、结构简单、进化速度快、母性遗传、无组织特异性等特点。本文综述了线粒体DNA在人类遗传疾病、动植物的亲缘关系、种群分化、群体多样性及植物细胞质雄性不育等研究领域中的应用情况。

毛细管气相色谱仪的使用与维护

毛细管气相色谱仪是应用非常广泛的一种分析仪器,它的正确使用和妥善维护对测试结果和仪器使用寿命都有重要影响。本文从气体纯度的选择以及进样系统、毛细管柱和检测器的维护保养等方面介绍了仪器在使用与维护中需要注意的问题,供参考。

九种植物油中脂肪酸成分的比较研究

索氏提取法提取了大豆、不同产地葵花籽、白花生、黑花生、白芝麻、黑芝麻、油菜籽和棉花籽的油脂,用气相色谱-质谱法测定了这9种植物油中脂肪酸组成和相对含量。结果表明,不同种类植物油的脂肪酸组成和相对含量各不相同,同种类植物油脂肪酸组成一致,相对含量基本吻合,尽管植物油的产地和品种不同。除油菜籽油外,植物油中相对含量最高的两种脂肪酸为9,12-亚油酸和9-油酸,仅从这两种脂肪酸的相对含量之和也可区分不同种类的食用植物油。按我国推荐的食用植物油饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸的推荐摄入量比,花生油最吻合。

硒化壳寡糖的合成及抗氧化作用研究

以亚硒酸钠和壳寡糖为原料,合成了硒化壳寡糖,产率为37.26%,硒含量为9.02 mg.g-1。利用紫外-可见光谱、红外光谱两种表征手段,证实了硒化壳寡糖的合成。采用邻二氮菲-Fe2+氧化法、邻苯三酚自氧化法以及总抗氧化能力试剂盒测定硒化壳寡糖的抗氧化能力。结果表明,在实验设置的浓度范围内,硒化壳寡糖的抗氧化能力随着浓度的增加而增加,且硒化壳寡糖的抗氧化能力高于壳寡糖。1 mg.mL-1的硒化壳寡糖对羟自由基的清除率为40.27%,对超氧阴离子的清除率为38.68%,总抗氧化能力为每mL 0.617单位。实验为研究低毒性、有效的有机补硒产品奠定了基础。

6种链霉菌基因组DNA提取方法比较

采用优化SDS、SDS、优化CTAB、CTAB、液氮研磨、微波法分别提取委内瑞拉链霉菌基因组DNA,比较6种方法的差异,选出最佳提取方法分别提取S.fradiae,S.venezuelae,S.ambofa-ciens,S.glaucescens,S.coelicolor基因组DNA,并利用16S rDNA的通用引物扩增相应的目的基因。结果表明:6种方法制备的基因组DNA以优化SDS法和微波法为上选,后者的纯度高但量很少。优化SDS法是6种提取方法中最可靠的DNA提取方法,DNA量大,纯度高,可靠,可作为PCR反应的模板进行16S rDNA基因有效扩增。

高效液相色谱法检测蔬菜中百菌清及其代谢产物的方法研究

建立了同时检测蔬菜中百菌清(CHT)及其代谢产物(4-羟基百菌清,CHT-OH)残留的高效液相色谱分析法。样品经丙酮提取,弗洛里硅土柱净化浓缩后以适量甲醇定容,HPLC紫外检测器检测,以C18色谱柱分离,甲醇∶水(90∶10,V/V)为流动相,流速为0.7mL/min,检测波长240nm。结果表明,百菌清、4-羟基百菌清的检测线性范围分别为0.05～10mg/kg和0.01～10mg/kg,相关系数r=0.9999。方法检出限分别为0.012mg/kg和0.005mg/kg,二者的平均加标回收率为83.5%～121.3%,RSD为2.4%～4.6%,该方法可用于市售蔬菜样品的测定。

生物防腐剂乳酸菌素的研究进展

简要介绍了乳酸菌素的定义、分类、性质、生物合成、影响产量的因素及活性检测方法、食品安全性、利用方式等,并就研究中存在的问题提出了乳酸菌素的研究方向。

AFLP技术在微生物分类鉴定、基因标定及遗传多样性方面的应用

简述了AFLP技术的原理 ,比较了AFLP方法与其他分子标记的不同及其优缺点。着重论述了该技术在微生物分类、鉴定、基因标定及遗传多样性方面的应用。

风干香肠中乳酸菌的分离鉴定及益生特性研究

由风干香肠中分离纯化得到的3株乳酸菌ORC2、QM7和QM8,均能产乳酸、革兰氏染色阳性、接触酶阴性。经系统发育分析,结合菌落形态、细胞形态、生化反应试验,确定菌株ORC2和QM7为肠膜明串珠菌,QM8为柠檬明串珠菌。乳酸菌ORC2、QM7和QM8均能降低培养基中的胆固醇,且对·OH、DPPH·和O-2·有一定的清除能力,其清除率都与细胞浓度呈正相关。在细胞浓度为5×108CFU/mL时,菌株ORC2对·OH的清除率最高,为65.36%;菌株QM8对DPPH·的清除率最高,为61.21%;而对O-2·的清除率最高的菌株为QM7,达到75.70%。菌株QM7在培养96 h能清除最多的胆固醇,清除率为51.2%。

瓜类枯萎病拮抗放线菌H628的鉴定

对分离自东北地区针叶林土壤中的一株拮抗放线菌菌株H628进行了形态学、培养特征及生理生化分析,鉴定结果表明:放线菌H628在大多数培养基上生长良好,基内菌丝无横隔,不断裂,气生菌丝粉红色,生长茂盛,孢子丝呈松敞螺旋或直形。上述特征与弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)高度一致。聚类分析表明,二者的16S rDNA序列的同源性达到了99%。因此,可将放线菌H628定名为弗氏链霉菌H628(S.fradiae H628)

真菌广谱拮抗菌GQ-17的鉴定、发酵液性质研究及发酵条件优化

为探讨拮抗菌GQ-17在植物真菌病害生物防治中的应用潜力,通过形态观察、生理生化测定、细胞成分分析以及16SrDNA序列分析确定其分类地位,采用牛津杯法测定其发酵液的理化性质,并采用单因素试验与正交设计方法筛选出该菌株的优化发酵配方和发酵条件。结果表明：GQ-17为龟裂链霉菌（Streptomyces rimosus）,该菌株发酵液对番茄灰霉病菌、番茄叶霉病菌、水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌、玉米弯孢病菌、茄子黄萎病菌、黄瓜褐斑病菌、黄瓜枯萎病菌都有较高的抑制活性;对温度和酸碱度不明感,在100℃处理30min抑菌活性为对照的88.6%,pH值5~9之间抑菌活性无明显变化;对光照较敏感,日光照射6h,其活性降低51.5%。培养基优化组合为：玉米粉10g,黄豆粉10g,NaCl 4g,CaCO31g,去离子水1000mL;优化发酵条件为：初始pH值7.0,发酵温度31℃,发酵时间5d,接种量3%,250mL三角瓶装液量50mL,摇床转速120r.min-1。

硒化羧甲基壳聚糖的合成及表征

以亚硒酸钠和羧甲基壳聚糖为原料,合成了硒化羰甲基壳聚糖,产率为44.78%,硒含量为20.50 mg/g。利用紫外-可见光谱、红外光谱两种表征手段,证实了硒化羧甲基壳聚糖的合成。为研究低毒性、有效的有机补硒产品奠定了基础。

聚酮类化合物生物合成基因簇与药物筛选

由微生物和植物产生的聚酮类化合物的数量极其庞大,是一大类结构多样化和生物活性多样性的天然产物,已经成为新药的重要来源。介绍了3种类型聚酮类化合物生物合成基因簇的特点,即以模块形式存在的Ⅰ型聚酮合酶,包含一套可重复使用结构域的Ⅱ型聚酮合酶以及不需要ACP参与,以植物中的查耳酮合酶为代表的Ⅲ型聚酮合酶。同时,还介绍了基于3种类型聚酮类化合物生物合成基因的特点,利用分子生物学方法构建筛选探针,进行当前药物基因筛选的进展。

铁化羧甲基壳聚糖的合成及结构表征

以三氯化铁和羧甲基壳聚糖为原料,合成了铁化羧甲基壳聚糖,产率为47.48%。原子吸收光谱法测定其中铁含量为23.50 mg/g。利用紫外-可见光谱、红外光谱两种表征手段,证实了铁化羧甲基壳聚糖的合成。铁化羧甲基壳聚糖有望开发成为一种具有多重功能的生物多糖型补铁剂。

抗真菌抗生素SN06对小白鼠毒性实验

新型农用抗生素SN06是由龟裂链霉菌菌株MY02(Streptomyces rimosus)产生的一种多烯大环内酯类抗生素。该抗生素对多种植物真菌病害都有较好的防治效果。以昆明种小白鼠作为实验对象,以静脉注射、精子致畸、皮肤刺激性3种实验对农用抗生素SN06的急性毒性进行分析。抗生素SN06对小白鼠静脉注射LD50值为199.53μg/kg。精子致畸实验结果表明抗生素SN06无致畸作用。皮肤毒理实验表明小白鼠对抗生素SN06无不良中毒反应。

拮抗放线菌B-20的种类鉴定及其16S rDNA序列分析

对分离自东北蔬菜保护地土壤的1株拮抗放线菌菌株B-20进行了形态特征、培养特征、生理生化、细胞壁组分分析及16S rDNA序列分析。基内菌丝无横隔、不断裂,气生菌丝多分枝;孢子丝波曲至螺旋形,孢子椭圆形,表面光滑。细胞壁化学组分Ⅰ型。以16s rDNA序列为基础构建了包括13株相关种属细菌在内的系统发育树。根据多相分类鉴定结果表明,放线菌B-20的上述特征与淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)的高度一致。二者的16S rDNA序列的相似性达到了99%。因此,可将链霉菌B-20定名为淡紫灰链霉菌B-20 (S.lavendulae B-20)。

泡菜中乳酸菌的分离及其苯乳酸产量研究

从泡菜中分离纯化得到2株乳酸菌LMD和LRA2,均能产乳酸、革兰氏染色阳性、接触酶阴性。经系统发育分析,结合菌落形态、细胞形态、生化反应试验,确定菌株LMD和LRA2为肠膜明串珠菌。菌株LMD和LRA2的苯乳酸产量和苯丙氨酸的添加量与培养时间呈正相关。在含0.16%苯丙氨酸的MRS液体培养基中,培养72 h,菌株LMD的苯乳酸产量为0.144 7 mg·mL-1,菌株LRA2的苯乳酸产量为0.158 5 mg·mL-1。