革兰氏阳性荚膜细菌基因组DNA提取方法的优化比较研究

提取高质量的基因组DNA对于分子生物学相关研究至关重要,具有荚膜的革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖层较厚,现有常规方法很难破壁(破壁困难)、并获得理想的基因组DNA,本文旨在探寻一种高效稳定针对该类菌的 DNA提取方法。方法:以S. mucilaginosus 和C.perfringens为受试菌,采用4种常规法和优化的细菌基因组DNA提取方法,对5种提取基因组DNA应用紫外分光光度和琼脂糖凝胶电泳技术检测其纯度及完整性比较,并进行16SrDNA基因有效扩增验证。结果:优化的超低温冷冻—溶菌酶破壁法提取得到的DNA质量浓度较高,且平行样间浓度和纯度稳定。结论:为革兰氏阳性荚膜细菌基因组DNA提取提供参考。

重症监护病房脓毒症相关性急性肾损伤风险列线图的构建与验证

目的构建并验证预测重症监护病房(ICU)脓毒症相关性急性肾损伤(SA-AKI)风险的列线图模型。方法回顾纳入2017年1月至2022年12月入住解放军联勤保障部队第九四〇医院重症医学科的成人脓毒症患者,提取人群特征、入院24 h内的诊疗数据及临床结局。以7∶3比例随机分为训练集和验证集。依据第28届急性病质量倡议工作组(ADQI 28)共识报告,以血清肌酐为参数,以脓毒症诊断7 d内发生AKI为结局对数据进行分析。使用Lasso回归分析及单因素、多因素Logistic回归分析筛选出预测变量并构建SA-AKI风险预测模型。通过Hosmer-Lemeshow检验、受试者工作特征曲线(ROC曲线)、决策曲线分析(DCA)及临床影响曲线(CIC)对模型进行评价。结果247例脓毒症患者纳入研究,184例发生SA-AKI(74.49%),其中训练集和验证集SA-AKI患者分别为130例(75.58%)和54例(72.00%)。经Lasso回归分析及单因素、多因素Logistic回归分析后筛选出4个与SA-AKI发生相关的独立预测因子,分别为降钙素原(PCT)、凝血酶原活动度(PTA)、血小板分布宽度(PDW)、尿酸(UA),其优势比(OR)及95%可信区间(95%CI)分别为1.03(1.01~1.05)、0.97(0.55~0.99)、2.68(1.21~5.96)、1.01(1.00~1.01),均P<0.05。以上述4个独立预测因子绘制列线图,构建预测模型。在训练集和验证集,预测模型的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.869(95%CI为0.870~0.930)和0.710(95%CI为0.588~0.832);Hosmer-Lemeshow检验P值分别为0.384和0.294。在训练集中,模型最佳截断值为0.760时,敏感度为77.5%,特异度为88.1%。DCA曲线和CIC曲线亦证明该模型具有良好的临床效用。结论基于ICU脓毒症患者24 h内临床指标构建的列线图模型可用于预测脓毒症患者7 d内发生AKI的风险,可能有助于临床医师识别SA-AKI高风险患者,为早期制定个性化诊疗措施提供一定的临床参考。