目的检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法利用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p相对表达;...目的检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法利用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p相对表达;构建miR-505-3p过表达、c-MYC过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8法,克隆斑点形成实验、Transwell侵袭/迁移实验检测miR-505-3p和c-MYC对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p和c-MYC的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot检测miR-505-3p和c-MYC对Wnt/β-catenin通路关键蛋白表达的影响。结果临床胃癌组织中miR-505-3p表达水平较正常癌旁组织显著下调(0.92±0.37 vs 1.74±0.59),差异有统计学意义(t=3.723,P<0.01)。胃癌细胞系MGC803(1.12±0.35),AZ521(2.31±0.24)和HGC-27(2.28±0.43)中miR-505-3p相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1(4.62±0.79)明显降低,差异有统计学意义(F=26.109,P<0.001)。miR-505-3p过表达组细胞增殖(0.92±0.27)、克隆形成(51.67±21.75)、迁移(43.25±15.47)、侵袭(38.53±14.76)能力较NC组(1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94)明显降低,差异均有统计学意义(t=3.131~7.166,均P<0.05);miR-505-3p过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC是miR-505-3p的靶基因,miR-505-3p靶向负调控c-MYC。c-MYC过表达组细胞增殖(2.72±0.68)、迁移(147.15±20.36)、侵袭(145.46±22.73)能力较NC组(1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94)明显增高,差异均有统计学意义(t=2.455~4.456,均P<0.05);c-MYC过表达可逆转miR-505-3p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p过表达组Wnt(0.46±0.07),β-catenin(0.50±0.05)蛋白相对表达水平明显低于NC组(1.01±0.02,1.02±0.02),差异均有统计学意义(t=8.139,7.342,均P<0.001);过表达c-MYC能够逆转miR-505-3p对Wnt和β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论胃癌中miR-505-3p显著低表达,其可通过靶向调控c-MYC表达介导Wnt/β-catenin信号通路激活进而发挥作用参与胃癌的发生发展过程。展开更多
目的探讨微小RNA(miR)-205通过调控核心结合因子α-1(Cbfα-1)表达促进人脂肪干细胞(hASCs)细胞系向软骨细胞方向分化的作用及机制。方法慢病毒转染法将Lenti-miR-205、Lenti-control慢病毒液分别转染至hASCs细胞,命名为miR-205过表达组...目的探讨微小RNA(miR)-205通过调控核心结合因子α-1(Cbfα-1)表达促进人脂肪干细胞(hASCs)细胞系向软骨细胞方向分化的作用及机制。方法慢病毒转染法将Lenti-miR-205、Lenti-control慢病毒液分别转染至hASCs细胞,命名为miR-205过表达组、miR-NC组,另取未处理细胞为对照组;RT-qPCR法检测转染后miR-205基因表达量,MTT比色法检测细胞增殖;用甲苯胺蓝染色、免疫细胞染色及免疫荧光染色观察转染后第3代hASCs细胞诱导分化情况,RT-qPCR、Western blot法检测诱导分化2周后各组Cbfα-1、Smad3、TGF-β1、ColⅡmRNA和蛋白表达。结果转染后miR-205过表达组miR-205基因相对表达量高于miR-NC组和对照组(P<0.001)。miR-205过表达组转染后hASCs细胞培养3、7 d MTT试验吸光度(A)值高于对照组和miR-NC组(P<0.05)。诱导分化2周后,甲苯胺蓝染色显示,miR-205过表达组细胞染色呈强阳性深蓝染色,对照组和miR-NC组为微弱浅蓝色;免疫细胞化学染色显示,miR-205过表达组细胞及胞外基质强阳性棕黄染色,对照组和miR-NC组为弱阳性淡黄染色;免疫荧光染色显示,miR-205过表达组红色荧光强度较强,对照组和miR-NC组红色荧光强度较暗淡。miR-205过表达组诱导分化后Cbfα-1 mRNA和蛋白相对表达量低于对照组和miR-NC组,Smad3、TGF-β1、ColⅡmRNA和蛋白相对表达量高于对照组和miR-NC组(P<0.05)。结论miR-205过表达可促进hASCs细胞增殖、促进细胞向软骨细胞方向分化,可能通过抑制Cbfα-1、激活TGF-β1/Smad3信号通路发挥调控作用。展开更多
目的:探讨吲哚菁绿(ICG)示踪联合三维可视化技术指导下改良右半肝切除术(MRH)治疗肝细胞癌(HCC)的临床效果。方法:回顾性分析2018年1月至2020年12月行MRH的92例HCC患者的临床资料,根据患者是否采用ICG示踪联合三维可视化技术指导分为传...目的:探讨吲哚菁绿(ICG)示踪联合三维可视化技术指导下改良右半肝切除术(MRH)治疗肝细胞癌(HCC)的临床效果。方法:回顾性分析2018年1月至2020年12月行MRH的92例HCC患者的临床资料,根据患者是否采用ICG示踪联合三维可视化技术指导分为传统组(n=50)和联合组(n=42)。传统组采用传统影像学评估行MRH,联合组采用ICG示踪联合三维可视化技术指导行MRH。数据应用软件SPSS 22.0处理,围手术期相关指标、肝功能指标等计量资料采用(xˉ±s)表示,肝功能指标行重复测量方差分析,其余均行独立样本t检验;术后并发症等计数资料行χ^(2)检验;生存分析采用Kaplan-Meier法并行Log-Rank检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果:联合组手术时间、肝门阻断时间及术中出血量均显著低于传统组(P<0.05);时间与方法在白蛋白(ALB)、总胆红素(TBil)及谷丙转氨酶(ALT)水平上不存在交互作用(P>0.05),时间与方法在ALB、TBil、ALT水平上主效应显著(P<0.05)。联合组患者术后并发症的总发生率较传统组显著降低(11.9% vs. 30.0%,P<0.05)。随访期间,联合组的累积总生存率及无病生存率均显著高于传统组(P<0.05)。结论:ICG示踪联合三维可视化技术指导下MRH治疗HCC不仅可有效缩短手术时间,减少术中损伤,而且还有利于患者术后肝功能恢复,降低术后并发症发生,提高患者预后。展开更多
文摘目的 检测环状核糖核酸(circular RNA,cicrRNA)hsa_circ_0006950在胰腺癌(pancreatic cancer,PC)中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖、迁移的影响及其潜在分子作用机制。方法 利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa_circ_0006950在胰腺癌组织及细胞中的相对表达水平;转染hsa_circ_0006950干扰载体构建低表达细胞系,通过CCK-8实验、克隆斑点形成实验和Transwell实验检测hsa_circ_0006950对胰腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移的影响;利用生物信息学网站预测hsa_circ_0006950的miRNA分子靶标及其调控网络(hsa_circ_0006950-miR-124-3p-EZH2),双荧光素酶基因报告实验验证hsa_circ_0006950和miR-124-3p,miR-124-3p和EZH2的靶向结合关系;转染过表达/干扰miR-124-3p和过表达EZH2细胞系,探究miR-124-3p和EZH2及hsa_circ_0006950调控miR-124-3p/EZH2轴对胰腺癌细胞克隆形成及迁移的影响。结果 胰腺癌组织中hsa_circ_0006950表达明显高于癌旁正常组织(3.57±0.52 vs 1.01±0.03),差异有统计学意义(t=21.980,P<0.001)。胰腺癌细胞PANC-1(7.51±0.62),AsPC-1(5.26±0.45),Capan-2(3.69±0.38),SW1990(3.25±0.32)and BXPC-3(3.86±0.35)中hsa_circ_0006950相对表达明显高于正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7(1.00±0.01)中的表达,差异有统计学意义(F=88.585,P<0.001)。与对照组相比,干扰hsa_circ_0006950表达组细胞增殖能力(0.79±0.17 vs 1.83±0.42),克隆形成率(51.42%±5.84%vs 78.76%±13.65%)和迁移数目(104.64±24.73 vs 218.21±31.57)明显降低,差异均有统计学意义(t=3.976,3.190,4.905,P=0.016,0.033,0.008)。mi R-124-3p是hsa_circ_0006950的下游靶基因,EZH2是miR-124-3p的直接靶标。hsa_circ_0006950靶向负调控miR-124-3p,miR-124-3p靶向负调控EZH2。与对照组相比,过表达miR-124-3p组PC细胞增殖(0.21±0.16 vs1.75±0.47),克隆形成率(47.85%±4.13%vs 81.54%±2.33%)和细胞迁移数目(118.74±24.65 vs 202.36±31.45)明显降低,差异均有统计学意义(t=5.378,14.317,3.390,均P<0.001);共转染过表达EZH2后,miR-124-3p对细胞增殖、克隆形成率及迁移能力的抑制作用被逆转。在干扰hsa_circ_0006950组细胞中同时下调miR-124-3p或过表达EZH2后,hsa_circ_0006950对细胞克隆形成及迁移的抑制作用被逆转恢复。结论 胰腺癌中hsa_circ_0006950显著高表达,抑制其表达可以抑制胰腺癌细胞的增殖及迁移;hsa_circ_0006950可能通过靶向下调miR-124-3p表达,进而上调EZH2表达来发挥作用,参与胰腺癌的发生发展。
文摘目的检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法利用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p相对表达;构建miR-505-3p过表达、c-MYC过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8法,克隆斑点形成实验、Transwell侵袭/迁移实验检测miR-505-3p和c-MYC对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p和c-MYC的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot检测miR-505-3p和c-MYC对Wnt/β-catenin通路关键蛋白表达的影响。结果临床胃癌组织中miR-505-3p表达水平较正常癌旁组织显著下调(0.92±0.37 vs 1.74±0.59),差异有统计学意义(t=3.723,P<0.01)。胃癌细胞系MGC803(1.12±0.35),AZ521(2.31±0.24)和HGC-27(2.28±0.43)中miR-505-3p相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1(4.62±0.79)明显降低,差异有统计学意义(F=26.109,P<0.001)。miR-505-3p过表达组细胞增殖(0.92±0.27)、克隆形成(51.67±21.75)、迁移(43.25±15.47)、侵袭(38.53±14.76)能力较NC组(1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94)明显降低,差异均有统计学意义(t=3.131~7.166,均P<0.05);miR-505-3p过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC是miR-505-3p的靶基因,miR-505-3p靶向负调控c-MYC。c-MYC过表达组细胞增殖(2.72±0.68)、迁移(147.15±20.36)、侵袭(145.46±22.73)能力较NC组(1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94)明显增高,差异均有统计学意义(t=2.455~4.456,均P<0.05);c-MYC过表达可逆转miR-505-3p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p过表达组Wnt(0.46±0.07),β-catenin(0.50±0.05)蛋白相对表达水平明显低于NC组(1.01±0.02,1.02±0.02),差异均有统计学意义(t=8.139,7.342,均P<0.001);过表达c-MYC能够逆转miR-505-3p对Wnt和β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论胃癌中miR-505-3p显著低表达,其可通过靶向调控c-MYC表达介导Wnt/β-catenin信号通路激活进而发挥作用参与胃癌的发生发展过程。
文摘目的探讨微小RNA(miR)-205通过调控核心结合因子α-1(Cbfα-1)表达促进人脂肪干细胞(hASCs)细胞系向软骨细胞方向分化的作用及机制。方法慢病毒转染法将Lenti-miR-205、Lenti-control慢病毒液分别转染至hASCs细胞,命名为miR-205过表达组、miR-NC组,另取未处理细胞为对照组;RT-qPCR法检测转染后miR-205基因表达量,MTT比色法检测细胞增殖;用甲苯胺蓝染色、免疫细胞染色及免疫荧光染色观察转染后第3代hASCs细胞诱导分化情况,RT-qPCR、Western blot法检测诱导分化2周后各组Cbfα-1、Smad3、TGF-β1、ColⅡmRNA和蛋白表达。结果转染后miR-205过表达组miR-205基因相对表达量高于miR-NC组和对照组(P<0.001)。miR-205过表达组转染后hASCs细胞培养3、7 d MTT试验吸光度(A)值高于对照组和miR-NC组(P<0.05)。诱导分化2周后,甲苯胺蓝染色显示,miR-205过表达组细胞染色呈强阳性深蓝染色,对照组和miR-NC组为微弱浅蓝色;免疫细胞化学染色显示,miR-205过表达组细胞及胞外基质强阳性棕黄染色,对照组和miR-NC组为弱阳性淡黄染色;免疫荧光染色显示,miR-205过表达组红色荧光强度较强,对照组和miR-NC组红色荧光强度较暗淡。miR-205过表达组诱导分化后Cbfα-1 mRNA和蛋白相对表达量低于对照组和miR-NC组,Smad3、TGF-β1、ColⅡmRNA和蛋白相对表达量高于对照组和miR-NC组(P<0.05)。结论miR-205过表达可促进hASCs细胞增殖、促进细胞向软骨细胞方向分化,可能通过抑制Cbfα-1、激活TGF-β1/Smad3信号通路发挥调控作用。
文摘目的:探讨吲哚菁绿(ICG)示踪联合三维可视化技术指导下改良右半肝切除术(MRH)治疗肝细胞癌(HCC)的临床效果。方法:回顾性分析2018年1月至2020年12月行MRH的92例HCC患者的临床资料,根据患者是否采用ICG示踪联合三维可视化技术指导分为传统组(n=50)和联合组(n=42)。传统组采用传统影像学评估行MRH,联合组采用ICG示踪联合三维可视化技术指导行MRH。数据应用软件SPSS 22.0处理,围手术期相关指标、肝功能指标等计量资料采用(xˉ±s)表示,肝功能指标行重复测量方差分析,其余均行独立样本t检验;术后并发症等计数资料行χ^(2)检验;生存分析采用Kaplan-Meier法并行Log-Rank检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果:联合组手术时间、肝门阻断时间及术中出血量均显著低于传统组(P<0.05);时间与方法在白蛋白(ALB)、总胆红素(TBil)及谷丙转氨酶(ALT)水平上不存在交互作用(P>0.05),时间与方法在ALB、TBil、ALT水平上主效应显著(P<0.05)。联合组患者术后并发症的总发生率较传统组显著降低(11.9% vs. 30.0%,P<0.05)。随访期间,联合组的累积总生存率及无病生存率均显著高于传统组(P<0.05)。结论:ICG示踪联合三维可视化技术指导下MRH治疗HCC不仅可有效缩短手术时间,减少术中损伤,而且还有利于患者术后肝功能恢复,降低术后并发症发生,提高患者预后。