钙调素拮抗剂EBB逆转K562/VCR细胞系多药耐药性的研究

急性白血病细胞对化疗药耐药性是化疗失败的主要原因,在本研究中应用新的钙调素拮抗剂0-4-乙氧基-丁基-小檗胺(0-4-ethoxy-butyl-berbamine,EBB)体外逆转多药耐药性获得成功。EBB对多药耐药K562/VCR细胞系具有抑制作用并有剂量依赖关系,低浓度的EBB(IC10 0.35μg/ml)与长春新碱联合应用可提高长春新碱对细胞的毒性作用,其IC50由1.89μg/ml降至0.37μg/ml;K562/VCR细胞系对EBB的敏感性明显高于K562细胞,用斑点杂交的方法证明EBB可降低MDR-1的mRNA表达;用免疫荧光方法证明EBB可降低p170蛋白在K562/VCR细胞中的表达,其阳性率由42％降至5.9％;电镜观察显示EBB作用后的K562/VCR细胞中高尔基区比对照组小;用流式细胞仪测定单个细胞DNA水平,证明EBB增加细胞在G_2/M期的百分比(EBB组为39％,对照组为22％)。以上结果证明EBB可能是一个有前途的耐药逆转剂,并具有多种逆转耐药途径。

在骨髓长期培养中基质细胞间的相互关系

本实验观察,在骨髓长期培养中各种基质细胞间的相互关系和特殊的连接结构。免疫电镜观察表明,上皮样基质细胞具有分泌纤维结合蛋白(Fn)的功能,后者在细胞与基质及细胞间的连接中起介导作用。

B-慢性淋巴细胞白血病细胞的异质性——咐醇酯诱导后超微结构研究

为研究B-CLL白血病细胞的发育,对9例B-CLL白血病细胞用咐醇酯(TPA)进行诱导试验,并对其诱导前后进行透射及扫描电镜观察,发现 B-CLL 细胞对 TPA 反应不同,其诱导后的形态也不同,表现明显的异质性,并发现部份病例经 TDA 诱导后呈现 HCL (毛白)诱导后的形态,为毛白亚型。

骨髓基质细胞及其与造血细胞的关系研究工作取得进展

很多血液病与骨髓造血功能的改变有密切关系,而造血功能又与造血微环境的改变有密切关系。1970年国外有学者提出一个多能造血干细胞之所以分化成为粒细胞、红细胞或巨核细胞是由它所处的造血微环境决定的。有的学者提出部分再生障碍性贫血可能是造血微环境的病变引起的。但造血过程中造血干细胞在发育中与造血微环境的关系如何,形态学基础是什么,还不清楚。

钙调素拮抗剂EBB对HT1080细胞系侵袭能力的影响

目的研究钙调素拮抗剂EBB抑制HT1080人纤维肉瘤细胞侵袭的作用。方法采用四唑盐(MTT)比色试验测定药物敏感性,Zymogrophy测定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9明胶酶活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-2、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达,Transwell小室进行细胞侵袭分析。结果MTT测得半数抑制浓度(IC50)为(8.2±1.2)μg/ml。钙调素拮抗剂EBB使HT1080细胞的侵袭能力明显下降(P<0.001),表现为MMP-2和MMP-9基因表达及酶活性下降。同时TIMP-1的基因表达量相应升高。结论钙调素拮抗剂EBB可以降低HT1080人纤维肉瘤细胞的侵袭能力,基质金属蛋白酶分泌受抑制可能是抑制细胞转移的机制之一。

钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用

目的研究钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用。方法采用四唑盐(MTT)比色法测定药物敏感性,分析联合应用低剂量EBB(≤IC20)时阿霉素(ADR)对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50)值及其增敏倍数;应用流式细胞术测定EBB对细胞周期的影响,同时观察细胞内药物浓度的积累;采用逆转录—多聚酶链反应检测EBB对多药耐药基因-1(mdr1)及拓扑异构酶Ⅱb(topⅡb)mRNA表达水平的影响。结果EBB对MCF-7/ADR的多药耐药具有明显逆转作用,3、7·5μmol/L浓度的EBB可以明显提高MCF-7/ADR对ADR的敏感性,平均增敏倍数分别为50·40、89·80倍,逆转强度明显高于阳性逆转剂维拉帕米(VPL)的14·88倍(P=0·0097)。6μmol/L的EBB处理2h后,细胞内积累的P糖蛋白底物罗丹明123(Rh123)荧光强度峰值发生明显右移;同时EBB可明显增强ADR对MCF-7/ADR细胞在G2/M期的阻滞作用。6和12μmol/L的EBB处理MCF-7/ADR细胞48h后,mdr1的mRNA表达水平有一定的降低趋势,但无统计学差异;topⅡb基因表达差异亦无显著性。结论EBB对MCF-7/ADR细胞具有较强的逆转多药耐药作用,其可能的逆转机制在于增强ADR对耐药细胞在G2/M期的阻滞以及抑制P糖蛋白外排泵作用。

长期培养的急性粒细胞白血病患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因的高水平表达

在人骨髓细胞长期培养中,观察造血细胞与基质细胞的关系,检测不同类型的白血病患者及其他非血液病患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因的mRNA表达水平。基质细胞培养采用人骨髓细胞长期培养的方法,mRNA表达的检测采用地高辛标记cDNA探针和细胞原位斑点杂交法。培养4-6周时,部分急性粒细胞白血病(AML),慢性粒细胞白血病(CML)及骨髓增生异常综合征(MDS)患者的造血细胞获得独立生长的能力。与对照组相比,AML患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因表达明显增高(P<0.05)。src原癌基因的高表达,提示在白血病发病中有造血微环境异常。

几种血液病骨髓活检中细胞凋亡的形态学观察

细胞凋亡(apoptosis)不同于坏死的细胞死亡方式,它是由基因控制的细胞自我消亡过程。细胞凋亡与白血病发生的关系已有不少报道,但有关血液病骨髓活检中细胞凋亡的形态学观察及意义报告尚少。我们对95例未经特殊治疗的各种良性和恶性血液病骨髓活检塑料包埋切片进行了仔细地形态学观察。发现各种白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)和一些良性血液病均存在典型的凋亡细胞,并对其出现率和数量进行了比较分析。1 材料与方法1.1 病例资料 本院门诊及住院未经特殊治疗的慢性粒细胞白血病(CML)10例,急性非淋巴细胞白血病(ANLL)10例(M_2b 2例,M_6 1例,M_4 2例,M_2a 2例,M_3 2例,M_1 1例),MDS 30例（RA 9例,RAEB 11例,RAEB-T 10例）,真性红细胞增多症(PV)10例,溶血性贫血10例（自身免疫溶血性贫血2例,阵发性睡眠性血红蛋白尿6例,遗传性球形红细胞增多症2例）,原发性血小板减少性紫癜(ITP)10例,慢性再生障碍性贫血(CAA)10例,巨幼细胞性贫血（简称巨幼贫,包括不同病因的）5例。以上均由本院血液内科按国内有关标准诊断。1.2 方法 常规骨髓活检,PCF 固定,塑料包埋切片,H-Giemsa-E染色,光镜观察计数O.

小鼠淋巴细胞白血病细胞系的建立及其生物学特性的研究(简报)

本研究建立了一种经PHA-脾条件培养液刺激,在体外液体微培养中形成肿瘤干细胞集落,再接种小鼠体内,发病后取细胞在体外连续培养建成白血病细胞系的新方法。采用此法对4株小鼠可移植性白血病细胞进行建系培养,成功地建成了细胞系(L7811-85,L7212-85,L1210-86和P388-86)已分别传代141～29代。对小鼠S180及肝Ca细胞建系也获得成功,表明此方法对小鼠肿瘤细胞建系也有一定的价值。

胰腺囊实性乳头状瘤4例CT表现

例1：女，59岁，主因腹部饱胀感伴乏力、消瘦3个月，背部疼痛6d，于2010年3月713入院。查体：腹部饱满，于腹中部偏右侧可触及圆形包块，边界清，肿瘤标记物[癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）、癌抗原125（CA125）、癌抗原19-9（CA19—9）]化验检查正常，18F-脱氧葡萄糖（FDG）PET代谢局部增高。超声示：右上腹囊实性占位，考虑来源于胰腺。行CT进一步检查示：胰头位置见分叶状囊实性密度影，实性与囊性分布不规整，呈浮云样改变，边界尚清，

血瘀证实质和活血化瘀药物作用机理的研究

本文从炎症/免疫性炎症、微循环障碍、结缔组织代谢异常及纤维化形成、高粘滞血症等方面研究了血瘀证的实质,指出血管内皮细胞变化是病变的中心环节,认为气血关系与血瘀证关系密切,活血化瘀以及益气活血中药调节机体气血平衡关系,其作用主要通过调节神经-内分泌-免疫功能来实现。本文对通脉灵及其有效单体(IH764-3)、虎桃(HT)冲剂抗纤维化及其作用机理进行了系列的研究。结果表明,通脉灵及IH764-3对大鼠肺动脉高压、炎症、肺纤维化有明显作用,IH764-3对丙二醛(MDA)升高有抑制作用,对中性粒细胞(PMN)质膜功能酶自由基损伤有保护作用,药物通过抗炎等作用间接达到抗纤维化的结果。HT冲剂预防和治疗组肺纤维化的病理变化有明显改善,肺组织中的ICAM-1,VCAM-1,LFA-1,MCP-1,GM-CSF和TNF-α表达水平明显低于模型组;总胶原,Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及其mRNA水平均明显降低。结果表明,HT冲剂对肺纤维化有明显的预防和治疗效果。

亚急性粒细胞白血病（M_（2b））的临床及实验研究

经研究发现亚急粒细胞白血病细胞形态较为特殊。各种组化染色阳性物质呈团块状且位于核的凹陷处；电镜下易发现特殊的包含体。临床病程较Ｍ＿２ａ长，发病缓渐，易发生神经系统等髓外浸润。核型分析有ｔ（８；２１），常伴有性染色体丢失。免疫表型分析符合为分化较好的粒细胞白血病；有ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因。在我国年发病率为０．１９４／１０￣５。

纤维联接蛋白FN、凝血酶敏感蛋白(TSP)在成纤维细胞及骨髓基质细胞的免疫电镜定位

本文用免疫电镜技术(过氧化酶标记和胶体金标记)在来自兔角膜瘢痕的纤维母细胞和来自小鼠骨髓的长期培养的基质上进行了纤维粘连蛋白(FN),血小板凝血酶敏感蛋白(TSP)定位。结果显示在纤维母细胞和骨髓基质细胞表面以及细胞外细纤维构成的网中。另外,有时在上述二种细胞胞浆中也可以看到FN和TSP的定位。应用免疫电镜技术可以研究各种结缔组织增生性疾病,FN和TSP的分布以及它们和结缔组织增生的关系,为纤维化形成机制以及胶原形成细胞、基质细胞和其它细胞的关系提供了形态学依据。

单抗—药物偶合物对HL60细胞特异性结合与内化的研究

我们在电镜水平上用胶体金标记技术研究H198单抗与柔红霉素(DNR)偶合物(HI98-DNR-Au)对HI98抗元的特异性结合和内化作用。结果表明HI98-DNR-Au与HL60细胞在4℃孵育60分钟后,可见金颗粒与100％HL60细胞的表面膜结合;在上述条件孵育后,然后再在37℃中孵育15分钟,金颗粒可在30％的细胞胞浆内以及8％的核内出现;胞浆内的金颗粒可随孵育时间的延长(30’,60’,120’和240’)而明显增加,而表面膜上的金颗粒则随时间的延长而减少,金颗粒通过吞饮泡的形成而内化。在吞饮泡内簇集的金颗粒可融合成金斑块或破碎成细粒,一些金颗粒通过吞饮泡的膜或胞膜进入胞浆以及通过核膜而进入核内。但作为对照。

毛细胞白血病脾切除4例报告

毛细胞白血病(HCL)是一种少见类型的白血病,约占白血病发病人数的2～3％。1923年,Bowro-ncle等明确指出此病是一个独特的疾病。1966年,Schrek等首先采用毛细胞白血病的名称。近年来,本院收治了4例HCL,现将其诊断和脾切除治疗等问题报告如下。

四种常见血液病外科治疗的体会

对4种常见血液病进行了脾切除,随诊4个月～15年,结果为原发性血小板紫癜症有效率83.1％,血红蛋白H病血红蛋白平均增加了35g/L,慢性再生障碍性贫血有效率为65.2％,遗传性球性细胞增多症的血红蛋白平均增加58.578g/L。术后无腹腔内出血,近期4例有感染,远期无OPSI。对手术适应证,手术时机,感染和血栓形成,急诊切脾,免疫状态,病理学观察等进行了讨论。

急性白血病患者骨髓基质造血微环境的某些异常<英文>

为了探索人白血病骨髓造血微环境的异常所在,本实验采用胶体金标记及银增染的免疫电镜方法,检测了急性白血病患者及正常人骨髓长期培养的基质细胞某些生长因子、粘附分子及细胞外基质的表达情况。结果表明,急性白血病患者长期培养的基质细胞表达的GM-CSF(粒-巨噬系集落刺激因子)较对照组高,淋巴细胞归巢相关粘附分子(HCAM),血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)较对照组低,纤连蛋白(Fn)和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)与对照组无差别。结论提示急性白血病患者骨髓长期培养的基质细胞某些生长因子和粘附分子表达异常。