IL-35、Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义

目的探讨白细胞介素(IL)-35、自噬相关蛋白Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义。方法选取2022年5-10月在上海市嘉定区妇幼保健院诊治的原发性乳腺癌女性患者44例(乳腺癌组)、乳腺良性肿瘤女性患者40例(乳腺良性肿瘤组)及体检的健康者40例(健康对照组)作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验检测并比较各组外周血中IL-35和Beclin-1水平,同时检测乳腺癌患者糖类抗原15-3(CA15-3),比较不同临床病理特征的乳腺癌患者IL-35、Beclin-1、CA15-3水平;分析乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1、CA15-3水平之间的相关性。结果乳腺癌组和乳腺良性肿瘤组外周血IL-35水平均高于健康对照组(P<0.05),Beclin-1水平均低于健康对照组(P<0.05)。乳腺癌组外周血IL-35水平高于乳腺良性肿瘤组(P<0.05),Beclin-1水平低于乳腺良性肿瘤组(P<0.05)。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同雌激素受体(ER)检测结果的乳腺癌患者外周血IL-35水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),而Beclin-1水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关(r=-0.484,P<0.05);IL-35、Beclin-1水平与CA15-3水平均无相关性(均P>0.05)。结论乳腺癌患者外周血IL-35水平升高、Beclin-1水平降低。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平有明显差异。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关,而IL-35、Beclin-1水平与肿瘤标志物CA15-3水平均无关。

孕中期孕妇血清3种维生素水平的年龄、季节变化及其对妊娠期糖尿病的影响

目的探讨孕中期孕妇血清25羟维生素D[25-(OH)D]、叶酸和维生素B 12水平的年龄、季节变化,以及其对妊娠期糖尿病(GDM)的影响。方法选择2021年1-12月于上海市嘉定区妇幼保健院产检的4830例孕妇作为研究对象。按年龄段分为≤25岁827例,>25~30岁2069例,>30~35岁1550例,>35岁387例;按照孕中期检测维生素水平时所处的季节划分,春季1137例,夏季1422例,秋季1149例,冬季1125例;根据孕中期口服葡萄糖耐量试验(OGTT)结果将孕妇分为对照组(健康妊娠,n=4015)和GDM组(n=815)。于孕中期检测血清25-(OH)D、叶酸和维生素B_(12)水平,比较不同年龄段、不同季节这3种维生素水平,并通过Logistic回归分析年龄及这3种维生素水平对GDM发病的影响。结果与其他年龄段相比,≤25岁孕妇血清中25-(OH)D、叶酸和维生素B_(12)水平均最低,差异均有统计学意义(P<0.05);四季中25-(OH)D、叶酸、维生素B 12水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。25-(OH)D水平在夏季最高,在冬季最低;叶酸水平在秋季最高,在冬春季节最低;维生素B 12水平在秋季最高,在春季最低。GDM组孕妇年龄大于对照组(P<0.05),25-(OH)D水平低于对照组(P<0.05),叶酸高于对照组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,孕妇年龄及血清中25-(OH)D、叶酸水平均是发生GDM的影响因素(P<0.05)。结论不同年龄段、不同季节孕妇体内25-(OH)D、叶酸和维生素B_(12)水平不同,孕妇年龄及血清中25-(OH)D、叶酸水平均是发生GDM的影响因素,应根据孕妇年龄及季节及时调整维生素的补充,有利于降低GDM的发生。

孕妇梅毒血清学筛查流程探讨

目的探讨孕妇梅毒血清学筛查流程。方法收集经化学发光法(CLIA)筛查抗梅毒螺旋体(TP)抗体S/CO值≥1.0的548例孕妇的血清样本。分别采用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和免疫印迹法进行复检。以免疫印迹法的检测结果为标准,计算单一方法检测及多种方法联合检测的阳性预测值,并建立孕妇梅毒血清学筛查流程。结果548例孕妇血清样本中,免疫印迹法阳性494例、阴性43例、不确定11例(后续研究剔除这11例样本);TRUST阳性295例、阴性253例;CMIA阳性(S/CO值≥1.0)490例、阴性(S/CO值<1.0)58例。以免疫印迹法结果为标准,CLIA/TRUST/CMIA(+/-/-)、CLIA/TRUST(+/-)、CLIA/TRUST/CMIA(+/-/+)、CLIA/TRUST(+/+)和CLIA/TRUST/CMIA(+/+/+)的阳性预测值分别为22.4%、82.2%、97.4%、100.0%和100.0%。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,CLIA/TRUST/CMIA(+/-/+)组合中CMIA的最佳S/CO临界值为2.31,此时敏感性为94.7%、特异性为100.0%。根据以上结果建立孕妇梅毒血清学筛查流程:先采用CLIA初筛,如结果呈阴性则报告阴性,如呈阳性则加做TRUST;TRUST阳性报告阳性,阴性则采用CMIA复检;复检阳性且S/CO值≥2.31则报告阳性,复检阴性或虽呈阳性但S/CO值<2.31则加做免疫印迹法检测,最后根据免疫印迹法结果出具报告。结论结合4种梅毒血清学试验方法建立了孕妇梅毒筛查流程,可在减少免疫印迹法复检的同时,提高孕妇梅毒诊断的准确性。

化学发光微粒法检测孕妇抗TP抗体的复检范围探讨

目的探讨基于化学发光法(CLIA)初筛抗TP抗体阳性的孕妇标本应用化学发光微粒法(CMIA)检测的复检范围。方法选取经科美Chemclin CLIA系统筛查抗TP抗体S/CO≥1.0的548例孕妇血清标本,采用CMIA检测548例孕妇血清标本的抗TP抗体,同时用免疫印迹法(WB)进行确认,以WB检测结果为标准,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CMIA检测孕妇抗TP抗体的性能。结果CMIA检出孕妇抗TP抗体的S/CO≥1.0的标本490例,经WB确认,阳性483例,不确定2例,阴性5例,根据ROC曲线,约登指数最大时(0.979),抗TP抗体S/CO为2.31,灵敏度为97.9%,特异度为100.0%;CMIA检出孕妇抗TP抗体的S/CO<1.0的标本58例,经WB确认,阳性11例,不确定9例,阴性38例,根据ROC曲线,约登指数最大时(0.921),抗TP抗体S/CO为0.22,灵敏度为100.0%,特异度为92.1%。结论根据ROC曲线计算的最佳截断值,CMIA检测孕妇抗TP抗体的复检范围S/CO设定为0.22~2.31,S/CO在此范围的孕妇标本须采用WB确认,以确保结果的准确性。

化学发光免疫分析法检测孕妇抗TP抗体阳性判断值探讨

目的建立适合孕妇的抗梅毒螺旋体(TP)抗体化学发光免疫分析法(CLIA)阳性判断值。方法用科美东雅Chemclin CLIA系统检测13 974例孕妇血清抗TP抗体,对抗TP抗体筛查试验呈阳性反应[信号/临界值(S/CO)比值≥1.0]的样本,用免疫印迹法(WB)分析确认。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CLIA的检测性能。结果 Chemclin CLIA系统检出抗TP抗体S/CO比值≥1.0的样本152例,初筛呈阳性反应的样本比率为1.09%;初筛呈阳性反应样本经WB确认,阳性119例,不确定7例,阴性26例,初筛呈阳性反应样本中假阳性率为17.11%。根据ROC曲线,约登指数最大时,抗TP抗体S/CO比值为3.32;Chemclin CLIA系统抗TP抗体筛查试验阳性预测值≥95%的S/CO比值为3.25。结论为既降低抗TP抗体筛查试验假阳性率,又减少须进行补充确证试验的样本数,各实验室应建立针对不同人群和检测系统(试剂)合适的界值,以确定筛查试验阳性样本需进行确证试验的S/CO比值范围。

HE4、CAl53联合检测在乳腺癌辅助诊断中的应用

目的研究血清人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)、癌抗原153(CAl53)联合检测在乳腺癌辅助诊断中的价值。方法收集46例乳腺癌患者、52例乳腺良性疾病患者以及50名正常对照者血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清HE4含量、电化学发光法检测CAl53含量。采用受试者工作特征(ROC)曲线确定HE4和CA153的临界值。分别计算HE4和CA153单项检测和联合检测的敏感性和准确性并作比较。结果乳腺癌组HE4和CAl53水平分别是49.0(41.7～67.4)pmol/L和20.6(13.4～28.7)U/mL,均明显高于乳腺良性疾病组及正常对照组(P<0.01)。经ROC曲线确定HE4和CA153的临界值分别为62.5 pmol/L和21.6 U/mL,乳腺癌HE4、CAl53联合检测的敏感性为63.0%,准确性为82.4%,均高于单项检测。结论联合检测CAl53和HE4可以明显提高乳腺癌诊断的准确性及敏感性。

绝经后女性盆底脏器脱垂患者阴道前壁组织中层粘连蛋白、胶原蛋白及雌激素受体的表达

目的研究绝经后女性盆底脏器脱垂患者阴道前壁组织中层粘连蛋白(LN)、胶原蛋白及雌激素受体(ER)的表达。方法选择2016年1月至2018年12月于上海市嘉定区妇幼保健院因绝经后盆底脏器脱垂行阴式全子宫切除术+阴道壁修补术的40例患者作为观察组;另选择同期因其他子宫良性病变行阴式子宫全切术的40例患者作为对照组。术前采用酶联免疫吸附试验检测2组患者血清LN水平;术中取2组患者阴道前壁组织,采用荧光定量聚合酶链反应法检测LN mRNA表达,采用免疫组织化学法检测LN、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及ER表达。结果术前,观察组与对照组患者血清LN水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者阴道前壁组织中LN mRNA的相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。观察组和对照组患者阴道前壁组织中LN阳性表达率分别为12.5%(5/40)、27.5%(11/40),观察组患者阴道前壁组织中LN阳性表达率显著低于对照组(χ2=45.262,P<0.01)。观察组患者阴道前壁组织中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及ER表达评分均显著低于对照组(P<0.05)。结论LN、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及ER在绝经后女性盆底脏器脱垂患者阴道前壁组织中的表达降低,推测绝经后女性盆底脏器脱垂与以上因素有关。

孕晚期B族链球菌定植的危险因素及与不良妊娠结局的关系

目的探讨该院孕晚期孕妇B族链球菌(GBS)定植的危险因素及与不良妊娠结局的关系。方法选取2019年10月至2020年1月到该院就诊的439例孕晚期孕妇为研究对象。所有孕妇均取阴道及肛周分泌物标本进行实时荧光定量PCR检测GBS。采用多因素Logistic回归分析影响孕妇GBS定植的独立危险因素,并比较GBS阳性与阴性孕妇不良妊娠结局。结果与GBS阴性孕妇相比,GBS阳性孕妇有流产史人数比例、解脲支原体阳性率、真菌阳性率、唾液酸苷酶阳性率较高,白带清洁度Ⅲ~Ⅳ度所占比例较高,差异有统计学意义(P<0.05)。白带清洁度Ⅲ~Ⅳ度、唾液酸苷酶阳性、解脲支原体阳性、有流产史是影响孕晚期孕妇GBS定植的独立危险因素(P<0.05)。GBS阳性孕妇产程中发热、胎儿宫内窘迫、新生儿感染的发生率高于GBS阴性孕妇,差异有统计学意义(P<0.05)。结论影响该院孕晚期孕妇GBS定植的独立危险因素为有流产史、白带清洁度Ⅲ~Ⅳ度、唾液酸苷酶阳性、解脲支原体阳性,临床可针对上述因素加强对孕妇的健康宣教,有效预防孕妇GBS定植,改善母婴结局。

孕中期母血清标记物筛查唐氏综合征及其他先天性畸形的临床价值

目的探讨唐氏综合征(DS)筛查在本地区运用的有效性,建立本实验室中位数的参考值,提高筛查效率。方法对3589例孕妇用微粒子发光酶免疫分析仪(Access)检测甲胎蛋白(AFP)、β-绒毛膜促性腺激素(β-HCG)和游离雌三醇(uE3),利用配套软件计算风险率。筛查为高风险的孕妇进行遗传咨询,在知情同意的情况下进行羊水或B超检查。每例筛查孕妇随访至妊娠结局。结果3589例孕妇中唐氏综合征高危230例、18三体(Trisomy-18)高风险14例、神经管缺陷(NTD)高危52例,筛查阳性率分别6.41%、0.39%和1.45%,在阳性孕妇中染色体异常2例,发现2例神经管缺陷患儿。结论母血清标记物进行唐氏综合征及其他先天畸形的产前筛查并结合其他方法进行诊断,对降低出生缺陷具有积极意义。各筛查实验室应建立血清指标的中位数水平。

实时荧光定量PCR在B族链球菌产前检查中的可行性分析

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在B族链球菌产前检查中的可行性。方法收集2019年7月至2020年2月到该院进行产前检查、孕周34~37周的孕晚期孕妇共2 012例的阴道-肛周分泌物标本进行普通细菌培养和实时荧光定量PCR检测,比较两种方法对B族链球菌的检出率,分析药敏试验结果、采样部位和B族链球菌菌液浓度对实时荧光定量PCR检出率的影响。结果实时荧光定量PCR检出率为9.5%,普通细菌培养检出率为3.6%,两种方法阳性检出率比较,差异有统计学意义(P<0.05);采样部位对B族链球菌的检出影响明显,阴道-肛周双部位采样可明显提高B族链球菌的检出率,差异有统计学意义(P<0.05);对实时荧光定量PCR检出阳性孕妇使用青霉素治疗,对青霉素过敏者,可采用头孢噻肟治疗,对青霉素和头孢噻肟均过敏者建议补充普通细菌培养法及药敏试验,采用个性化药物治疗。结论实时荧光定量PCR可提高B族链球菌的检出率,该方法用在B族链球菌产前检查中具有可行性。

孕中期产前筛查母血清标志物中位数倍数的应用

目的:对嘉定地区孕中期孕妇甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotrophin,β-hCG)、游离雌三醇(unconjugated estriol,uE3)的中位数倍数(MoM)筛查结果进行回顾性分析,探讨在筛查可能孕唐氏综合征等患儿的孕妇时校正上述血清指标MoM的必要性。方法:选取1298例孕妇(孕周为15～21周)构建血清AFP、β-hCG、uE3中位水平与孕周间的回归关系,得到指标中位浓度,并对MoM值与体重的关系运用倒数模型回归得到体重校正后的MoM值。结果:结果显示孕周与3个血清指标水平的MoM值间无相关性(AFP:r=-0.045,P=0.102;β-hCG:r=-0.006,P=0.821;uE3:r=-0.042,P=0.132)。在未经体重校正的条件下,嘉定地区孕中期孕妇的AFP中位水平比软件内嵌的AFP参考值水平要低16.4%,β-hCG要高14.1%,uE3要高6.3%;软件计算的AFP MoM值中位数为0.78,β-hCG的MoM值中位数为1.02,uE3的MoM值中位数为1.03。经体重校正后的血清AFP、β-hCG、uE3的MoM值中位数分别为0.99、0.98和0.98,其中AFP、uE3的MoM值中位数在体重校正前、后的差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:嘉定地区孕中期妇女的血清AFP、β-hCG、uE3中位水平与应用软件内嵌初始参数有显著差异,实验室在进行产前筛查时应建立适合于本室的产前筛查指标水平。

人附睾分泌蛋白4时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的:采用时间分辨荧光免疫技术(TrFIA)建立高灵敏的人附睾分泌蛋白4(HE4)的检测方法。方法:双抗体夹心法建立HE4-TrFIA,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果:该法的检测范围为1.08pmol/L～2000pmol/L,灵敏度为1.08pmol/L,HE4的回收率95.6%,批内和批间变异系数分别3.6%～7.3%,4.6%～10.2%。与CA125交叉反应率0.01%。破坏试验表明,试剂在37℃可稳定7d。62例卵巢癌患者和60例健康人血清,用该试剂盒测得卵巢癌患者血清HE4浓度显著高于健康人(P<0.001)。该试剂盒检测结果与进口HE4 kit检测结果 r为0.951。结论:自建的HE4-TrFIA是一种敏感度高、特异性强、准确度高的适用方法,具有良好的临床应用前景。

HPV-16 E7负载的DC-CIK对宫颈癌细胞的杀伤效应研究

目的研究HPV-16 E7抗原肽负载的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞共培养Ag-DC-CIK对人宫颈癌细胞siha的杀伤效应。方法采集健康人外周血,分离提取单个核细胞(PBMC),分别诱导生成DC和CIK细胞,观察细胞形态,流式细胞仪检测DC摄取能力及其表面分子CD83、CD86和CIK细胞CD3、CD8、CD56的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白细胞介素-12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)的水平。实验分为5组:效应细胞CIK、DC-CIK、Ag^1-DC-CIK、Ag^2-DC-CIK、Ag^M-DC-CIK,分别与靶细胞siha共培养,细胞计数试剂盒(CCK8)法检测效应细胞对siha活性的影响,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测效应细胞对siha的杀伤效应。结果DC成熟后,摄取能力减弱,CD86、CD83表达上调,上清液中IL-12水平增高;与DC共培养的CIK细胞,CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+细胞比例提高,分泌IFN-γ能力增强;与CIK细胞、DC-CIK组相比,Ag^1-DC-CIK、Ag^2-DC-CIK、Ag^M-DC-CIK组均表现出对siha细胞更强的杀伤效应。结论成功构建Ag-DC-CIK共培养体系,获得两组有效的HPV-16 E7蛋白抗原肽,为治疗宫颈癌提供了新思路。

干扰ADAM17抑制人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖

目的探讨干扰去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖的影响,并对其作用机制进行初步探索。方法在HeLa细胞中转染ADAM17干扰质粒,荧光定量PCR和Western blot验证转染效率;CCK-8法检测细胞增殖,划痕实验和Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭;Western blot检测ADAM17、PCNA、EGFR、p-EGFR、ERK和p-ERK蛋白表达。结果转染后HeLa细胞中ADAM17表达被抑制(P<0.05);干扰ADAM17不影响宫颈癌细胞迁移和侵袭,但显著降低了细胞的增殖(P<0.05);增殖相关蛋白PCNA表达水平和p-EGFR、p-ERK表达水平降低(P<0.05)。结论干扰ADAM17可抑制人宫颈癌细胞系HeLa增殖,其作用机制可能与调控EGFR/ERK信号通路有关。

miR-92a靶向PTEN促进宫颈癌细胞增殖

目的探讨微小RNA-92a(miR-92a)对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响,并对其相关的分子机制进行初步探索。方法采用脂质体瞬转法向宫颈癌细胞SiHa和HeLa分别转染miR-92a inhibitor(inhibitor组)及其阴性对照(NC组),设未处理的宫颈癌细胞为空白对照组。转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞miR-92a和第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)mRNA的相对表达量,CCK-8试验和流式细胞术分别检测各组细胞活率和凋亡率,Western blotting检测细胞通路蛋白PTEN和磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)表达情况。结果与空白对照组比较,inhibitor组miR-92a相对表达量明显降低(P<0.001),PTEN mRNA相对表达量明显升高(P<0.01);与空白对照组和NC组比较,inhibitor组在各时间点细胞活率明显下降(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与空白对照组和NC组比较,inhibitor组PTEN蛋白表达增加,p-AKT蛋白表达降低。结论miR-92a通过负调控PTEN/AKT通路实现对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响。

人源ADAM17基因干扰表达载体的构建与鉴定

目的构建靶向人去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因短发夹RNA(shRNA)的表达载体,并在人胰腺癌细胞株(PANC1)中鉴定其干扰效率。方法设计并合成ADAM17基因的shRNA片段,连接到经AgeⅠ和EcoRⅠ消化过的pLKO.1-puro载体中,构建干扰表达载体pLKO.1-puro ADAM17shRNA,测序鉴定;用干扰载体pLKO.1-puro ADAM17shRNA转染PANC1细胞,荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)和Western blot法检测干扰质粒的干扰效率;CCK-8法检测其对PANC1细胞增殖的影响。结果测序结果显示,成功构建了靶向人ADAM17基因shRNA的表达载体,且该干扰载体可将PANC1细胞中ADAM17的相对表达量下调65%以上,并能显著抑制PANC1细胞增殖。结论成功构建了ADAM17基因干扰质粒。

人ADAM17启动子荧光素酶报告质粒的构建与鉴定

目的构建人去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)启动子的荧光素酶报告质粒,对不同位点进行定点突变,分析其转录活性。方法通过生物信息学分析ADAM17启动子区域的叉头转录因子M1(FoxM1)结合位点,以人胃癌细胞系MGC-803基因组为模板,PCR扩增ADAM17基因启动子-1 365^+51片段,连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中;对FoxM1结合的3个位点进行定点突变;转染至293T细胞后用双荧光素酶报告系统分析其转录活性。结果测序结果显示,ADAM17启动子荧光素酶报告基因及其突变体均构建成功;与pGL3-basic组相比,pGL3-ADAM17(-1 365^+51)组介导的荧光素酶活性明显升高(P<0.05);与对照组相比,过表达FoxM1组介导的荧光素酶活性明显升高(P<0.05),且pGL3-ADAM17(-1 365^+51)组高于突变组(P<0.05)。结论成功构建了人ADAM17启动子荧光素酶报告基因及其突变体,初步验证了ADAM17受转录因子FoxM1的转录调控。