胃癌血清肿瘤相关基因超甲基化检测及其意义

目的:探讨检测胃癌患者血清中肿瘤相关基因超甲基化的可行性及其意义。肿瘤患者的血清中游离DNA存在质或量的变化,是可能的肿瘤标志物。DNA甲基化不改变DNA序列和遗传密码,具有可逆性,被认为是基因转录调控的表观遗传机制之一。抑癌基因启动子超甲基化通常导致基因的转录失活,其功能的丧失,参与肿瘤的发生。方法:通过甲基化特异性PCR(MSP)检测52例胃癌组织和配对血清的hMLH1、E-cadherin、GSTP1、p15和p16基因的启动子超甲基化。20例健康体检者血清作为对照。结果:在胃癌组织中检测到hMLH1、E-cadherin、GSTP1、p15和p16基因的启动子超甲基化率分别为28.8%、76.9%、23.1%、59.6%和69.2%;在患者血清中检测到hMLH1、E-cadherin、GSTP1、p15和p16基因的启动子超甲基化率分别为13.5%、38.5%、15.4%、25.0%和30.8%。84.7%的患者血清可以检测到异常甲基化。所有血清中检测到异常甲基化的患者,其肿瘤组织也能检测到相应基因的异常甲基化。对照组血清未检测到任何异常甲基化。结论:MSP检测血清异常甲基化是一种具有较高灵敏度和特异性的方法,可以在大部分胃癌患者血清中同时检测到多个肿瘤相关基因的异常甲基化,可以将其作为胃癌诊断的辅助手段。

抑制性消减杂交技术分析猪链球菌2型毒力相关基因

以猪链球菌2型四川分离强毒株458#为检测子,国际参考无毒菌株1330#为驱动子,用抑制性消减杂交方法寻找其基因组水平的差异。采用3种不同的限制性内切酶分别酶切458#与1330#基因组获得3套酶切片段,经消减杂交后构建猪链球菌2型强毒株458#特异DNA的差异文库,并对差异序列进行比较分析。结果表明,试验获得了3套差异文库共计42个特异性差异片段,所有差异片段均与已发表的猪链球菌2型05ZYH33株全基因组序列高度同源。构建了具有代表性的猪链球菌2型强毒株与国际无毒参考菌株基因组差异DNA文库,差异片段通过Blast比对,部分差异片段与已知功能基因如转座子、耐药基因、I型限制酶修饰系统、表面蛋白和毒力相关蛋白等有同源性,尚有许多差异片段属于未知功能蛋白或假定蛋白,其中可能包括与猪链球菌2型毒力相关的基因,为进一步分析猪链球菌2型可能的毒力相关基因奠定了基础。

胃癌及癌旁组织多个肿瘤相关基因超甲基化

目的检测胃癌及癌旁组织肿瘤相关基因超甲基化状态,探讨多个肿瘤相关基因启动子超甲基化与胃癌发生的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应,检测23例手术切除的胃癌组织、癌旁组织和10例胃镜活检正常的胃黏膜组织的hMLH1、E-cadherin、GSTP1、p16和p15基因启动子区域的超甲基化状态。结果正常胃黏膜组织未检测到所选基因的超甲基化,22例(95.7%)胃癌组织和7例(30.4%)癌旁组织中检测到超甲基化。在17例(73.9%)胃癌组织和5例(21.7%)癌旁组织可以检测到2个以上基因的超甲基化;E-cadherin、p15和p16三个基因的甲基化率分别为78.3%、82.6%、60.8%,明显高于hMLH1和GSTP1的34.8%和17.4%。结论胃癌组织和邻近的癌旁组织中可以同时检测到多个肿瘤相关基因的甲基化,启动子区域超甲基化导致的基因功能失活可能发生在胃癌肿瘤形成的早期。

大肠杆菌毒素stx2eB-LTB-ST融合基因的构建与表达

利用PCR技术,从病原性大肠杆菌中扩增Stx2e及LT毒素B亚基的基因并扩增ST基因,用复式PCR技术获得了这三段基因的两种融合结构,一种是三段基因直接相连,另一种是在这三段基因之间加入适当的Linker序列。在这两种融合基因两端加入适当的酶切位点并分别与pMD18-T载体相连,酶切后以正确的阅读框插入pET28a载体的多克隆位点中,转入受体菌BL21(DE3)进行表达,得到两种约28 Ku的蛋白,表达的融合蛋白均以包涵体的方式存在,约占全菌蛋白表达量的30%,将包涵体初步提纯,为下游工作奠定了基础。

大肠癌肝转移患者血清中相关癌基因甲基化水平的检测

目的:探讨大肠癌肝转移患者血清相关癌基因甲基化水平的变化。方法:选择2011年9月—2013年12月因原发性大肠癌入院伴或不伴肝转移患者各32例,分别作为试验组A和试验组B。所有患者在入院之前均未进行化疗或放疗。另选择20例健康体检者作为对照组。提取研究对象血清中DNA,采用甲基化特异性PCR法检测E-cad、ID4、ESR1、APC或HACE基因甲基化异常。结果:试验组A检测出19例E-cad、ID4、ESR1、APC或HACE甲基化异常;试验组B检测出10例Ecad、ID4、ESR1、APC或HACE甲基化异常;对照组未检测出E-cad、ID4、ESR1、APC或HACE甲基化异常。3组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:血清E-cad、ID4、ESR1、APC和HACE基因甲基化状态联合检测有利于大肠癌肝转移的临床诊治。

DNA甲基化标志在胃肠肿瘤中的临床应用

DNA甲基化是高等真核生物中经常发生的现象,这种表观遗传学改变常发生在基因的启动子区域,并且不改变DNA序列和遗传密码,具有可逆性,在基因转录调控中发挥重要作用。已近知道抑癌基因和一些与正常细胞功能相关基因的转录失活与DNA甲基化有关,在胃肠肿瘤的发生,发展中起重要作用。随着对DNA甲基化的分子机制的进一步认识,以甲基化为基础的标志在临床的应用,尤其是肿瘤的防治,展现了广阔的前景。目前,这一标志及其相关技术在临床的应用涉及到诊断及治疗等方面,诸如患病风险评估、早期诊断、预后判定、复发监测、治疗反应监测和治疗计划的制定以及可作为治疗靶点等。就DNA甲基化肿瘤标志在胃肠肿瘤中的临床应用研究进展作一综述。

曝气微电解-絮凝工艺预处理嘧啶废水

采用曝气微电解-絮凝工艺预处理含嘧啶的高浓度制药废水,考察了进水pH值、HRT、曝气强度、温度、絮凝剂种类等因素对COD去除率的影响。结果表明,当废水的进水COD浓度为484 568 mg/L时,曝气微电解的最佳参数是:进水pH值为3、HRT为4.7 h、曝气强度为88.2 m3/(m2.h)、温度为30℃,此时去除率达70%以上,B/C值由原来的0.09提高到0.32左右,可生化性大大提高。

出血性大肠杆菌O157 eae-stx1/2B融合基因的构建和表达

构建表达eae和stx1/2B的融合基因,克隆eae基因的C端280个氨基酸残基(Int280)基因部分,以正确地阅读框定向插入到含有stx1/2B融合基因的质粒,构建重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的50.67%。由于该融合蛋白由eae、stx1B、stx2B等三部分抗原组成,可刺激机体产生针对紧密素和StxB的抗体,在E-HECO157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。

大肠杆菌志贺毒素stxB融合基因的构建及其高效表达

利用 PCR方法 ,从肠出血性大肠杆菌 O15 7∶ H7的基因组 DNA中 ,分别扩增出 Stx1B和 Stx2 B亚基的结构基因片段 ,然后再通过 PCR将这 2个片段连接起来 ,并定向克隆到表达质粒 p ET2 8a的 Nco 和 Eco R 位点之间 ,构建了重组表达质粒 p MB1。将重组质粒转化到宿主菌 BL2 1(DE3)中 ,对重组菌株 BL2 1(p MB1)用 IPTG进行诱导表达 ,并对最佳诱导时间进行了探索。 SDS- PAGE电泳检测结果表明 ,重组菌株表达出了 16 30 0的目的蛋白 Stx2 B- L-Stx1B;经薄层扫描分析表明 ,表达量约占菌体总蛋白的 6 8.4 % ,且目的蛋白为包涵体表达 ,表达量约占细菌沉淀的84 .6 %。研究还表明 ,未用 IPTG诱导的 BL2 1(p MB1)菌株也可有少量目的蛋白的基础表达。不同诱导时间的结果表明 ,在 3～ 7h的诱导时间内 。

猪链球菌2型新基因岛SSGI4的发现

目的通过比较猪链球菌2型强毒株与弱毒株和无毒株的基因组差异,发现新的基因岛,探讨猪链球菌的基因群水平转移及其与致病性之间的关系。方法在已知猪链球菌2型强毒株全基因组序列和对可能基因岛的分析基础上,通过DNA测序和生物信息学分析,对基因岛的结构进行分析鉴定,并预测其功能。结果发现了一个只存在于猪链球菌2型中国强毒株,而在弱毒株和无毒株中整体缺失的新基因岛,命名为SSGI4。基因岛全长11 269bp,G+C含量(36.8%)明显低于基因组总G+C含量(41.1%),基因岛两端均有10bp的正向重复序列,并且末端携带有噬菌体整合酶基因,显示很可能是通过溶原性噬菌体整合入基因组。基因岛包含11个编码基因,部分基因推测为可能的膜表面蛋白基因或氨基酸结合蛋白基因。结论新发现的基因岛SSGI4具有致病性基因岛的各项典型特征,可能与猪链球菌2型强毒株的致病性有关,具有深入研究的价值。

围手术期免疫增强型全肠外营养对胃肠恶性肿瘤患者术后免疫功能的影响

目的:评价免疫增强型全肠外营养对胃肠恶性肿瘤患者术后免疫功能、营养状况及预后的影响。方法:120例消化道恶性肿瘤手术患者随机分为A组(术前和术后应用免疫增强型全肠外营养组)、B组(术后应用免疫增强型全肠外营养组)和对照组(常规全肠外营养组)。于入院时、术后第1天和第6天时分别检测各项免疫、营养及预后指标。结果:与入院时比较,3组免疫和营养指标于术后第1天降低,术后第6天均有所恢复。术后第6天,A、B组中的淋巴细胞总数和IgA、IgM、IgG、CD3、CD4、CD4/CD8值及中性数细胞吞噬率均显著高于C组,A、B组的术后感染性并发症发生率显著低于C组,平均住院时间则显著长于C组(P<0.05),而A组和B组间各项免疫及预后指标无显著差异(P>0.05)。研究期间各组白蛋白、前白蛋白和转铁蛋白血清浓度无显著差异(P>0.05)。结论:免疫增强型全肠外营养可增强胃肠恶性肿瘤患者术后机体免疫功能并改善预后。

成人结肠冗长症的外科治疗

目的:探讨成人结肠冗长症的诊断和手术治疗效果。方法:回顾分析复旦大学附属第五人民医院2000年2月—2010年2月收治的24例成人结肠冗长症患者的临床资料。结果:24例患者中,行乙状结肠切除者14例,其中通过腹腔镜辅助乙状结肠切除者8例;横结肠切除者3例;降结肠、乙状结肠切除,将脾曲横结肠向下游离与直肠上端吻合3例;横结肠、降结肠、乙状结肠切除,再将横结肠右半拉下与直肠上端吻合者2例;全结肠切除,回肠末端与直肠上端吻合者2例。结论:根据顽固性便秘病史和X线钡剂灌肠透视或仿真肠镜检查结果可确诊成人结肠冗长症。外科手术治疗该病效果确切,有症状者应尽早手术治疗。

微电解/组合厌氧好氧/气浮过滤工艺处理糠醛废水

采用微电解/组合厌氧好氧(厌氧反应器、水解酸化、接触氧化)/气浮/过滤工艺处理糠醛废水,验收监测结果表明,COD、BOD5、NH3-N、SS的去除率分别达到99.27%、99.48%、89.22%、54.11%,出水达到《污水综合排放标准》(GB 8978—1996)的二级标准。

进展期胃癌淋巴结转移同血管内皮生长因子-C和血管内皮生长因子-D的关系

目的:探讨进展期胃癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、血管内皮生长因子-D(VEGF-D)蛋白表达与淋巴结转移之间的关系。方法:采用免疫组化法和免疫印记法检测进展期胃癌组织中VEGF-C、VEGF-D的表达,分析其与临床病理、淋巴结转移的关系。结果:胃癌组织中VEGF-C及VEGFR-D蛋白阳性表达率分别为72.1%(62/86)、60.5%(52/86),显著高于在正常胃黏膜中的表达[18.8%(6/32)和9.4%(3/32)],P<0.05;VEGF-C(90.6%)、VEGF-D(77.4%)表达量同肿瘤的分化程度和TNM分期相关(P<0.05)。进展期胃癌组织中,淋巴结转移阳性组VEGF-C(90.6%)、VEGF-D(77.4%)表达率均显著高于阴性组(42.4%和33.3%),P<0.05;结论:VEGF-C、VEGF-D与诱导进展期胃癌淋巴管生成和促进肿瘤细胞淋巴道转移有相关性。

肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌体的分离纯化

分离纯化了抑制肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7的噬菌体,并对其进行效价测定。将宿主菌EHEC O157:H7培养制成悬液后与污水样品37℃共培养16h,将培养物离心、过滤除菌后得到该菌的噬菌体原液。噬菌体原液采用双层琼脂平板法进行5次纯化,得到直径相同的噬菌斑。纯化后噬菌体的效价达到1.2×1010pfu。电镜观察表明,该噬菌体呈蝌蚪状。根据ICTV对病毒的分类标准,该噬菌体属长尾噬菌体科,为烈性噬菌体。

“三防”医学救援（分）队建设的现状与对策

军队核化生（防核与辐射、防化、防生）“三防”医学防护与救援，是和平时期保护人民群众生命财产安全、战争时期维护国家利益并赢得战争胜利的一项战略性举措。我国面临的核化生环境越来越复杂，而与核化生医学防护、救援的相关理论研究与演练实践目前仍是一个十分薄弱的环节。

跨国破产的可仲裁性问题研究

一直以来，世界各国破产法旨在对破产申请人债务清偿顺序作出规制的同时，还关乎对破产公司的消灭与社会公共利益的救济。①由此，在传统的破产法中，破产争议向来不具有可仲裁性。然而，随着国际商事仲裁的发展和跨国破产争议的频发，破产问题的可仲裁性愈发值得学界反思和探讨。当下，国际商事仲裁与跨国破产程序之间的冲突主要表现在两个方面：其一，在破产程序开始前，若所有利益相关方均同意并自愿签订了破产仲裁条款，约定将与破产财产相关的争议交付仲裁机构审理，那么此时该仲裁条款是否具有可执行性；其二，在仲裁程序进行中，若一方当事入宣告破产，那么此时仲裁程序与跨国破产程序之间的冲突该如何协调。②本文将从上述两方面着手，研究造成国际商事仲裁与跨国破产程序之间冲突的诸多因素，进而对此冲突的解决提出建议，即以美国当下的立法、司法实践为参考，在界定不同类型的跨国破产争议的同时，建立不同的解决机制。

人MC1R基因在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的表达

目的利用杆状病毒表达系统进行人恶性黑色素瘤A375细胞MC1R基因在Sf9昆虫细胞中的表达。方法以pMD18-T-MC1R为模板,利用PCR方法扩增人MC1R基因,将MC1R基因连接到pfastBac1质粒上,与穿梭载体DH10Bac转座,获得Bacmid-MC1R质粒后,通过脂质体介导,转染Sf9细胞,使其表达重组杆状病毒,经SDS-PAGE检测表达产物,放射受体分析法检测目的蛋白MC1R活性。结果Bacmid-MC1R质粒转染Sf9细胞后的SDS-PAGE图谱,在相对分子质量为35000处有一条新生蛋白带。放射受体分析结果显示表达的蛋白与标记配体特异亲和,具有生物学活性。结论MC1R基因成功在真核细胞中得到表达。

阀门系统调节降低城市供水管网的漏损量

降低供水管网的漏损量是供水行业一项非常重要的目标 ,由于供水压力直接影响着城市供水管网的漏损量 ,所以通过有效地调节阀门的大小来改变供水压力 ,降低节点超量水压 ,从而实现总体漏损量的减少。本文通过最优化的理论和方法 ,建立了城市供水管网阀门优化调度运行的数学模型 ,经过实例验证 ,该方法可以有效降低城市供水管网的漏损量。