猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究

本研究旨在为猪MⅡ期卵母细胞的玻璃化冷冻选择合适的冷冻保护剂及冷冻载体,提高猪卵母细胞冷冻后的存活力。试验分别采用以40%EG、15%EG+15%DMSO+20%FBS、15%EG+15%DMSO+20%SPS作为渗透性冷冻保护剂的冷冻液,以玻璃微细管(GMP)和冷冻帽(cryotop)作为载体对猪卵母细胞进行玻璃化冷冻。结果发现,采用含有血清蛋白替代物(serum protein substitute,SPS)的冷冻液VS3冷冻后二乙酰荧光素(FDA)染色存活率(59.40%±4.93%)显著高于VS1组(42.12%±4.08%)及VS2组(37.57%±1.21%)(P<0.05);采用VS3作为冷冻液用cryotop作为载体冷冻后FDA染色存活率(83.33%±3.33%)显著高于GMP(59.40%±4.93%)(P<0.05)。由此可见,采用SPS代替胎牛血清(FBS),用cryotop作为载体可以使猪卵母细胞冻后存活率显著提高。

曲古抑菌素A和5-氮杂-2'-脱氧胞苷对猪孤雌胚胎发育的影响

为了研究曲古抑菌素A(TSA)和5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对猪孤雌胚胎发育及胚胎质量的影响,试验采用猪卵母细胞孤雌激活的方法,孤雌激活后在胚胎培养液中分别添加不同浓度TSA和5-Aza-CdR,比较其对猪孤雌胚胎发育的影响。结果表明:40 nmol/L TSA处理24 h能显著提高孤雌胚胎的囊胚率及囊胚细胞个数(P<0.05),卵裂率无明显变化(P>0.05);30 nmol/L5-Aza-CdR处理48 h能显著提高孤雌胚胎的囊胚率(P<0.05),卵裂率与囊胚细胞个数均无明显变化(P>0.05)。说明在一定浓度条件下,TSA和5-Aza-CdR对猪孤雌胚胎发育的囊胚率有显著促进作用,5-Aza-CdR处理对卵裂率、囊胚细胞个数的影响不大,但TSA处理可以明显提高囊胚细胞个数,从而提高胚胎质量。