小农经济与现代化农业融合的反思

小农经济与现代化农业的融合,将会直接影响到新农村建设的效果。文中结合调研实践,对小农经济与现代化农业融合发展的现状予以分析,并进行了反思,希望可以为新农村建设提供借鉴。

大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库的构建

目的本研究拟构建大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库,用于传染病诊断用抗体筛选。方法选取未经免疫的5周龄白来航鸡包括普通级别和无特定病原体级别、罗曼鸡、洛岛红鸡、洛岛白鸡和贵妃鸡,每个品种各5只,共30只。从法氏囊中提取总RNA,通过反转录合成cDNA。利用聚合酶链式反应技术扩增全套编码抗体可变区的基因序列。通过重叠延伸反应,将重链可变区和轻链可变区基因连接成为单链抗体。将经过回收并酶切纯化的单链抗体克隆到噬菌体载体上,电转化大肠埃希菌TG1感受态细胞。结果成功构建库容量达1010的鸡源天然单链抗体库细胞库,噬菌体展示库滴度达1012菌落形成单位/mL以上。随机挑选165个单克隆进行菌落PCR鉴定,转化阳性插入率为96.97%(160/165);随机选取72株阳性克隆进行测序,抗体互补决定区3碱基序列及长度存在显著差异,表明构建的抗体库多样性良好。结论本研究成功构建了大容量鸡源天然单链抗体库,为后续从中筛选出具有应用价值的特异性单链抗体奠定了基础。

金黄色葡萄球菌类肠毒素W的超抗原活性位点预测与克隆表达

目的预测金黄色葡萄球菌类肠毒素W(SElW)与T细胞受体(TCR)的对接和超抗原活性位点,并对SElW进行克隆表达和纯化。方法利用AlphaFold对SElW蛋白单体进行三维结构预测,借助SAVES在线服务器使用ERRAT、拉氏图和Verify_3D等软件对蛋白模型进行评估。用ZDOCK服务器模拟SElW与TCR的对接构象,并对SElW与其他肠毒素的氨基酸序列进行比对。设计引物扩增selw基因,将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序;经限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将目的片段重组于表达质粒pET-28a(+)中,重组质粒鉴定后用IPTG诱导表达;用亲和层析法对表达于上清中的SElW蛋白进行纯化,用BCA法对蛋白进行定量。结果三维结构预测结果显示,SElW蛋白由氨基末端和羧基末端两个结构域组成,其中氨基末端结构域由3个α-螺旋和6个β-片层组成,羧基末端结构域由2个α-螺旋和7个反向平行的β-片层组成。SElW蛋白模型的整体质量因素得分为98.08,其中93.24%的氨基酸Verify_3D得分≥0.2,且无氨基酸位于不允许区。模拟对接预测选择评分最高的对接构象(评分值为1521.328)作为分析对象,采用PyMOL软件分析SElW与TCR之间形成的19个氢键。结合序列比对和既往研究结果,本研究预测发现了SElW蛋白的5个重要超抗原活性位点,分别是Y18、N19、W55、C88和C98。通过克隆表达和蛋白纯化,获得了高纯度的可溶性重组蛋白SElW。结论研究预测了SElW蛋白中5个可能的超抗原活性位点,成功构建并表达了SElW蛋白,为进一步探索SElW免疫识别机制奠定了基础。

我国食品来源金黄色葡萄球菌种群结构分析

目的了解我国食源性金黄色葡萄球菌(金葡菌)的种群结构。方法通过全基因组测序方法对2006-2020年我国16个省份收集的763株食源性金葡菌进行多位点序列分型、葡萄球菌蛋白A编码基因(spa)和葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)分型,使用BioNumerics 7.5软件创建基于ST类型的最小生成树。国外进口食品分离到的金葡菌31株被纳入基因组系统发育树的构建。结果763株金葡菌共鉴定出90个ST型和160个spa型别,其中20种为新ST型别。72个(72/90,80.0%)ST型属于22个克隆群,其中主要型别为CC7、CC1、CC5、CC398、CC188、CC59、CC6、CC88、CC15和CC25,占82.44%(629/763)。其中优势克隆群中ST型和spa型别随着时间的变化呈多态性变化。耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的阳性率为7.60%,共鉴定出7种SCCmec型别,以ST59-t437-Ⅳa(17.24%,10/58)、ST239-t030-Ⅲ(12.07%,7/58)、ST59-t437-Ⅴb(8.62%,5/58)、ST338-t437-Ⅴb(6.90%,4/58)和ST338-t441-Ⅴb(6.90%,4/58)为主。本研究分离株在系统发育树上被分为2个种群分支,命名为Clade1和Clade2,相同克隆群、ST型和spa型别的菌株呈聚集分布。Clade1全部为CC7甲氧西林敏感菌株,Clade2中包括21种克隆群和所有MRSA菌株,MRSA菌株按照SCCmec和ST型呈聚集分布。CC398、CC7、CC30、CC12和CC188中的国外分离株与我国分离株进化关系较远。结论本研究中食源性菌株主要优势克隆群型别为CC7、CC1、CC5、CC398、CC188、CC59、CC6、CC88、CC15和CC25,与既往报道的我国医院、社区感染和食物中毒的克隆群存在重叠现象,这提示食品作为病原体社区传播和食物中毒的载体,需高度关注。