牛结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的原核表达及其在牛结核病检测中的应用

采用重组PCR技术从牛结核分枝杆菌AN5基因组DNA中扩增CFP10-ESAT6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a,构建了原核表达质粒pET-CFP10/ESAT6。重组子经酶切及测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳鉴定,获得约42 ku带有6×His蛋白标签的rHIS-CFP10/ESAT6融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的40%。用HIS蛋白纯化柱纯化该蛋白,Western-blot分析显示,该融合蛋白能与抗牛结核分枝杆菌阳性血清发生特异性反应。将重组的该融合蛋白用于刺激单次皮内变态反应阳性牛全血,可以产生高水平的IFN-γ,其特异性优于结核菌素。结果表明,获得的重组融合蛋白rHIS-CFP10/ESAT6为牛结核病的诊断奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲株与NSP2变异株二重PCR诊断方法的建立及应用

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株VR2332保守序列与近年PRRSV自然变异株序列分析研究,设计合成了2对特异引物,分别扩增出225、427bp两条特异型基因片段,通过优化RT-PCR条件,建立了可同时检测PRRSV标准株和NSP2变异株的二重PCR诊断方法。应用该方法分别对广西不同地区的16份病、死猪的血液、肺等组织进行检测,结果15份PRRSV阳性,其中1份为标准株,14份为变异株。试验结果表明,PRRSV标准株与变异株二重PCR诊断方法具有高度特异性、敏感性和实用性,可用于临床诊断,为目前流行的猪高热病病原研究及广西PRRS的防制提供了一定科学依据。

猪链球菌2型多重PCR检测方法的建立及应用

设计3对引物,分别扩增链球菌属特异性gdh、猪链球菌种特异性16S rRNA和猪链球菌2型特异性cps2J等基因,目的片段大小分别为725bp、523bp和387bp。利用合成的3对引物并通过对反应条件与反应体系的优化建立了多重PCR。应用该多重PCR检测了分离到的链球菌1105株,检出猪链球菌667株,猪链球菌2型33株。研究结果表明,该方法特异性高、敏感性强,可广泛应用于猪链球菌病的快速诊断及流行病学调查。

水牛IFN-γ成熟蛋白基因的原核表达及其产物多克隆抗体的制备

将水牛γ-干扰素成熟蛋白(IFN-γ)基因亚克隆至pGEX-6P-1中,成功构建了pGEX-BoIFN-γ表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)重组菌进行IPTG诱导表达。应用SDS-PAGE方法对表达产物rGST-BoIFN-γ进行分析,用GST琼脂糖凝胶柱对可溶性蛋白进行分离纯化,并采用ELISA和Western-blot试验鉴定重组蛋白的免疫活性。将可溶性纯化蛋白作为抗原免疫小鼠,包涵体蛋白经SDS-PAGE分析后切取目的蛋白免疫小鼠以制备多克隆抗体。结果表明:重组菌经37℃0.5 mmol/L的IPTG诱导3 h,表达出43 ku的融合蛋白。目的蛋白的表达量达到菌体总蛋白量的30%,分别以可溶性和包涵体两种形式存在,而可溶性表达蛋白纯化后的纯度较高。获得的重组蛋白具有良好的免疫活性。均能从可溶性蛋白及包涵体蛋白免疫小鼠得到针对rGST-BoIFN-γ的特异性多克隆抗体。

广西水牛γ干扰素基因的克隆与序列分析

提取经刀豆素(ConA)诱导培养的水牛外周血淋巴细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增水牛IFN-γ基因,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行测序。序列分析结果表明,获得的IFN-γ基因全长为544个碱基,其开放阅读框(ORF)为501个碱基,编码166个氨基酸。与GenBank上已发表的水牛、乳牛的IFN-γ基因进行同源性比较,其核苷酸同源性均高于97%,氨基酸同源性均高于96%;与其他种类动物的IFN-γ的同源性相比,随其亲缘关系的远近有所降低。

广西猪伪狂犬病毒感染状况调查报告

为了解广西猪伪狂犬病毒的感染状况,应用PCR技术对来自广西46个种猪场的1940份公猪精液进行了猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,阳性率为0;同时对广西25个已使用猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗猪场的1455份送检血清,采用了猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行了血清学抗体监测,结果检出猪伪狂犬gE抗体阳性11份,阳性率为0.76%。结果表明,广西猪群中存在猪伪狂犬病野毒感染,但感染率较低。

鹅副粘病毒病免疫程序探讨

研究先使用商品新城疫Ⅳ系弱毒苗对ND抗体检测为阴性的实验鹅进行首免和二免,再用鹅副粘病毒油乳剂灭活苗进行加强免疫。定期抽取血清用HI试验检测抗体滴度,并抽取部分有抗体滴度的鹅进行攻毒试验。结果表明:在一免后抗体滴度没有变化,而进行二免后,抗体滴度可达到3log2～4log2,加强免疫后达到10log2左右,且能抵抗强毒的攻击。

谈《鲁滨孙漂流记》的后殖民语境

《鲁滨孙漂流记》是一部大家耳熟能详的外国小说。全书情节生动，细节逼真，描写细致，语言流畅，富于深刻的哲学和社会意义，一经出版就引起了巨大的轰动。

2016-2019年间广西部分地区犬瘟热流行病学调查及遗传演化分析

研究通过收集2016年9月至2019年9月广西部分地区917例犬瘟热(CD)阳性的病例,从地区、季节、年龄、免疫情况等方面进行了回顾性研究,结果发现:CD在广西冬季(12~2月)发病率最高,为33.48%;2到12个月龄幼犬发病率最高,为81.89%,不同年龄、性别、品种和体型的犬均可发病。采用RT-PCR方法对5份阳性样品的N和H基因进行扩增和遗传进化分析,结果发现:GXLZ20190729和GXNN20160207两株野毒株与东北株的亲缘关系密切,N基因同源性分别为98.8%、99.3%;而GXNN20170528和GXNN20160513与辽宁毒株、北京毒株和黑龙江省毒株在一个小分支,GXNN20160508与长春毒株同在另一个小分支,N基因核苷酸同源性高达98.9%~100.0%;其中GXNN20160528毒株的N基因和H基因与中国辽宁省狐狸源的毒株(LN(10)1)核苷酸同源性均高达100%,H基因氨基酸突变位点一致,并在309位增加了1个糖基化位点。研究表明,本次研究的毒株均为亚洲1型(Asia-1)的强毒谱系,不同毒株间存在遗传多样性。

毛泽东广告活动述评

毛泽东早年读书生涯和早期革命活动与广告结下了不解之缘。本文从他求学、征友、办报、招学、开店、募捐、征报这一系列事件去探求其广告活动过程 ,评价其广告得失 ,揭示了广告活动为他日后从事革命事业打下的坚实的基础。

台湾“学生学习成就评量”之国语文科评量简介

建置一完整且客观的全国性学生学习成就资料库，是刻不容缓的工作，以纵贯及横断之研究方法来了解学生的学习表现，可作为日后重大教育决策之依据。台湾学生国语文学习成就评量（TASA—LAN）编制的目的在于了解学生国语文基础能力的学习现况。以作为持续改进教学措施、调整课程结构的参考，

中学生阅读能力层级体系及评定系统

以八年级语文阅读能力的测试为依据,描述初中语文阅读能力结构的要素内容和学生阅读能力的水平特征。经过验证性因素分析,证实了阅读能力结构由认读感知、推理解释、评价鉴赏、质疑探究和拓展应用这五种能力构成,是一个二阶五因素的模型构成,其拟合度参数值符合标准,测试卷具有较好的内部一致性。学生在五个阅读能力表现中,最好的是"推理解释",其次为"认读感知",再次是"质疑探究"能力,又次是"评价鉴赏"能力,最差的是"拓展应用"能力。

浅谈广西几种人兽共患病及其流行情况

近年来,随着人与动物新发疾病的不断出现,国内外对动物疫病特别是人兽共患病的重视程度不断加强,动物疫病防控在公众卫生安全的作用越来越突出,我国“以防为主”的防控方针,是保障畜牧业健康有序发展,维护社会安全、稳定的可靠保证。据国际兽疫局(OIE)统计,75%的人类疾病感染源于动物,60%的已知人类传染病是人兽共患病,60%的人类新发疾病是来源于动物,或由野生动物直接传染给人,或由野生动物先传染给家畜再间接传染给人,给人类社会造成了巨大的影响。广西气候温暖而湿润,地处边疆近海,动物资源种类丰富,边境与越南多个省水陆相连。中越边境线全长1300公里,缺少天然屏障,大部分都是人工围墙和铁丝网隔离,无法阻隔动物间的迁徙与自然流动,加上边民频繁的交易等特点,边境动物疫病防控工作困难重重。强化养殖环节人兽共患病防控,对畜牧业发展、公共卫生安全等方面具有重要意义。虽然我区在动物疫病防控方面投入了大量人力物力,也取得了明显效果,但由于动物疫病防控的复杂性与不可控性,依然还有很多工作需要完善。本文就我区几种重要人兽共患病的流行现状、存在问题和应对措施总结如下。

浅谈广西几种人兽共患病流行形势与防控要点

随着新发传染病的不断出现,国内外对人兽共患病的重视程度不断加强,动物疫病防控在公众卫生安全的作用越来越突出,坚持“人病兽防、关口前移”的理念得到一致认可。文章分析了广西当前防控风险较大的几种主要人兽共患病的流行现状,以期为更好的、有针对性的采取防控措施提供参考。

猫杯状病毒、猫细小病毒、猫流感病毒和猫疱疹病毒多重PCR检测方法的建立和应用

为建立快速检测猫科动物重要传染病的多重PCR检测方法,根据GenBank中登录的猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)、猫流感病毒(feline influenza virus,FIV)和猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus type 1,FHV-1)的相对高保守性基因ORF2、NSP1、M和UL27,分别设计4对特异性引物。通过对反应体系的摸索及优化,建立了可同时扩增FCV(257 bp)、FPV(380 bp)、FIV(519 bp)和FHV-1(761 bp)的四重PCR反应条件及体系。结果显示:能够在同一体系中用同一反应扩增出以上4种病毒基因,其重复性及特异性均良好,敏感性可达到10 copies/μL。用该方法检测69份口鼻拭子,结果发现FCV和FPV混合感染的阳性率为10.14%,FCV和FHV-1混合感染的阳性率为1.45%,FCV、FPV和FIV混合感染的阳性率为10.14%。结果表明:研究建立的四重PCR检测方法可对常见猫科动物病毒性传染病进行快速准确的鉴别诊断,而且为早期治疗提供了有力的检测工具。

两种常规核酸提取法对非洲猪瘟qPCR检测敏感度的影响

通过对比非洲猪瘟荧光定量PCR检测中两种常用的核酸提取方式,以寻找更好的检测效果,为实际检测应用提供更有力的证据及建议。经过配置不同浓度的阳性样品,分别用核酸释放法和柱式提取法对样品进行核酸提取,用同一反应体系上机扩增,最后对实验结果进行分析。结果表明:柱式提取法的敏感性要明显高于核酸释放法,更适合当前形势下的非洲猪瘟日常筛查与自检。

一例犬车祸内伤病例的诊治

对一例犬因车祸导致的骨折并发症病例进行诊治,通过临床检查,并采用X射线、B超、犬C反应蛋白和血常规等辅助检测手段,综合诊断为由外力导致的坐骨骨折。采取保守治疗方案,维持犬生命体征,为骨折患犬诊治提供参考。

兽医实验室实验员荧光定量PCR理论与操作的调查分析及培训建议

通过在线问卷调查方式,获得包含广西壮族自治区市、县级疫控兽医系统及屠宰场、养殖场、第三方检测等实验室共172份实验员填写的样本数据。调查结果显示,广西兽医实验室实验员对荧光PCR仪的理论知识认知水平与实际操作熟练程度参差不齐。因此,为提高市、县级疫控兽医系统及屠宰场、养殖场、第三方检测等兽医实验室荧光PCR仪培训效率、提高实验室检测水平,应建立培训返岗机制、讲师培养机制、训前调研训后测评机制,鼓励基层实验员参与实验室培训工作,进一步完善兽医实验室培训制度。