利用TALEN技术制备HE4(WFDC2)敲除小鼠模型

目的利用显微注射技术和TALEN技术构建HE4(WFDC2)敲除小鼠并对其进行表型分析。方法设计Wfdc2敲除位点,构建TALEN载体,体外转录TALENs获得mRNA并通过显微注射技术注射到C57BL/6 J小鼠受精卵,对F0代小鼠进行DNA鉴定获得HE4(WFDC2)敲除小鼠,观察并统计HE4(WFDC2)敲除小鼠出生及存活情况。结果在Wfdc2第一个外显子上设计了TALEN识别剪切位点,向受精卵注射TALENs mRNA获得了24只F0代小鼠,其中1只发生移码突变,成功制备了HE4(WFDC2)敲除小鼠,并发现纯合HE4敲除小鼠出生后在短时间内致死。结论通过TALEN技术成功制备HE4(WFDC2)敲除小鼠,纯合HE4(WFDC2)敲除小鼠出生致死。

利用CRISPR-Cas9构建syncytinA条件敲除小鼠

目的构建syncytinA(合胞素A)条件敲除小鼠,为进一步研究syncytinA在胎盘形成过程中发挥的融合及非融合作用及研究子痫前期病理模型提供基础。方法在用ES细胞打靶完成syncytinA外显子上游loxp同源重组基础上,利用CRISPR-Cas9得到syncytinA-loxp小鼠。构建syncytinA-loxp转基因载体及sg RNA,通过原核显微注射方法将构建好的doner、Cas9及sg RNA一并注射到C57小鼠受精卵中,并移植入同期受孕代孕受体ICR输卵管中获得子代小鼠。用PCR方法检测子代鼠尾基因型,loxp阳性小鼠与WT交配获得syncytinA-loxp小鼠。为了检测syncytinA-loxp能否被敲除,通过与prime1cre及zp3cre交配获得syncytinA-/-,PCR及q-PCR检测syncytinA是否被敲掉。结果经PCR及q-PCR方法检测,我们成功得到syncytinA-/-胚胎。结论 syncytinA条件敲除小鼠构建成功,为更好的研究它在胎盘及子痫前期中的功能提供了基础。

Cryoleaf和Cryoloop冷冻载体冻融胚胎移植结局

目的:比较Cryoleaf和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体对冻融胚胎移植(FET)周期妊娠结局的影响。方法:采用回顾性研究方法,将本中心不同冷冻阶段(day3分裂期胚胎,day5/6囊胚期)的胚胎,根据冷冻载体不同分为Cryoleaf组和Croloop组,比较FET的妊娠结局。结果:分裂期胚胎,Cryoleaf组的胚胎存活率、着床率和临床妊娠率均低于Cryoloop组(P<0.05);囊胚期Cryoleaf组的胚胎着床率低于Cryoloop组(P<0.05),胚胎存活率和临床妊娠率与Cryoloop组比较无差异(P>0.05)。结论:FET周期中,采用cryoloop作为冷冻载体较Cryoleaf能获得更好的妊娠结局。

卵子激活剂对无精子症患者冻融睾丸精子ICSI后妊娠结局的影响

目的研究卵子激活剂CultActive在临床中能否提高无精子症患者冻融睾丸精子行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)后的妊娠结局。方法选择2015年1月~2019年12月我院收治的188例行冻融睾丸精子ICSI助孕治疗的无精子症患者作为研究对象,按照患者ICSI后是否进行应用卵子激活剂CultActive随机分为冻融睾丸精子组(n=107)和卵子激活组(n=81),对照组为新鲜睾丸精子组(n=129),分别比较了三组患者在年龄、不孕年限、促性腺激素用量、促性腺激素使用天数等临床资料的差异以及获卵数、受精率、2PN率、分裂率、优胚率、可利用胚胎率、临床妊娠率等胚胎发育情况的差异。结果三组患者在年龄、不孕年限、促性腺激素用量、促性腺激素使用天数、获卵数上均无统计学差异(P>0.05)。B组在2PN率、优胚率、可利用胚胎率上均高于A、C组,但无统计学差异(P>0.05)。三组患者在分裂率上也无统计学差异(P>0.05)。B组在受精率上明显高于C组(P<0.05),且显著高于A组(p<0.01)。B组在临床妊娠率上显著高于A、C组(p<0.01)。结论卵子激活剂CultActive可以提高冻融睾丸精子ICSI效率,值得在临床中推广。

卵母细胞的脱颗粒时间对短时受精后胚胎质量和妊娠结局的影响

目的探讨运用短时受精进行体外受精In vitro fertilization(IVF)时,去除卵子周围颗粒细胞的不同时间对短时受精后胚胎发育质量和妊娠结局影响。方法选择行IVF助孕的原发和继发不孕,且本周期移植的患者323例,按照卵母细胞不同的脱颗粒时间分为A组103例和B组220例。A组移植短时受精后3h去除颗粒细胞发育的胚胎;B组移植短时受精后20h后去除颗粒细胞发育的胚胎,比较两组胚胎的临床指标和发育参数。结果在年龄、不孕年限、原发/继发、Gonadotropin(Gn)用量、Gn使用天数、移植日的内膜厚度等临床资料及卵母细胞数、meiosis II(MII)卵数、2PN卵数、3 PN卵数、1-pronuclei(1 PN)卵数、2-pronuclei(2PN)分裂数、优质胚胎数、移植胚胎数、种植率等胚胎发育参数方面两组间没有显著性差异(P>0.05);但在3-pronuclei(3PN)卵数上两组间差异极显著(P<0.01),在种植率和临床妊娠率上两组间差异显著(P<0.05)。结论短时受精过程中,在确保患者正常受精的情况下,将剩余的卵母细胞保留颗粒细胞可以改善妊娠结局。