干扰素诱导蛋白p204对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的:研究干扰素诱导蛋白p204对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响并探讨其可能的机制。方法:应用干扰素α(IFN-α)和p204基因(Ifi204)的小干扰RNA(siRNA)瞬时干预体外培养的VSMCs,用MTT法测定细胞活力反映细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,用实时qRT-PCR法和Western blotting分别检测mRNA和蛋白表达。结果:IFN-α可诱导大鼠VSMCs p204 mRNA和蛋白表达上调,抑制VSMCs细胞活力和细胞周期G1/S转换,伴Ras蛋白表达减少,Raf和ERK磷酸化水平下降。转染Ifi204 siRNA可抑制p204表达,提高VSMCs细胞活力和促进细胞周期G1/S转换,伴Ras蛋白表达增多,Raf和ERK磷酸化水平升高。结论:p204表达可抑制鼠VSMCs的增殖,该效应可能与p204抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的激活有关。

RAS信号途径参与干扰素-α抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的探讨RAS信号途径在干扰素-α(IFN-α)抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用。方法应用转染IFI204 siRNA和/或IFN-α瞬时干预体外培养的大鼠VSMCs,以非特异性siRNA转染组为对照组,用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR法和Western blot分别检测P204 mRNA、P204和Ras蛋白的表达及RAF与ERK的磷酸化水平。结果与对照组比较,IFN-α组P204 mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),细胞活力和细胞周期G1/S转换下调(P<0.01),伴RAS蛋白表达减少(P<0.01),RAF及ERK磷酸化水平下降(P<0.01);转染IFI204 siRNA后再加IFN-α干预,P204 mRNA及蛋白表达下调(P<0.01),而G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.01),且RAS蛋白表达和RAF及ERK磷酸化水平亦下调(P<0.01)。结论 RAS信号途径参与IFN-α抑制大鼠VSMCs增殖。

干扰素诱导蛋白p204表达变化对大鼠血管平滑肌细胞增殖及p21表达的影响

目的:观察干扰素诱导蛋白p204对鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及p21表达的影响,探讨p204在VSMCs增殖调控中的作用及可能机制。方法:应用干扰素α(IFN-α)处理和p204基因(Ifi204)的小干扰RNA(siRNA)瞬时干预体外培养的VSMCs,用MTT法测定细胞活力反映细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,用半定量RT-PCR法和Western blotting分别检测p204和p21的mRNA和蛋白表达。结果:IFN-α可诱导鼠VSMCsp204 mRNA和蛋白表达上调,降低VSMCs细胞活力和细胞周期G1/S转换,伴p21 mRNA和蛋白表达上调。转染Ifi204 siRNA可抑制p204和p21表达,提高VSMCs细胞活力和促进细胞周期G1/S转换。结论:p204表达可抑制鼠VSMCs的增殖,该效应可能与激活p21表达有关。

干扰素α通过P204和P21诱导大鼠原代血管平滑肌细胞凋亡

目的探讨干扰素-α(IFN-α)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法应用转染IFI204 siRNA和/或IFN-α瞬时干预体外培养的大鼠VSMCs,以非特异性siRNA转染组为对照组,RT-PCR法检测P204及P21mRNA表达,Western blot检测P204及P21蛋白表达,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡。结果与对照组比较,IFN-α组P204 mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),细胞凋亡增多(P<0.01),伴P21 mRNA和蛋白表达增多(P<0.01);IFI204 siRNA转染组P204 mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),细胞凋亡减少(P<0.01),P21mRNA和蛋白表达减少(P<0.01);转染IFI204 siRNA后再加IFN-α干预,P204 mRNA及蛋白表达下调(P<0.01),但P21mRNA及蛋白表达增多(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01)。结论 P204及P21参与IFN-α诱导大鼠VSMCs凋亡过程的调控。

症状不典型的冠状动脉药物支架内急性血栓形成2例

经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention,PCI）是恢复冠状动脉前向血流的有效手段。药物洗脱支架（drug eluting stent,DES）可显著降低支架内再狭窄的发生率,但其支架内血栓（intra stent thrombosis,IST）形成的发生率（特别是晚期IST）较金属裸支架高。接受标准剂量氯吡格雷及低剂量阿司匹林双联抗血小板治疗的急性冠状动脉综合征患者，植入DES后IST总发生率为1．3%。尽管急性IST发生率相对较低，但病死率高，故应加强对IST的判别和治疗。本文报告2例PCI后缺血性胸痛症状不典型的患者。

干扰素α通过IFI16和P21影响人血管内皮细胞凋亡

目的观察干扰素α(IFN-α)对人血管内皮细胞(VECs)凋亡的影响并了解其部分机制。方法应用IFN-α和转染IFN诱导蛋白16基因(IFI16)的siRNA瞬时干预体外培养的VECs,以转染非特异性siRNA设为对照组,RT-PCR法检测IFI16及P21mRNA表达,Western blot检测IFI16及P21蛋白表达,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡情况。结果与对照组比较,IFN-α组IFI16mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),细胞凋亡增多(P<0.05),伴P21mRNA和蛋白表达增多(P<0.05);IFN-α干预后再转染IFI16siRNA,IFI16mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),细胞凋亡减少(P<0.05),P21mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。结论 IFI16及P21参与IFN-α诱导VECs凋亡过程的调控。

干扰素-α抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）过度增殖是血管成形术后再狭窄、动脉粥样硬化及高血压等血管增殖性疾病的共同病理基础,有效抑制VSMCs增殖对上述疾病的防治具有重要的临床意义.干扰素（Interferon,IFN）具有抗病毒、免疫调节及抑制肿瘤细胞增长等作用,但其对VSMCs增殖的影响及其机制尚未完全明确.本研究探讨IFN-α对大鼠VSMCs增殖的影响及其部分机制,为其临床应用提供理论依据.

干扰素诱导蛋白204抑制大鼠血管外膜成纤维细胞增殖

目的:探讨干扰素诱导蛋白204(p204)对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAFs)增殖的影响及可能机制。方法:将大鼠VAFs分为空白对照组(N组)、非特异性小干扰RNA(siRNA)转染组(control组)、IFN-α干预组(IFN-α组)及Ifi204 siRNA转染组(Ifi204 siRNA组),给予相应处理;应用Real Time qRT-PCR法检测p204mRNA表达,MTT比色法测定细胞活力,流式细胞仪分析细胞周期,Western blot检测p204、Ras蛋白表达及Raf与Erk磷酸化水平。结果:与N组比较,IFN-α组p204 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),细胞活力下降,细胞周期G_1/S转换下调(P<0.05),伴Ras蛋白表达减少,Raf及Erk磷酸化水平下降(P<0.05);Ifi204 siRNA组p204 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05),细胞活力增高,G_0/G_1期细胞减少,S期细胞增多(P<0.05),Ras蛋白表达增多,Raf及Erk磷酸化水平升高(P<0.05);而control组上述指标与N组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:p204表达可抑制大鼠VAFs增殖,Ras信号通路可能参与p204对VAFs增殖的调控。

干扰素α通过P204和RAS信号途径诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的观察干扰素-α(IFN-α)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响,并探讨其部分机制。方法将VSMCs分为A、B、C 3组,A组转染非特异性siRNA,B组予IFN-α干预后转染非特异性siRNA,C组予IFN-α干预后转染IFN诱导蛋白204基因(IFI204)siRNA,均培养至48 h收集细胞。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IFN诱导蛋白204(P204)mRNA表达,Western blot检测P204、RAS蛋白表达及RAF/ERK磷酸化变化,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡。结果与A组比较,B组P204 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),细胞凋亡增多(P<0.05),伴RAS蛋白表达减少(P<0.05),RAF/ERK磷酸化水平下降(P<0.05);C组P204 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05),细胞凋亡减少(P<0.05),RAS蛋白表达增多和RAF/ERK磷酸化水平上调(P<0.05)。结论 P204及RAS信号途径参与IFN-α诱导大鼠VSMCs凋亡过程的调控。

IFNα通过p204抑制大鼠主动脉外膜成纤维细胞增殖

目的研究干扰素诱导蛋白p204在大鼠主动脉血管外膜成纤维细胞(VAF)的基础表达,α干扰素(IFNα)对VAF细胞增殖及p204表达的影响。方法用免疫组织化学及免疫细胞化学观察p204蛋白的表达及分布;用West-ern blot及RT-PCR检测p204蛋白及Ifi204 mRNA表达;用MTT法检测VAF细胞增殖。结果 p204在大鼠主动脉血管外膜染色阳性,p204在鼠VAF细胞同时表达于胞质及胞核,以胞核表达更明显。应用1×106IU/L的IFNα刺激VAF细胞6 h以上即可诱导Ifi204 mRNA大量表达,IFNα作用24 h以上时p204蛋白大量表达。IFNα呈浓度依赖性抑制VAF细胞增殖,A value值由对照组的0.727±0.090逐渐降至4×106IU/L IFNα时的0.652±0.066及8×106IU/L IFNα时的0.587±0.043,伴随着p204表达相应增加(P<0.05)。结论 p204在大鼠主动脉VAF存在基础表达,其在VAF上表达并不局限于胞核,易被IFNα诱导其mRNA及蛋白表达上调;IFNα抑制VAF细胞增殖的作用可能部分与其诱导p204表达有关。

干扰素诱导蛋白16对人脑血管外膜成纤维细胞增殖与迁移的影响及其机制

目的:研究干扰素诱导蛋白16(IFI16)对人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)增殖与迁移的影响及其可能机制。方法:在HBVAFs中转染针对IFI16基因的小分子干扰RNA(siRNA)48 h后,用2×106U/L干扰素-α(IFN-α)处理转染IFI16 siRNA细胞24 h。流式细胞术测定细胞周期,细胞划线法与Transwell法测定细胞迁移能力。应用real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别测定细胞中IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:转染IFI16 siRNA后,HBVAFs中IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表达水平下调,增加了细胞G1/S期转换。IFN-α可诱导HBVAFs中IFI16、p53及p21mRNA和蛋白表达水平上调,同时抑制细胞G1/S期转换与细胞迁移,但在转染了IFI16 siRNA的HBVAFs中IFN-α的上述作用受到抑制。结论:IFI16表达可以抑制HBVAFs增殖和迁移,其机制可能与激活p53和p21的表达有关。

不同剂量阿托伐他汀钙对急性冠脉综合征患者炎症及血脂水平的影响

目的比较不同剂量阿托伐他汀钙对急性冠脉综合征(ACS)患者的血脂及高敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响。方法将200例住院ACS患者随机分为A组(100例):每晚口服阿托伐他汀钙20mg,B组(100例):每晚口服阿托伐他汀钙40mg。比较服药前及服药后第4周、8周两组患者血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC))、hs-CRP水平及药物不良反应发生率。结果治疗4周后,两组患者血清TC、LDL-C及hs-CRP水平较治疗前均明显下降(均P<0.05),TG组间比较尚无显著差异,LDL-C及hs-CRP组间比较有差异。治疗8周后B组患者血清TC、LDL-C和hs-CRP的降低显著大于A组[(3.53±0.45)vs(4.07±0.54);(1.86±0.44)vs(2.25±0.45);(7.13±5.21)vs(12.48±5.72),均P<0.05)]。HDL-C两组均明显升高(均P<0.05),而B组升高显著大于A组[(1.65±0.45)vs(1.48±0.47),P<0.05)]。两组药物不良反应发生率无显著差异(P>0.05)。结论40mg较20mg阿托伐他汀钙,能进一步降低血清TC、LDL-C及hs-CRP水平,斑块稳定性可能更强,而安全性相当。

IFN-α通过IFI16抑制人脑血管外膜成纤维细胞增殖并促进细胞凋亡

目的:探讨干扰素-α(IFN-α)是否通过诱导干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达抑制人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)增殖与促进细胞凋亡。方法:应用转染针对IFI16基因的小干扰RNA(siRNA)和/或IFN-α瞬时干预体外培养的HBVAFs。通过蛋白免疫印迹(Western blot)法和Real-time PCR法测定细胞中IFI16、P53、P21蛋白和mRNA表达水平的变化。用MTT法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞周期及凋亡。结果:与未干预组比较,IFN-α(2 000~5 000 kU/L)干预HBVAFs后,IFI16蛋白表达水平明显上调,但不同浓度IFN-α组之间无统计学差异。使用2 000 kU/L IFN-α可诱导HBVAFs中P53及P21蛋白和mRNA表达水平上调,同时抑制细胞增殖与促进细胞凋亡。但在转染了IFI16 siRNA的HBVAFs中IFN-α的上述作用受到了抑制。结论:IFN-α抑制HBVAFs增殖与促进其凋亡的作用可能部分与其诱导IFI16表达有关。

干扰素诱导蛋白p204过表达抑制大鼠主动脉血管外膜成纤维细胞凋亡、增殖与迁移

目的:观察干扰素诱导蛋白p204过表达对大鼠主动脉血管外膜成纤维细胞(VAFs)凋亡、增殖与迁移的影响。方法:分别应用携带p204基因(Ifi204)的慢病毒颗粒(Ifi204-Lv组)、空载慢病毒颗粒(Con-Lv组)感染VAFs,未经处理的VAFs作为阴性对照组。用噻唑蓝(MTT)比包法检测VAFs增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(realtime q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)分别检测p204、抑癌因子p53及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21WAF(p21)的mRNA和蛋白表达。结果:Ifi204-Lv组与Con-Lv组、阴性对照组相比较,细胞增殖降低[(吸光度值),48 h:0.53±0.05 vs 0.66±0.03、0.63±0.06;72 h.0.89±0.06 vs 1.02±0.06、1.01±0.07]及迁移距离缩短[(像素),61.00±1.83 vs 74.50±6.25、75.50±7.85]、数量降低(61.75±10.69 vs 155.25±10.21、153.75±9.40),差异均有统计学意义(P均<0.05),但组问比较细胞凋亡率差异无统计学意义。与Con-Lv组、阴性对照组相比,Ifi204-Lv组的p204(3.45±0.15 vs 2.09±0.10、2.06±0.09)、p53(3.41±0.09 vs2.06±0.07、2.10±0.06)及p21(3.0l±0.08 vs2.05±0.06、2.11±0.08)的mRNA和蛋白表达均上调,差异均有统计学葸义(P均<0.05)。结论:p204过表达可抑制大鼠VAFs增殖与迁移,其机制可能部分与激活p53及p21表达有关。

干扰素诱导蛋白p204在大鼠血管壁成分细胞的表达

目的研究干扰素诱导蛋白p204在鼠血管壁各成分细胞的基础表达及干扰素诱导性。方法通过免疫组织化学染色及Western blot观察p204蛋白在成年昆明小鼠及Wistar大鼠或SD大鼠血管壁的表达;免疫细胞化学法及Western blot观察p204在培养的SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)和血管外膜成纤维细胞(VAF)的表达及分布;逆转录-聚合酶链反应观察干扰素诱导VSMC上p204 mRNA(Ifi204)表达特点。结果免疫组织化学染色表明p204抗原在成年昆明小鼠心内小静脉及小动脉血管壁内皮细胞、内膜、中膜及外膜的细胞胞浆中呈阳性反应,p204在成年Wistar大鼠主动脉内皮、VSMC及外膜均染色阳性,弹性纤维膜未着色。Western blot表明p204在SD大鼠主动脉有基础表达,其在VAF的基础表达量明显高于VSMC,免疫细胞化学法表明p204在鼠主动脉VSMC细胞同时表达于细胞质及细胞核。应用干扰素α1.0×106IU/L刺激VSMC细胞8 h即诱导Ifi204大量表达,干扰素α作用24 h时表达更强烈。结论 p204在小鼠及大鼠血管壁全层和培养的VSMC及VAF均存在基础表达,p204在VSMC上表达并不局限于细胞核,且易被干扰素α诱导其mRNA表达上调。p204在鼠血管壁细胞存在表达提示其在血管生理及血管增殖性疾病的发生发展中可能有着潜在的重要作用。

抑制干扰素诱导蛋白p204表达促进大鼠血管外膜成纤维细胞生长与迁移

目的观察干扰素诱导蛋白p204表达抑制后对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)凋亡、增殖与迁移的影响及其部分机制。方法应用Ifi204小干扰RNA(si RNA)转染VAF使Ifi204基因沉默(Ifi204-si RNA组),以非特异性si RNA转染作为其转染阴性对照组(Con-si RNA组)和未经处理的VAF作为未干预阴性对照组(Neg组)。用MTT法检测VAF细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,应用实时荧光q RT-PCR和Western blot分别检测p204、p53及p21的m RNA和蛋白表达。结果与Con-si RNA组和(或)Neg组相比,Ifi204-si RNA组的p204、p53及p21的m RNA和蛋白表达减少(P<0.05),细胞凋亡率下降(P<0.05),细胞增殖及迁移速度提高(P<0.05)。结论抑制p204表达可减少大鼠VAF细胞凋亡,促进其增殖与迁移,其机制可能部分与抑制p53及p21表达有关。

Ifi204基因表达对大鼠血管外膜成纤维细胞凋亡和迁移的影响

目的探讨ifi204基因过表达与沉默对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)凋亡和迁移的影响。方法原代培养大鼠VAF,利用携带ifi204基因的慢病毒颗粒或空载体慢病毒颗粒感染VAF,分别作为实验组(ifi204 lv组)和阴性对照组(blank lv组)。用ifi204基因小干扰RNA瞬时干预VAF使其沉默(ifi204 siRNA组)、空白小干扰RNA作为阴性对照组(control siRNA组),未经处理的VAF作为空白对照组(negative组)。流式细胞仪检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,用real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果与blank lv组、control siRNA组、ifi204 siRNA组和negative组相比,ifi204 lv组的P204、P53 mRNA和蛋白表达及细胞凋亡率明显上调(P<0.05),细胞迁移速度降低(P<0.05)。转染ifi204 siRNA可抑制P204、P53的mRNA和蛋白表达(P<0.05),提高细胞活力,抑制细胞凋亡(P<0.05),加快细胞迁移速度(P<0.05)。结论 ifi204基因表达对大鼠VAF细胞凋亡和迁移的影响可能与激活P53表达有关。

干扰素-α对人血管成纤维细胞迁移的影响

目的探讨干扰素-α（IFN-α）对人脑血管外膜成纤维细胞（VAFs）迁移的影响及机制。方法培养人脑VAFs，用终浓度为2000kU／L的IFN-α刺激24h（TFN-α组），用细胞划线法与Tanswell法检测细胞迁移能力变化，用Real—timePCR法和蛋白免疫印迹（Westernblotting）法分别检测细胞中干扰素诱导蛋白16在mRNA和蛋白表达水平的变化。以空白组为对照。结果与空白组比较，IFN-α组VAFs的干扰素诱导蛋白16的mRNA和蛋白表达水平上调，细胞迁移受限。结论IFN-α可抑制VAFs迁移，该效应可能与促进干扰素诱导蛋白16表达有关。

IFI16 siRNA对干扰素α诱导的人脑血管外膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨干扰素诱导蛋白16(IFI16)siRNA对干扰素α(IFN-α)诱导的人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAF)增殖与凋亡的影响。方法在HBVAF中转染IFI16 siRNA 48 h后,用2×106U/L IFN-α处理转染IFI16siRNA的细胞24 h,流式细胞术测定细胞周期及凋亡,real-time PCR和Western blot测定细胞中IFI16 mRNA和蛋白表达水平。结果转染IFI16 siRNA后,HBVAF中IFI16 mRNA和蛋白表达水平下调,同时抑制细胞G/S期转换。IFN-α诱导HBVAF中IFI16 mRNA和蛋白表达上调,抑制细胞G/S期转换,促进细胞凋亡。但在转染IFI16 siRNA的HBVAF中IFN-α的上述作用受到了抑制。结论 IFN-α抑制HBVAF增殖,促进其凋亡可能与促进IFI16表达有关。

二甲双胍通过lncRNA-MALAT1对人血管平滑肌细胞活力、迁移及凋亡的影响

目的:探讨二甲双胍通过长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(lncRNA-MALAT1)对人血管平滑肌细胞(VSMC)活力、迁移及凋亡的影响。方法:RT-qPCR检测38例无冠心病的对照人群与35例冠心病患者血液中lncRNA-MALAT1的表达。用二甲双胍给药后检测lncRNA-MALAT1的表达;用二甲双胍给药或MALAT1小干扰RNA(si-MALAT1)转染VSMC后,用CCK-8法检测细胞活力,细胞划痕法测定细胞迁移情况,流式细胞术检测细胞凋亡水平, RT-qPCR检测lncRNA-MALAT1表达及抑癌因子p53 mRNA表达水平, Western blot检测p53蛋白表达水平。结果:与对照人群相比,冠心病患者血液中lncRNA-MALAT1表达显著升高(P<0.05)。二甲双胍给药后,lncRNA-MALAT1表达呈时间依赖性降低;与阴性对照组比较,二甲双胍给药组VSMC活力和迁移能力均显著下降,而凋亡率显著升高,p53 mRNA及蛋白表达水平亦显著升高(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组VSMC活力和迁移能力下降(P<0.05),凋亡率升高不显著,p53 mRNA水平及蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:二甲双胍可能通过lncRNA-MALAT1抑制VSMC的活力和迁移能力,促进细胞凋亡,其机制可能部分与激活p53表达有关。