弓形虫表面抗原SAG2基因片段的克隆与原核表达

目的 扩增弓形虫主要表面抗原 (SAG2 )编码基因片段并进行重组表达。方法 设计合成 1对引物 ,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列 ,以低熔点琼脂糖回收纯化 ,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后 ,再插入表达载体 pGEX - 4T - 2 ,经PCR和双酶切筛选 ,测序验证后 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并用SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 从弓形虫核酸提取物中扩增出约 477bp的SAG2基因 ,构建成功了重组质粒 pGEX - 4T - 2 -SAG2 ;SAG2基因在大肠杆菌中得到高效表达。SDS -PAGE电泳 pGEX - 4T - 2 -SAG2的融合蛋白条带的分子量约为 42kD ,Westen -blot显示融合蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论 GST融合表达载体的构建和SAG2基因片段成功表达 ,为进一步为SAG2重组疫苗及重组诊断抗原的研制奠定了基础。

弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体构建及在Vero细胞中的表达

目的 构建弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体 ,并在Vero细胞中表达。 方法 设计 1对引物 ,从弓形虫RH株速殖子基因组DNA中扩增SAG2全长编码基因 ,构建 pVAX1 SAG2真核表达重组质粒。以限制性内切酶KpnⅠ和EcoRⅠ进行双酶切、PCR鉴定 ,纯化后进行测序鉴定。脂质体介导法瞬时转染Vero细胞 ,同时以 pVAX1为对照 ,48h后收集细胞 ,Western blot鉴定。 结果 从弓形虫RH株DNA中扩增出了 5 77bp的SAG2基因 ,构建了真核表达载体 pVAX1 SAG2 ,在质脂体介导下转染Vero细胞 ,质粒DNA成功的转染到细胞中。通过Westen blot分析 ,细胞裂解液样品有 1条可被弓形虫免疫血清所识别的约 17ku大小的条带 ,与预计大小一致。 结论 真核表达载体pVAX1 SAG2在Vero细胞中有一定表达 ,且有一定的活性。

高师学生口语交际能力的现状调查与分析

今天,人们越来越认识到:口语交际水平的高低,已成为一个人生活及事业优劣成败的关键因素。现代社会是个知识经济的社会,更加注重全面发展的高素质人才的培养,而良好的口语交际能力则是全面发展的人才应具备的素质之一。通过问卷调查、访谈、交谈等途径,对高师学生口语交际能力的现状进行调查和分析,冀以提升高师学生的口语交际水平。

一堂语文公开课的课堂无效教学行为观察

采用课堂观察这一研究方法,通过对一节语文公开课进行课堂观察,对课堂教学中教师的无效教学行为进行了梳理,并作出相关分析,指出教师的无效教学行为是导致课堂教学效果低下或无效的直接原因。

语文教学中的“空白”艺术

从理论和实践(操作)层面探讨"空白"艺术问题,追述"空白"这一古老的美学概念的审美特性。中国古代的"空白"是一个模糊而无限的概念,文论家认为"空白"的审美效应是由"道"的性质决定的;从操作层面看,"空白"是一切艺术的表现手法,语文教学既是一门科学,又是一门艺术,把它嫁接到语文教学中,阐述"空白"在语文教材(文学文本)和语文课堂教学中具有重要的审美和实践意义。

师范院校学生模拟教学中的问题分析

加强实践训练与实践学习,是我国高等教育人才培养方式创新的根本要求。师范院校学生的模拟教学是培养大学生的创新精神和实践能力的教学实践活动。经观察分析,学生模拟教学中存在的问题主要有:教育教学观念落后,教学中几乎没有彰显新课程理念,课堂教学缺乏创新;课堂教学的有效性较差;学生缺乏登台锻炼的实践,心理素质不佳;教学基本功有待夯实。

陶渊明审美境界的成因探析

审美境界一般是指在生活中和艺术中出现的审美的境界。东晋著名诗人陶渊明辞官归隐后将其人生和艺术的境界提升到审美的境界——"平淡",这种平淡的审美境界主要由其"自然"的哲学观、注重实践的生活方式和将日常生活审美化而达到诗意地栖居三方面的因素形成的。

普通话水平测试中“说话”测试的理论意义及现状分析

普通话水平测试中“说话”测试的理论意义在于,语言学、思维科学、信息学、心理学是“说话”的理论依托.“说话”测试的特点是主观性与客观性的统一.通过对普通话水平测试中应试人(学生)和测试员(教师)的实际状况进行分析,探讨目前“说话”测试的现状.

弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答

目的 构建弓形虫主要速殖子表面抗原 2 (SAG2 )编码基因真核表达质粒pVAX1-SAG2 ,并接种小鼠 ,分析其所诱导的免疫应答。方法 以限制性内切酶EcoRⅠ与KpnⅠ双酶切从重组质粒 pGEM/SAG2中获得SAG2目的基因片段 ,约5 92个bp ,将其插入真核表达载体 pVAX1多克隆位点 ,构建重组质粒 pVAX1-SAG2 ,并转化大肠杆菌JM 10 9,阳性克隆以双酶切与PCR法鉴定。大量提取纯化重组质粒 pVAX1-SAG2 ,5 0 μg肌肉注射小鼠左后腿内侧肌肉 ,3周后加强免疫一次 ;RT-PCR检测SAG2在小鼠肌肉中的转录表达 ,流式细胞仪测定T细胞亚群 ,以速殖子虫体抗原作ELISA测定小鼠血清IgG抗体。结果 真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2双酶切鉴定及PCR扩增结果与预期结果相符合。RT -PCR从注射部位肌肉组织总RNA中扩增出SAG2目的基因条带 ;重组质粒 pVAX1-SAG2免疫组CD+ 4 细胞数为 32 .35± 5 .38,显著高于空质粒pVAX1及生理盐水 (NS)二对照组 (P <0 .0 1) ,后二者CD+ 4 细胞数分别为 19.6 5± 4 .2 1与 17.84± 1.5 9;免疫组CD+ 8细胞数为 18.6 7± 2 .37,但与空质粒及NS对照组相比 ,差别不显著 (P >0 .0 5 )。ELISA测定结果显示 pVAX1/SAG2免疫组小鼠血清中出现抗弓形虫特异性IgG抗体。结论 构建成功SAG2真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2 。

日本血吸虫Calpain的DNA疫苗诱导小鼠免疫保护性研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株Calpain的DNA疫苗对Balb/c小鼠的免疫保护性作用。方法 大量制备pVAC质粒DNA和pVAC -CalpainDNA疫苗 ,Balb/c小鼠 5 0只 ,随机均分为对照组和实验组 ,对照组每只小鼠的股四头肌注射接种 10 μgpVAC质粒DNA ,实验组以同样方式注射 10 μgpVAC -CalpainDNA疫苗 ,第 3周加强免疫一次。第 4周每只小鼠经腹部皮肤感染 ( 2 5± 1)条尾蚴 ,感染 6周后剖杀 ,从门静脉灌流收集计成虫数、碎脾计T淋巴细胞总数、从各鼠肝脏的同一部位切下小块肝组织 ,置 5 %KOH溶液消化后 ,计算每克肝组织虫卵数 ,比较减虫率、减雌率和减卵率。于免疫前、第一次免疫后 2周和感染后 2周分别从尾静脉采血 ,用ELISA测定抗体水平。结果 与对照组相比 ,实验组获得 36.84%的减虫率、36.36%的减雌率和 43.31%的减卵率 ,感染后实验组小鼠IgG抗体水平升高幅度大于对照组 ,对照组T淋巴细胞数显著多于实验组。结论 CalpainDNA疫苗可诱导小鼠产生较好的免疫保护作用 。

新课改下教师教育观念转变的障碍因素分析——对中英甘肃“普九”项目教师培训的反思

在新课程实施的过程中,教师面对21世纪教育发展的要求,为了下一代的全面发展,为了给社会培养合乎当今时代要求的新型人才,必须从自身出发,转变原有的教育教学观念。

弓形虫SAG1基因的表达及其诱导的细胞免疫应答

目的分析弓形虫SAG1基因真核表达质粒的体外表达及其诱导小鼠的细胞免疫应答。方法重组表达质粒pVAX1-SAG1瞬时转染vero细胞,Westernblot法检测在细胞中的表达。将重组真核表达质粒pVAX1-SAG1及空质粒pVAX1于0、4周分别经肌注免疫BALB/c小鼠;第8周杀鼠,取脾,分离淋巴细胞,分别经ConA和抗原刺激,用MTT法测定免疫鼠脾脏T淋巴细胞转化率;使用直接免疫荧光法,用流式细胞仪对CD4+、CD8+T细胞亚群进行测定;两组小鼠经弓形虫速殖子攻击感染,计算存活期。结果Westernblot法分析转染细胞,发现存在弓形虫感染血清识别的26000u的特异带,与理论值相符;抗原刺激小鼠脾T淋巴细胞发生增殖反应,免疫组与空质粒对照组间差异有显著性(P<0.05),但ConA刺激小鼠后,两组间差异无显著性(P>0.05);T细胞亚群CD4+、CD8+动态分析,CD4+、CD8+T细胞数量均升高,免疫组与空质粒对照组差异均有显著性(P1<0.05,P2<0.05)。弓形虫攻击感染,免疫组鼠的平均存活时间较空质粒对照组延长。结论真核表达质粒pVAX1-SAG1在vero细胞中获得表达,且能诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答。

深圳地区人群苯丙酮尿症患者基因分析

目的 探讨深圳地区苯丙酮尿症 (PKU)患者血苯丙氨酸羟化酶 (phenylalaninehydroxylase ,PAH)基因单核苷酸多态性位点。方法 设计 7对引物 ,应用多聚酶链反应 -单链构像多态 (PCR -SSCP)银染技术和DNA序列分析了 3个PKU家族共 13个成员的PAH基因。结果 PCR -SSCP分析发现 ,其中 2个家族的子女及其父母有电泳条带异常 ,测序结果示两多态性位点均在内含子 10上。结论

中国企业对外直接投资的区位选择

世界经济发展格局中存在着区位条件的差异。在对外直接投资过程中 ,正确的区位选择 ,对企业获取生产要素 ,从而获取最佳投资收益至关重要。本文从理论和实践两方面 ,对影响中国企业对外直接投资区位选择的决定因素进行了分析 ,并对 2

日本血吸虫Calpain序列分析及DNA疫苗体系的构建

目的 探讨日本血吸虫疫苗候选分子 -钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)在抗日本血吸虫感染的保护性作用及其保护性免疫机制。方法 从日本血吸虫成虫中提取RNA ,用RT -PCR扩增Calpain含多个B ,T细胞表位的片段 ,引物中包含BamHI和EcoRI的酶切位点 ,PCR扩增产物经纯化后TA克隆 ,转化的阳性TA克隆经PCR筛选后 ,液体培养大肠杆菌并回收质粒DNA ,质粒DNA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切 ,目的基因亚克隆到真核表达质粒pVAC载体 ,构建 pVAC -Cal pain真核表达体系 ,转化的阳性亚克隆经PCR筛选 ,液体培养大肠杆菌并回收pVAC -Calpain质粒DNA ,质粒DNA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切和DNA序列分析鉴定被亚克隆的Calpain基因。 结果 RT -PCR从日本血吸虫RNA中扩增了 4 5 3bp的Calpain基因 ,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切和DNA序列分析鉴定Calpain基因被克隆到真核表达质粒 pVAC载体。 结论 日本血吸虫疫苗候选分子Calpain的DNA疫苗体系的建立将有助于解析这个疫苗候选分子抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用及保护性免疫机制。

克服受方言影响的语音缺陷 纯正普通话语音

普通话水平测试中语音缺陷的判定,是一项比较棘手的判定项目,而重视语音缺陷对提高普通话教学水平有着举足轻重的意义,拟对语音缺陷形成和出现的原因中最为重要的方言的影响做以探讨,并列举了陇中方言区语音缺陷的类别。

弓形虫SAG1真核表达质粒的体外表达及其诱导的细胞免疫应答

分析弓形虫SAG1基因真核表达质粒的体外表达及其诱导小鼠的细胞免疫应答.重组表达质粒pVAX1-SAG1瞬时转染vero细胞,Western blot法检测在细胞中的表达.将重组真核表达质粒pVAX1-SAG1及空质粒pVAX1于0周、4周分别经肌注免疫BALB/c小鼠;第8周杀鼠,取脾,分离淋巴细胞,分别经ConA和抗原刺激,用MTT法测定免疫鼠脾脏T淋巴细胞转化率;使用直接免疫荧光法,用流式细胞仪对CD4+、CD8+T细胞亚群进行测定;两组小鼠经弓形虫速殖子攻击感染,计算存活期.Western blot法分析转染细胞,发现存在弓形虫感染血清识别的26kDa的特异带,与理论值相符;抗原刺激小鼠脾T淋巴细胞发生增殖反应,免疫组与空质粒对照组间差异有显著性(P<0.05),但ConA刺激小鼠后,两组间差异无显著性(P>0.05);T细胞亚群CD4+、CD8+动态分析,CD4+、CD8+T细胞数量均升高,免疫组与空质粒对照组差异均有显著性(P1<0.05,P2<0.05).弓形虫攻击感染,免疫组鼠的平均存活时间较空质粒对照组延长.真核表达质粒pVAX1-SAG1在vero细胞中获得表达,且能诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答. ……

弓形虫SAG2/GST融合蛋白在E.coli中的表达条件的研究与纯化

提高弓形虫SAG2/GST融合蛋白在在E.coli中的表达水平并纯化.对诱导温度、诱导物浓度与诱导时间等条件与目的蛋白在细菌裂解上清中的表达量的关系进行了研究.在表达条件优化后,大量制备目的蛋白利用GlutathioneSepharose 4B亲和层析进行初步纯化.纯化产物进一步切胶回收纯化.SAG2/GST融合蛋白在37℃,以0.2mMIPTG诱导4小时后在细菌裂解上清中的表达量最高.SAG2/GST融合蛋白在亲和层析后得到初步纯化并在切胶回收后得到电泳纯的SAG2/GST融合蛋白.获得了SAG2/GST融合蛋白在E.coli的最佳表达条件.得到了两种纯度的SAG2/GST融合蛋白.为进一步研制弓形虫重组抗原疫苗、弓形虫免疫诊断试剂及单克隆抗体提供了基础.……

间日疟原虫红内期SSUrRNA基因片段的扩增、测序及诊断应用

目的：体外扩增间日疟原虫（深圳株）红内期小亚单位核糖体核糖核酸编码基因（SSUrDNA）片段，克隆测序分析，并探讨其诊断应用。方法：设计1对特异性引物，采用聚合酶链反应（PCR）从间日疟患者血样中扩增出间日疟原虫SSUrDNA片段；用PUC19质粒T载体构建重组子导入大肠杆菌JM109；阳性克隆双酶切鉴定后，双脱氧末端终止法测定序列；以SSUrDNA为靶基因，PCR诊断间日疟，双盲法检测40份血样（28份镜检阳性的血样，12份健康血）。结果：间日疟原虫SSUrDNA扩增片段大小约为341bp；阳性克隆双酶切及PCR扩增均得到预期大小的片段；序列测定插入片段为341bp，与SalI株顺序相比，仅在第151位处缺失1个碱基C；以SSUrDNA为靶基因，双盲法检测镜检阳性及健康人血样，结果完全正确。结论：所克隆的间日疟原虫SSUrDNA片段序列在间日疟原虫虫株间高度保守，以其为靶基因建立的PCR检测方法适用于间日疟的诊断。

早期断奶应激对仔猪血清生化指标的影响

5窝 3 5日龄仔猪 4 0头 ,随机分成 2组 ,每组 2 0头 ,每窝 4头。 组仔猪 3 5日龄断奶后留原栏 , 组仔猪 3 5日龄随母猪转栏。在断奶时和断奶后 1、3 d,仰卧前腔静脉采血 ,进行生化指标检验。结果表明 , 组仔猪断奶后 3 d,血清尿素氮 ( BUN)水平升高 ( P <0 .0 5) ,血清球蛋白 ( GLOB)水平降低 ( P <0 .0 5)。断奶后腹泻仔猪的血清钠 ( Na)、葡萄糖 ( GLU)、总蛋白 ( TP)、氯 ( Cl)、清蛋白 ( ALB)水平与腹泻前相比显著下降或极显著下降 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ,血清尿素氮 ( BUN )、乳酸脱氢酶 ( LDH )、肌酸激酶 ( CK )、球蛋白( GLOB)升高 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1 )