Cofilin-1慢病毒载体的构建及其在Huh-7中的过表达

目的构建Cofilin-1过表达的Huh-7细胞株。方法应用RT-PCR克隆出Cofilin-1的完整编码序列,将其亚克隆到慢病毒载体pWPT中,构建慢病毒载体表达质粒pWPT-Cofilin-1;将慢病毒表达质粒pWPT-Cofi-lin-1或pWPT-GFP与慢病毒包装质粒pMD2.G、psPAX2共转染293T细胞,获得携带Cofilin-1完整编码序列的慢病毒和携带GFP基因的慢病毒,将两种慢病毒分别感染Huh-7细胞;通过Real-TimePCR和Western blot检测Huh-7细胞中的Cofilin-1的过表达情况。结果测序结果显示成功构建重组慢病毒表达质粒pWPT-Cofilin-1;慢病毒有效感染Huh-7细胞,依据GFP绿色荧光可测定感染有效率超过95%;Cofilin-1在Huh-7细胞中的mRNA量和蛋白水平都成功的过表达。结论本实验的完成,为进一步研究Cofilin-1基因在肝癌中的生物功能和作用机制奠定了基础。

RNA干扰Cofilin-1基因沉默对人肝癌细胞株Huh-7侵袭和转移能力的影响

目的 Cofilin-1参与多种肿瘤的发病过程,但该基因在肝细胞肝癌中表达和作用不明确。文中拟观察Cofilin-1基因在人肝癌组织中的表达情况,探讨下调Cofilin-1表达对肝癌细胞株Huh-7侵袭和转移能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测Cofilin-1基因在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况;体外合成Cofilin-1序列特异性小干扰RNA,应用脂质体转染Huh-7肝癌细胞株,实验分Cofilin-1-siRNA组(Cofilin-1-siRNA转染Huh-7细胞)、非特异性-RNA组(Ctrl-siRNA组,非特异性siRNA转染Huh-7细胞)、未转染组(未转染Huh-7细胞),每组设2个平行孔。Western blot鉴定Cofilin-1蛋白水平变化。细胞迁移及体外侵袭实验观察转染后细胞的侵袭能力的影响。结果与癌旁组织相比,肝癌组织中Cofilin-1基因表达明显增强[(0.698±0.156)vs(3.523±0.412),P<0.05];Cofilin-1-siRNA组Cofilin-1的蛋白量为0.558±0.033,明显低于Ctrl-siRNA组(0.933±0.015)和未转染组(0.961±0.020),差异有统计学意义(P<0.05);体外细胞迁移和侵袭实验结果均显示:与Ctrl-siRNA组迁移及侵袭细胞数量[(79.00±1.33)个]和未转染组[(74.50±1.35)个]比较,Cofilin-1-siRNA组[(58.50±1.78)个]明显降低(P<0.05);Cofilin-1-siRNA组穿膜Huh-7细胞数[(36.50±0.83)个]明显低于Ctrl-siRNA组[(60.20±1.60)个]与未转染组[(51.50±1.14)个],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Cofilin-1在肝癌组织中高表达,下调Cofilin-1基因的表达能抑制肝癌细胞株Hu H-7的侵袭和转移能力。

S100A11慢病毒表达载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

目的构建S100A11基因慢病毒表达载体,建立Huh-7 S100A11稳定细胞株,并鉴定其表达。方法 RT-PCR扩增S100A11基因片段,与pWPT载体经MluⅠ和NotⅠ同时酶切后连接,构建慢病毒表达载体pWPTS100A11;将表达载体pWPT-GFP和pWPT-S100A11与慢病毒包装质粒pMD2.G和psPAX2共同感染293T细胞,获得携带GFP和S100A11基因的慢病毒,将两种慢病毒分别感染Huh-7细胞,获得Huh-7 S100A11和Huh-7GFP稳定细胞株;利用Real-Time PCR和Western Blotting实验方法检测感染后S100A11的过表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体pWPT-S100A11;慢病毒感染Huh-7细胞株后,阳性对照Huh-7GFP经荧光镜检测传染率达95%;感染Huh-7细胞后S100A11的mRNA和蛋白表达量均增加。结论成功构建慢病毒表达载体pWPT-S100A11,并建立了Huh-7 S100A11稳定细胞株,为进一步研究S100A11基因在肝癌中的生物学功能和机制奠定了基础。

重度妊高征1例分析

妊娠高血压综合征简称妊高征，是孕产妇特有的全身性疾病，为多发生在妊娠20周以后的一种高血压综合征，是造成母子死亡的严重疾病之一。现将我院1例重度妊高征患者的观察与分析报告如下。

Cofilin-1与肝癌细胞迁移侵袭能力的相关性研究

探讨丝切蛋白1(Cofilin-1)与肝癌细胞的迁移、侵袭能力的关系,运用免疫印迹试验(western blot)检测肝癌细胞(Huh-7细胞)、转染上皮生长因子受体的人肝癌细胞(Huh-7-EGFR细胞)与转染上皮生长因子受体突变体Ⅲ的人肝癌细胞(Huh-7-EGFRvⅢ细胞)三种细胞中Cofilin-1的蛋白表达。然后将Cofilin-1用慢病毒表达系统导入Huh-7细胞,构建转染丝切蛋白1的人肝癌细胞(Huh-7-Cofilin-1细胞)系,并应用迁移侵袭实验检测细胞迁移侵袭的能力;再用RNA干扰(siRNA)技术沉默Huh-7-EGFRvⅢ细胞中的Cofilin-1,然后应用迁移侵袭实验检测细胞的迁移侵袭能力。结果显示:转染Cofilin-1后,Huh-7细胞的迁移侵袭能力显著增强(P<0.05);而干扰Cofilin-1后,Huh-7-EGFRvⅢ细胞迁移与侵袭能力明显减弱(P<0.05)。表明Cofilin-1参与肝癌细胞迁移与侵袭。

以课外美术活动美化中职校园

课外美术活动对于净化职业学校的校园环境,提高中职生的审美素质具有重要意义,职业学校可通过组织学生参与各种课外美术活动,达到素质教育的目的。

班主任要加强对农村留守儿童的关爱

改革开放以来．越来越多的农村剩余劳动力涌向城市．家中留下了年迈的老人和年幼的儿童．“留守儿童”一词应运而生。据统计．每年活跃在沿海和大城市边缘的农民工有2亿左右．而在农村的留守儿童近2000万．占总留守儿童的87％。

讲演引导 轻松学“范”

范画教学是美术教学中的一种重要教学方法,是美术学习不可缺少的方法途径。在中职学校的美术教学中运用范画引导教学又有着不同的意义。

乳腺包被性乳头状癌临床病理特征个案报道

乳腺包被性乳头状癌(encapsulated papillary carcinoma of breast,EPC)又称乳腺包裹型乳头状癌[1]、乳腺囊内乳头状癌[2],是临床比较少见的乳腺癌,尽管其组织病理有特征性,但不容易与导管内增生的乳头状肿瘤相鉴别,本文结合文献对1例EPC的临床病理特征、诊断及预后进行探讨。

浅论崩漏（功能性子宫出血）证治

崩漏乃妇女常见多发病，遵循历代医家之三大治法“塞流、澄源、复旧”，本人根据多年临床实践，在三大治法的基础上不拘一格，审证求因，特别处方用药要灵活多变，配方加减适宜，方可有着重要的实际意义。