脂质体共载紫杉醇与二氢卟吩e6协同介导PDT治疗肺癌的实验研究

目的研究二氢卟吩e6(chlorin e6,Ce6)负载于脂质体共载紫杉醇(paclitaxel,PTX)协同介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对裸鼠肺癌模型的治疗效果。方法实验分为三部分:(1)采用薄膜蒸发法制备PTX&Ce6-LP并进行表征观察。(2)建立裸鼠肺癌A549肿瘤模型,经活体荧光成像观察PTX&Ce6-LP进入荷瘤裸鼠体内的代谢情况,获得PDT治疗给药后激光照射的最佳时间点。(3)PDT瘤内治疗。将40只裸鼠分为3大组,PDT组24只、模型组8只和正常对照组8只。其中PDT组,再根据PTX&Ce6-LP中Ce6的浓度(1.25、2.5和3.75 mg/kg)分为3个亚组,每组各8只。PDT组经皮穿刺将光纤导入瘤内进行激光照射治疗,每次照射功率108 mW,照射时间10 min,每3 d治疗一次。第4次PDT治疗后3 d,各组中5只取其瘤体进行组织病理学检测,包括HE染色、Bax和Bcl-2免疫组化分析;每组中剩余的3只继续进行PDT治疗,直至肿瘤治愈,记录PDT治疗次数,并取其治疗区域进行组织病理学检测。结果(1)实验制得的PTX&Ce6-LP的粒径约为176.6 nm,Ce6的包封率为50.1%、PTX包封率为69.3%,PTX&Ce6-LP吸收峰位于403 nm和665 nm。(2)PTX&Ce6-LP进入裸鼠体内后1 h在肿瘤部位富集,24 h时体内富集浓度明显减少。(3)PDT不同浓度(1.25、2.5和3.75mg/kg)组4次治疗后3 d,抑瘤率分别为11.0%、35.3%、62.3%。HE染色结果显示:各组呈现不同程度的坏死,且PTX&Ce6-LP浓度越高坏死程度越高。PDT三个亚组随着PTX&Ce6-LP浓度的增加,Bax的表达增强,Bcl-2的表达减弱。各组Bax的表达水平:模型组<1.25 mg/kg组<2.5 mg/kg组<3.75 mg/kg组;Bcl-2的表达水平:模型组>1.25 mg/kg组>2.5mg/kg组>3.75 mg/kg组。(4)2.5 mg/kg组第9次PDT治疗和3.75 mg/kg组第7次PDT治疗实现对肿瘤治愈。结论本研究通过PTX&Ce6-LP所介导的PDT治疗肺癌A549肿瘤模型,有效地抑制了其瘤体生长,实现对肿瘤的完全清除。

特定频率的1050nm近红外光联合盐酸多奈哌齐治疗AD的实验研究

目的探讨光生物调节和药物联合治疗策略在阿尔茨海默病(AD)治疗中的潜在应用价值。方法将25只APPswe/PS1dE9双转基因小鼠按随机数字表法分为模型对照组、盐酸多奈哌齐组、盐酸多奈哌齐+10 Hz组、盐酸多奈哌齐+20 Hz组、盐酸多奈哌齐+40 Hz组, 每组5只, 另取5只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。盐酸多奈哌齐组、盐酸多奈哌齐+10 Hz组、盐酸多奈哌齐+20 Hz组、盐酸多奈哌齐+40 Hz组小鼠采用灌胃给药方式给予盐酸多奈哌齐治疗[剂量为1.3 mg/(kg·d), 连续4周], 盐酸多奈哌齐+10 Hz组、盐酸多奈哌齐+20 Hz组、盐酸多奈哌齐+40 Hz组小鼠同期分别给予10 Hz、20 Hz、40 Hz频率的1050 nm近红外光照射治疗(6 min/d, 连续4周)。治疗结束后, 采用Morris水迷宫实验检测各组小鼠的行为认知能力, 采用刚果红染色检测海马CA1区淀粉样物质沉积情况, 采用ELISA法检测海马组织匀浆液中β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40、Aβ1-42水平。结果 (1)与模型对照组比较, 盐酸多奈哌齐+40 Hz组小鼠的逃避潜伏期自定位航行实验第4天开始均明显缩短, 盐酸多奈哌齐组小鼠的逃避潜伏期自第5天开始才明显缩短, 差异均有统计学意义(P<0.05);并且盐酸多奈哌齐+40 Hz组小鼠的逃避潜伏期较盐酸多奈哌齐组小鼠均有所缩短, 但差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组比较, 盐酸多奈哌齐组、盐酸多奈哌齐+40 Hz组小鼠的跨越平台次数均明显增多, 差异均有统计学意义(P<0.05);而盐酸多奈哌齐+40 Hz组小鼠的跨越平台次数与盐酸多奈哌齐组相近。(2)盐酸多奈哌齐+40 Hz组海马CA1区呈现出散在分布的砖红色点状斑块, 染色深度及分布范围均明显小于模型对照组, 且细胞核结构排列较模型对照组整齐有序;同时, 其砖红色斑块的染色深度、数量也均小于盐酸多奈哌齐组。(3)与模型对照组比较, 盐酸多奈哌齐+40 Hz组小鼠海马组织匀浆液中Aβ1-40、Aβ1-42浓度均明显降低, 差异均有统计学意义(P<0.05);与盐酸多奈哌齐组比较, 盐酸多奈哌齐+40 Hz组小鼠海马组织匀浆液中Aβ1-40、Aβ1-42浓度也有所降低, 但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 40 Hz 1050 nm近红外光联合盐酸多奈哌齐的治疗策略可能具有改善AD小鼠的行为认知能力、适度降低脑组织中Aβ沉积的潜力。

二氢卟吩e6脂质体介导的光动力疗法治疗肺癌的动物实验研究

目的研究二氢卟吩e6(chlorin e6,Ce6)及Ce6脂质体(Liposomes)对肺癌的光动力作用效果。方法采用薄膜蒸发法制备Lip@Ce6,检测其表征、形态、包封率。将45只实验裸鼠随机分为9组,每组5只,分别为空白对照组、模型对照组(A组)、激光组(B组)、Ce6-PDT组根据光敏剂浓度2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg设置三组(C1组、C2组、C3组)、Lip@Ce6-PDT组根据光敏剂浓度2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg设置三组(D1组、D2组、D3组)。给药1 h后经皮穿刺导入光纤行瘤内组织激光照射治疗,激光波长665 nm,治疗10 min/次,每3 d治疗1次,共治疗5次。通过绘制瘤体体积生长曲线、计算抑瘤率,分析光动力疗法(Photodynamic therapy)对肺癌的抑制作用;常规HE染色,在光镜下观察肿瘤组织病理学的变化并对实验结果进行分析。结果 (1)实验制得的Lip@Ce6的粒径为196.3 nm左右,具有良好的分散性和稳定性,Ce6的包封率为94.2%。(2)肿瘤增长速率为A组>B组>C1组>D1组>C2组>D2组>C3组>D3组;前三次PDT治疗后差异无统计学意义(P>0.05);从第四次治疗后,各组差异具有统计学意义(P<0.05);第五次治疗后,B组、C1组、C2组、C3组、D1组、D2组、D3各组的抑瘤率分别为15.3%、31.3%、40.3%、46.5%、35.9%、45.1%、53.9%。(3)组织病理学改变,光镜下观察到各组呈现不同程度的坏死,且Lip@Ce6-PDT各组比Ce6-PDT各组的坏死程度高。结论本研究成功制备了纳米光敏剂Lip@Ce6,相比于普通光敏剂Ce6可更有效的抑制瘤体的生长,增强细胞坏死程度。