CD26/DPP4对隐球菌脑膜炎患者CD4+T细胞及相关细胞因子的影响与临床意义

目的：分析CD26／DPP4对隐球菌脑膜炎患者CD4＋T细胞及其细胞因子的影响与临床意义。方法收集2011年8月～2015年12月在上海长海医院和长征医院确诊的36例隐球菌脑膜炎患者及36例同期健康者外周血，以密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC），流式细胞术分选CD26＋CD4＋T，CD26－CD4＋T细胞群，反转录酶-聚合酶链锁反应（RT-PCR）检测细胞因子表达水平，以Pearson系数表示DPP4活性，CD26＋CD4＋T（％）与APACHE II评分，IL-17， TNF-α，IL-4，IFN-γ的相关性。结果实验组与对照组CD26＋CD4＋T（％）为13.35±3.83 vs 8.39±2.14，t＝6.78，P＜0.0001；DPP4活性为50.89±17.21 mU／ml vs 73.83±20.24 mU／ml，t＝5.18，P＜0.0001，差异具有统计学意义。实验组CD26＋CD4＋T（％）与 APACHE II评分，IL-17，TNF-α呈正相关（r＝0.431，0.564，0.688，P＝0.0038，0.001，0.0046）；DPP4活性与 APACHE II 评分，IL-17，TNF-α，IFN-γ呈负相关（r＝－0.544，－0.489，－0.678，－0.734；P 均＜0.001）。结论 CD26／DPP4可能通过调节Th细胞亚群参与隐球菌脑膜炎致病过程，是潜在疾病治疗靶点和预测指标。

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中IL-37表达增高及临床意义

目的检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中IL-37的表达水平,进一步探究其在PBC致病过程中的临床意义。方法收集2013年6月~2015年8月于长海医院确诊的42例PBC患者和38例同期体检的健康对照者外周血,采用蔗糖密度梯度离心法分离PBMCs,以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PBMCs中IL-37的mRNA表达水平,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中IL-37,IL-6,IL-17,TNF-α,TGF-β,IL-18和IL-23的蛋白水平,同时记录PBC患者的病理性分期。对IL-37与IL-6,TNF-α,IL-17,TGF-β,IL-18,IL-23进行Pearson相关性分析,对IL-37与PBC疾病分期进行Spearman秩相关性分析。结果实验组与对照组IL-37的mRNA水平和蛋白水平分别为2.81±0.94 vs 1.09±0.56,356.14±169.36 pg/ml vs 86.68±48.23 pg/ml,差异具有统计学意义(t=9.811,9.462,P均<0.000 1)。相关性分析表明:IL-37与IL-17,TNF-α,IL-6,TGF-β呈正相关(r=0.561 2,0.661 9,0.672 1,0.765 3;P值均<0.001),与疾病分期(Ⅰ~Ⅳ)呈正相关(r_s=0.348 9,P<0.05)。结论 IL-37可能参与了PBC的致病过程,对疾病预测与诊断有重要意义。

隐球菌脑膜炎患者血清外泌体CD93表达增高及意义

目的检测隐球菌脑膜炎患者血清中外泌体表达CD93的水平,进一步探究其临床意义。方法实验组为2012年11月~2016年12月在上海长海医院和长征医院确诊的38例隐球菌脑膜炎患者的血清,诊断标准为脑脊液染色新生隐球菌阳性或培养阳性;对照组为同期收集的38例健康人血清。血清外泌体的分离采用超高速离心法;外泌体表面抗原的鉴定采用磁珠捕获结合流式细胞仪检测法;血清中细胞因子用ELISA法进行蛋白定量。实验组与对照组检测值的比较采用两独立样本的t检验,两变量之间的相关性以Pearson系数表示。结果流式结果表明,实验组血清外泌体中CD93的表达水平高于对照组为(79.11±19.31vs 23.98±6.56)%,差异具有统计学意义(t=16.66,P<0.000 1)。IFN-γ在实验组与对照组血清中的表达水平为(39.78±10.77vs 58.98±16.99)pg/ml,差异具有统计学意义(t=5.884,P<0.0001);IL-17在实验组与对照组血清中的表达水平为(16.32±4.03vs 3.11±0.87)pg/ml,差异具有统计学意义(t=19.75,P<0.000 1);IL-1β在实验组与对照组血清中的表达水平为(57.12±12.98vs 13.45±4.78)pg/ml,差异具有统计学意义(t=19.46,P<0.000 1)。实验组血清中CD93+exosomes所占的百分比与IFN-γ,IL-17,IL-1β的蛋白表达量呈正相关(r=0.488,0.456,0.532,均P<0.01)。结论隐球菌脑膜炎疾病过程中,CD93在外泌体的表达可能通过影响CD4+T细胞参与了该病病程。

miR-205在ITP患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的：研究micro-RNA（miR-205）在原发性免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia，ITP）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）中的表达和意义。方法收集43例 ITP患者和38例健康人的外周静脉血2 ml，分离PBMC，提取细胞总 RNA，逆转录合成 cDNA，以 U6为内参，应用实时荧光定量 PCR（Real time PCR）的方法检测miR-205的表达量；分析miR-205与血小板计数结果之间的相关性。结果 ITP初诊患者（Naive ITP） PBMC miR-205的表达水平与健康对照组相比上调（1.81±0.48 vs 0.92±0.25，t＝10.31，P＜0.01）；治疗后不完全缓解组（incmplete remissiongroup，IR group）和初诊患者相比，miR-205的表达水平差异无统计学意义（P＝0.112），和正常对照组相比，则表达升高（1.63±0.65 vs 0.92±0.25，t＝7.2，P＜0.01）；14例治疗后完全缓解组（complete remission group，CR group）治疗后（After treatment）PBMC miR-205的表达低于治疗前（before treatment）的表达水平（1.07±0.43 vs 1.91±0.34，t＝5.68，P＜0.01）；ITP患者PBMC中miR-205的表达量与血小板计数呈负相关（r＝－0.0696，P＜0.05）。结论miR-205在 ITP初诊患者PBMC中高表达，而治疗完全缓解后表达水平又降低，并且表达水平与血小板数量呈负相关，表明其可能与 ITP的发生发展相关，或许会成为 ITP诊疗新的标志物。

自身免疫性胰腺炎患者血清外泌体中CD69表达升高及意义

目的探究自身免疫性胰腺炎(AIP)患者血清外泌体中CD69的表达情况,初步探讨其对疾病病理过程的影响。方法收集2012年10月~2016年12月来长海医院就诊的35例AIP患者血清和同期就诊的35例健康个体血清,分别作为实验组和对照组。以ELISA法检测血清中的细胞因子浓度,以磁珠结合抗体的方法在流式细胞仪中检测血清中外泌体表面分子的表达情况,两组之间计量资料的比较采取两独立样本t检验,两变量之间的相关性以Pearson系数表示。结果流式细胞仪分析显示,实验组血清中外泌体CD69表达水平高于对照组(85.76±19.45vs 17.01±5.89)%,差异有统计学意义(t=20.01,P<0.0001);实验组中CD69+的外泌体所占百分比与血清中IL-4,IFN-γ,TGF-β表达量呈正比(r=0.456,0.678,0.548,均P<0.05),CD69-的外泌体所占百分比与血清中IL-4,IFN-γ,IL-10,TGF-β呈反比(r=-0.589,-0.399,-0.784,-0.657,均P<0.05)。结论 CD69在外泌体的表达可能通过影响CD4+T细胞功能参与了AIP病程,是该病潜在的监测指标和治疗靶点。

CD69+CD4+CD25-T在自身免疫性胰腺炎患者外周血中表达升高及临床意义

目的检测CD69+CD4+CD25-T细胞在自身免疫性胰腺炎(AIP)患者外周血中的表达情况,进一步分析其临床意义。方法收集2014年9月~2016年12月长海医院血液科诊断的32例AIP患者与同期体检的32例健康个体外周血分别作为实验组与对照组。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),用流式细胞术检测PBMCs中的CD69+CD4+CD25-T,以ELISA法检测血浆中细胞因子的表达状况。两组间变量的比较采用两独立样本<检验,两计量资料间的关系以Pearson相关系数表示。结果实验组与对照组CD69+CD4+CD25-T表达水平为10.36%±3.68%vs3.99%±1.45%,(t=9.110,P<0.000 1);TGF-β的表达水平为399.86±121.88vs 143.87±56.22 pg/ml,(t=10.79,P<0.000 1),差异均具有统计学意义。实验组CD69+CD4+CD25-T细胞与TGF-β呈正相关(r=0.653,P<0.001),与IL-4,IFN-γ,IL-2呈负相关(r=-0.442,-0.567,-0.351,P<0.05),差异具有统计学意义。结论 CD69+CD4+CD25-T细胞可能参与了AIP的免疫病理过程,是临床诊断与治疗潜在的生物学指标。

隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞PILRα升高及意义

目的探究Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体(paired immunogobin-like type 2ceceptor alpha,PILRα)在隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中的表达情况,初步讨论其临床意义。方法收集2014年5月~2016年11月到长海医院就诊的30例隐球菌脑膜炎患者外周血作为实验组,诊断标准为脑脊液染色新生隐球菌阳性或培养阳性,同期体检的30例健康人外周血作为对照组。以密度梯度离心法获得标本PBMCs,以PCR检测PBMCs中PILRα的基因表达情况,以ELISA法检测血浆中PILRα及相关细胞因子的表达情况。以独立样本t检验进行两组间变量的比较,以Pearson相关系数表示两变量间的相关性。结果实验组与对照组PBMCs中PILRα相对mRNA水平为2.49±0.74vs 1.77±0.69(t=3.898,P=0.000 3),血浆中PILRα的蛋白表达水平为33.81±10.21ng/ml vs 20.01±6.74ng/ml,差异均具有统计学意义(t=6.178,P<0.000 1)。实验组血浆中PILRα的蛋白表达量与IL-1,IL-6和IFN-γ呈正比(r=0.456,0.521,0.467,P<0.05),差异具有统计学意义。结论 PILRα可能参与了隐球菌脑膜炎的免疫炎症过程,是该病潜在的监测标志物和治疗靶点。

CD36在隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞中表达升高及其临床意义

目的探究CD36在隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达水平及其临床意义。方法以2013年9月~2017年2月于上海长海医院和长征医院确诊的36例隐球菌脑膜炎患者外周血为实验组,以同期体检的36例健康者外周血作为对照组,采用密度梯度离心法进行PBMCs的分离,以qRT-PCR法检测PBMCs中CD36,TLR4的相对mRNA表达水平,以ELISA法检测血浆中TNF-α等细胞因子的表达水平,实验组与对照组检测值的比较采用两独立样本t检验,对实验组PBMCs中CD36的mRNA相对表达水平与TNF-α等细胞因子进行Pearson相关性分析。结果实验组PBMCs中CD36的mRNA相对表达水平为2.01±0.63,对照组为1.49±0.47,两组比较差异具有统计学意义(t=3.969,P=0.000 2)。Pearson分析结果显示实验组CD36与血浆中IFN-γ蛋白表达水平呈正相关(r=0.384,P<0.05),与TGF-β呈负相关(r=-0.487,P<0.005)。结论 CD36可能通过影响IFN-γ,TGF-β等因子的表达参与隐球菌脑膜炎的免疫病理过程,是该病监测和治疗潜在的靶点。

表面增强拉曼光谱技术检测隐球菌脑膜炎患者血清中CD93^+外泌体及其意义

目的利用表面增强拉曼光谱技术(SERS)检测隐球菌脑膜炎患者血清中CD93^+外泌体,以优化该病的监测手段。方法收集2013年12月~2017年3月在上海长海医院和长征医院确诊的38例隐球菌脑膜炎患者的血清作为实验组,同期体检的38例健康者血清作为对照组。用ELISA法检测血清中的IFN-γ,TNF-α的蛋白表达水平;用超高速离心法分离血清外泌体;用磁珠连接抗体法捕获CD93^+外泌体并进行标记,于拉曼光谱仪下检测样本的SERS信号。实验组与对照组计量资料间的比较采用两独立样本的t检验,用Origin75软件对两连续变量进行线性拟合,两变量之间的相关性以Pearson系数表示。结果 SERS检测隐球菌脑膜炎患者血清中外泌体最低浓度为5 500个/ml,最低量为110个/ml,log(SERS信号)与log(外泌体浓度)进行线性拟合的R值为0.995 96,P<0.0001;SERS检测实验组与对照组血清外泌体CD93的信号值取对数分别为2.75±0.59vs 2.47±0.15,差异具有统计学意义(t=2.835,P=0.005 9);SERS检测实验组血清CD93^+外泌体得到的数据与ELISA法检测实验组血清中IFN-γ,TNF-α的结果呈正相关,差异有统计学意义(r=0.389,0.478,P<0.05)。结论该方法可初步提高隐球菌脑膜炎患者血清标本检测的灵敏度,为该病监测提供新的技术思路。

热损伤/热习服大鼠血清中microRNA-193a-3p的表达及与相关细胞因子水平的相关性

目的研究热损伤/热习服大鼠血清中microRNA-193a-3p表达的变化及其与热休克蛋白(HSP70)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和转化生长因子-β((TGF-β)的相关性。方法随机选取45只体重、肛温、周龄基本一致的雄性大鼠并分为3组:热休克损伤组(HS)、热习服组(HA)和对照组(HC)。在高温实验舱中建立热休克损伤和热习服大鼠模型,建模成功后采集大鼠心尖血并离心得到血清。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测大鼠血清中的microRNA-193a-3p的水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中HSP70和相关细胞因子IL-1β的蛋白水平。实验组与对照组之间的比较采用Dunnett-t检验,用Pearson相关性分析来比较HA组和HS组两变量之间的相关性。结果 MicroRNA-193a-3p在三组中的表达量分别为0.99±0.30(HS),1.13±0.33(HA)和2.15±0.35(HC),其在HA和HS组中的表达显著降低(P<0.05)。在HS组中,microRNA-193a-3p与HSP70,IL-1β和TNF-α呈负相关,差异具有统计学意义(r=-0.821,-0.839,-0.578,均P<0.05)。在HA组,microRNA-193a-3p与HSP70,IL-1β呈负相关,且具有统计学意义(r=-0.770,-0.766,均P<0.05)。结论 MicroRNA193a-3p在热损伤/热习服大鼠血清中表达减少,且可能参与热损伤/热习服的病理过程。