马铃薯块茎特异性启动子驱动的人白细胞介素-12的遗传转化研究

为获得高效表达人白细胞介素-12(h IL-12)蛋白的转基因马铃薯植株,利用根瘤农杆菌侵染法将前期构建的马铃薯块茎特异性启动子Ppatatin驱动的h IL-12植物表达载体导入马铃薯,通过共培养、筛选、分化等过程获得转基因植株,并结合PCR、RT-PCR、GUS染色及ELISA分析对转基因植株进行鉴定。结果显示,获得12个马铃薯转基因株系,PCR检测表明其中的10个株系目的基因已导入马铃薯基因组,转基因阳性率为83%;RT-PCR分析表明其中的7个株系外源基因在转录水平成功获得表达,ELISA分析表明其中的5个株系有明显的蛋白水平表达。对这7个株系后代的检测表明外源基因成功表达且具有良好的遗传稳定性。

块茎特异性启动子驱动的hIL-12在转基因马铃薯中的表达

目的检测人白细胞介素-12(h IL-12)蛋白在转基因马铃薯块茎中的表达量、遗传稳定性以及组织特异性。方法提取转基因马铃薯块茎与叶片总蛋白,利用h IL-12抗体进行western blot和ELISA检测。结果在5株转基因马铃薯的块茎中检测到了h IL-12蛋白的表达,表达量最高达到3.04μg/g(总蛋白)。此外,同一植株的多个块茎中h IL-12的表达具有一致性,而在叶片中未检测到明显的表达。选取2株马铃薯植株的块茎进行种植,其后代也能检测到稳定的h IL-12蛋白表达。结论本研究获得了稳定高表达h IL-12蛋白的转基因马铃薯植株,为利用马铃薯生物反应器高效表达生产h IL-12蛋白提供了理论依据。

马铃薯叶特异性启动子驱动的人白细胞介素-12的遗传转化

利用植物生物反应器表达具有应用价值的药用蛋白是近年来生物技术研究的热点之一。本研究利用前期构建的Prbcs驱动的h IL12植物表达载体,导入根瘤农杆菌后侵染马铃薯,通过筛选、分化等过程,获得转基因马铃薯植株。结果显示,获得13个独立的转h IL12基因阳性马铃薯株系,GUS染色分析表明外源基因成功获得表达,且具有良好的遗传稳定性。本研究获得的Prbcs驱动的h IL12转基因马铃薯植株,为下一步利用马铃薯高效表达生产h IL-12蛋白打下了基础。

马铃薯叶特异性启动子驱动的hIL-12在转基因马铃薯中表达

[目的]检测人白细胞介素-12(h IL-12)蛋白在转基因马铃薯叶片中的表达量、遗传稳定性以及组织特异性。[方法]利用RT-PCR检测基因马铃薯叶片中h IL-12基因在RNA水平的表达;利用Western Blot和ELISA检测转基因马铃薯叶片与块茎中h IL-12在蛋白水平的表达。[结果]在7个转基因马铃薯株系的叶片中检测到了h IL-12的表达,而在相应的块茎组织中未检测到明显表达。在经过2代无性繁殖后,外源蛋白的表达量稳定。[结论]获得了稳定表达h IL-12蛋白的转基因马铃薯植株,表达量最高达到2.84μg/g总蛋白。