根癌农杆菌介导的烟曲霉转化条件的优化

目的探讨根癌农杆菌介导烟曲霉的遗传转化及其影响因素。方法构建根癌农杆菌二元载体PDHt/SK,二元载体转化根癌农杆菌,分别对共培养温度(23、24、25、26、27、28)℃、媒介(尼龙膜、硝化纤维膜、液相静置培养)、共培养时间(12、24、36、48h)、预培养加乙酰丁香酮与否、加入乙酰丁香酮的浓度(100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml);分生孢子与根癌农杆菌的不同比例(1∶1、1∶10、1∶100、1∶1000)进行根癌农杆菌介导烟曲霉的转化,观察上述条件下的根癌农杆菌介导的烟曲霉转化效率,用潮霉素抗性基因筛选转化子。结果共培养温度、转化媒介、共培养时间、共培养加入乙酰丁香酮不同的浓度、分生孢子与根癌农杆菌的不同比例均对根癌农杆菌介导烟曲霉转化效率产生影响,但是预培养加乙酰丁香酮与否对根癌农杆菌转化烟曲霉的效率影响不明显。结论根癌农杆菌可成功介导烟曲霉的遗传转化,其转化过程受诸多因素的影响。

5-氨基酮戊酸光动力效应对体外培养人恶性黑素瘤细胞的物理学干预特征

目的:探讨5-氨基酮戊酸(5-ALA)光动力学效应(5-ALA-PDT)对体外培养人恶性黑素瘤细胞的物理学干预作用,为进一步进行体内的实验研究提供实验依据。方法:实验于2004-04/11在解放军第三军医大学西南医院中心实验室将体外培养的人黑素瘤A-375细胞分别加入不同浓度的5-ALA(0.5,1,1.5,2mmol/L)孵育6h,予波长652nm半导体激光照射,照射的功率密度为15.6mW/cm2,照射剂量分别为0,2,5,10,20J/cm2,继续孵育12h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率。结果:①5-ALA作为内源性光敏剂原卟啉IX(PpIX)的前体物被黑素细胞瘤摄取后产生过量的原卟啉IX,用652nm的激光照射能对黑素瘤A-375产生杀伤作用,其杀伤细胞的程度与5-ALA的浓度和光照剂量成正相关(P<0.01),但是当5-ALA的浓度达到1.5mmol/L以上时其杀伤细胞的作用无显著增加。②在加入5-ALA而无激发光源的情况下,细胞所产生的原卟啉IX对细胞的生存不产生明显影响(P>0.05)。结论:5-氨基酮戊酸在体外可以对黑素瘤细胞产生光动力学效应。

根癌农杆菌介导的烟曲霉几丁质合成酶chsC基因缺失突变体的构建

目的利用根癌农杆菌介导的基因转化定点插入突变几丁质合成酶chsC基因,实现基因失活而构建几丁质合成酶chsC基因缺失烟曲霉突变体。方法构建根癌农杆菌二元载体pDHt/SK,利用根癌农杆菌介导的转化插入突变烟曲霉几丁质合成酶chsC基因,用潮霉素抗性基因筛选转化子,并进行实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定。结果潮霉素抗性基因通过同源重组成功插入烟曲霉基因组中;经RT-PCR鉴定,烟曲霉几丁质合成酶基因chsC表达失活。结论利用根癌农杆菌介导的基因转化可以定点插入突变并失活目的基因,此方法有可能成为烟曲霉基因转化和功能基因组研究的有力工具。

二氢卟吩e6光动力学疗法对人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用

目的探讨二氢卟吩e6(Ce6)光动力学疗法(Ce6-PDT)对体外培养人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用。方法将体外培养的人黑素瘤A-375细胞加入Ce6,浓度分别为2、4、7·5、15、30和60μmol/L,孵育12h,予波长652nm半导体激光照射,照射的功率密度为15·6mW/cm2,能量密度分别为2、5、10和20J/cm2,继续孵育12h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率。结果(1)Ce6与细胞共同培养而不受光照的条件下对细胞的毒性较小,其浓度小于15μmol/L时各浓度组间细胞存活率差异无显著意义(P>0·05);浓度较高(>15μmol/L)对细胞的存活率影响较大(P<0·01)。(2)Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量成正相关(P<0·01)。结论Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性。

HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。方法提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切连接至真核表达载体pCDNA3.0中。pCDNA3.0-ICP27经双酶切、测序验证,并通过脂质体介导质粒瞬时转染Vero细胞,经RT-PCR和Western blot检测ICP27蛋白的表达。结果 pCDNA3.0-ICP27经双酶切可切出目的片段,测序结果经比对,与基因库中的序列完全一致。转染后经RT-PCR和Western blot检测,证实转染重组质粒组有ICP27蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到ICP27的表达。结论成功构建了HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并能在Vero细胞中表达。

皮肤恶性黑素瘤光动力学治疗研究进展

恶性黑素瘤起源于痣细胞或黑素细胞,好发于皮肤黏膜,恶性程度高,预后差,治疗手段多样,但疗效多不确切。光动力学治疗是近20年来兴起并不断发展的新技术,光动力学治疗肿瘤具有抗瘤谱广、选择性杀伤肿瘤细胞作用强、对正常细胞器官损伤轻微等特点,现已成为治疗许多恶性肿瘤的研究热点。

阿昔洛韦与伐昔洛韦预防频发性生殖器疱疹复发作用比较研究

目的:比较2种抗病毒药物病毒抑制疗法预防频发性生殖器疱疹复发的临床效果。方法:将132例频发性生殖器疱疹患者(复发次数>6次/年)随机分成2组,Ⅰ组口服阿昔洛韦400 mg每日2次,连续服用6个月。Ⅱ组口服伐昔洛韦500mg,每日2次,连续服用3个月,第4、5个月口服500 mg,每日1次,第6个月口服500 mg,隔日1次。分别对用药过程中及用药6个月后的复发情况进行观察。结果:与治疗前相比,2种方案治疗后平均复发次数均明显减少,2组治疗前、后平均复发次数差异均有统计学意义(t=12.46,P<0.05)。伐昔洛韦组与阿昔洛韦组比较,前者显著减低无症状排毒情况(t=5.72,P<0.05)。结论:伐昔洛韦比阿昔洛韦不仅可以有效预防频发性生殖器疱疹复发次数,而且可以减少生殖器部位的无症状排毒情况。

兰州地区急性期泛发型湿疹患者血清总IgE及sIgE筛查结果分析

湿疹是由多种内、外因素引起的真皮浅层及表皮炎症，临床上急性期皮损以丘疱疹为主，有渗出倾向，慢性期以苔藓样变为主，病情易反复发作。湿疹的病因尚不明确，可能由慢性感染病灶等内部因素以及食物（如鱼、虾、牛羊肉等）、吸入物（如花粉、屋尘螨等）等外部因素所诱发及加重。湿疹病因复杂，瘙痒明显，严重影响患者的生活质量。

白芍总苷联合窄谱中波紫外线及卡泊三醇治疗中度寻常性银屑病78例疗效分析

目的观察白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)联合窄谱中波紫外线(narrow band ultraviolet B light,NB-UVB)、卡泊三醇治疗中度寻常性银屑病的临床疗效和安全性。方法 154例中度寻常性银屑病患者随机分为治疗组78例和对照组76例。两组给予NB-UVB每周3次照射和卡泊三醇乳膏每日2次外用治疗,此外,治疗组给与白芍总苷胶囊600mg口服,3次/d。两组疗程均为8周。以银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分评价疗效并记录不良反应。结果治疗8周后,治疗组PASI评分(2.1±0.8)低于对照组(5.3±1.4),差异有统计学意义(P<0.05);治疗组有效率(88.46%)高于对照组(73.68%),差异有统计学意义(P<0.05)。两组未见明显不良反应。结论 TGP联合NB-UVB、卡泊三醇治疗中度寻常性银屑病疗效好,安全性高。

丹参酮联合光动力疗法治疗重度痤疮31例临床观察

目的探讨丹参酮胶囊联合5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)治疗重度痤疮的临床疗效和安全性。方法将入选的61例重度痤疮患者随机分为两组,PDT组(30例),给予ALA-PDT治疗;联合组(31例),给予口服丹参酮胶囊,并结合ALA-PDT治疗。两组同时外用甲硝唑凝胶。比较两组患者在治疗后的疗效及不良反应,并随访3个月。结果治疗6,8周后,联合组治疗重度痤疮患者的有效率(78.57%,96.15%)分别高于PDT组(53.57%,72.00%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论两组在治疗重度痤疮方面均有明显的疗效;联合组比PDT组在第6,8周时疗效更明显。从某种意义上看,联合组治疗重度痤疮可以缩短治疗疗程,减轻患者经济负担,且安全性更高。

复方甘草酸苷及阿维A联合NB-UVB治疗寻常型银屑病疗效观察

目的:观察复方甘草酸苷及阿维A胶囊联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗寻常型银屑病的疗效和安全性。方法:118例寻常型银屑病患者随机分为试验组60例和对照组58例。两组均给予NB-UVB照射治疗隔日1次、阿维A胶囊10 mg,po bid;试验组在此基础上加用复方甘草酸苷胶囊50 mg,po tid。两周疗程均为8周。以银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分评价疗效并记录药品不良反应。结果:治疗8周后,试验组PASI评分(3.7±2.12),低于对照组(5.3±2.713),差异有统计学意叉(P<0.05);试验组有效率(83.34%)高于对照组(68.96%),差异有统计学意义(P<0.05);两组未见明显药品不良反应。结论:复方甘草酸苷和阿维A胶囊联合NB-UVB治疗寻常型银屑病疗效显著,不良反应较少。

喀喇昆仑高原官兵皮肤病流行病学调查研究

目的:研究喀喇昆仑高原进驻者皮肤病流行病学特点。方法:由皮肤科医师按照统一调查方案对喀喇昆仑高原与兰州地区居住1年以上的某部官兵进行皮肤病普查,并对其可能的影响因素进行分析。结果:与兰州地区进驻者比较,喀喇昆仑高原进驻者部分皮肤病患病率显著增加。共发现36个病种,其中寻常痤疮、高原指甲凹陷症、高原性脱发、慢性唇炎和日光性皮炎是最常见的病种,共253例,占全部被调查对象的54.29%。结论:喀喇昆仑高原进驻者皮肤病谱有所不同,高原指甲凹陷症、高原性脱发和慢性唇炎的患病率显著增高。寻常痤疮、高原指甲凹陷症、高原性脱发、慢性唇炎和日光性皮炎是最常见的皮肤病。

甘草黄酮对小鼠光老化皮肤中caspase-3、caspase-12表达的影响

目的:研究皮肤外用甘草黄酮对紫外线照射引起的小鼠光老化皮肤的影响。方法:BALB/C小鼠50只随机分成5组:模型组(A)、基质组(B)、甘草黄酮组(C)、薇诺娜组(D)、正常对照组(E),模拟UVB长期照射,造成皮肤光老化小鼠模型。B、C、D组照射同时分别外用基质乳膏、甘草黄酮乳膏、薇诺娜防晒霜(SPF30,PA+++)。组织切片HE染色观察皮肤结构改变;以ELISA法测定皮肤组织caspasse-3、caspase-12含量。结果:A、B组小鼠皮肤组织caspasse-3、caspase-12含量明显增加,病理切片呈现明显光老化状态;C、D组cspasse-3、caspase-12含量与E组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:甘草黄酮乳膏对紫外线照射引起的小鼠皮肤光老化具有保护作用,其机制可能为甘草黄酮通过抑制caspase-12活化,进而阻断caspase-3的激活,抑制细胞的凋亡。

二氢卟吩e6和5-氨基酮戊酸对恶性黑素瘤裸鼠移植瘤的PDT疗效观察

目的在恶性黑素瘤动物模型上观察二氢卟吩e6(Ce6)和5-氨基酮戊酸(5-ALA)的光动力学治疗(PDT)效应。方法于裸鼠的右后肢腋下注射A-375恶性黑素瘤细胞悬液0.1ml(约2×106个细胞),接种部位出现黄白色结节表明动物模型建立成功。共有27只荷瘤裸鼠接受半导体激光(波长652nm)照射,每部位光照剂量均为100J/cm2。实验裸鼠照射前分别用10%5-ALA外敷肿瘤部位2h、Ce6腹腔内给药(7.5mg/kg)1h或5-ALA外敷联合Ce6腹腔内注射进行处理。1周后处死裸鼠,观察各组织器官肿瘤转移情况,剥离肿瘤组织并称量,将各裸鼠的瘤体、肝、脾、肺、肾做组织病理学检查。结果各治疗组肿瘤重量与对照组之间均有显著性差异(P<0.01),而各治疗组之间组间比较无显著性差异(P>0.05)。组织病理学检查显示PDT后1周肿瘤部位出现干燥、结痂、组织坏死,镜下见细胞坏死、崩解、皮下血栓、细胞轮廓模糊。各治疗组中发现有肿瘤转移情况。结论动物实验表明应用Ce6和5-ALA产生的PDT效应能有效杀伤恶性黑素瘤,但不能抑制恶性黑素瘤的转移。

烟曲霉Af293 chsD基因缺失突变株的构建

目的构建Af293 chs D缺失突变株,并对chs D的功能进行初步的研究。方法 PCR扩增chs D两侧部分序列并连接至p PK2质粒的潮霉素表达盒两端,从而构建重组质粒p PK2/chs D-(L+R)。酶切p PK2/chs D-(L+R)并胶回收含chs D左侧、hph表达盒及chs D右侧的片段,连接至p DHt/SK而构建二元质粒p DHt/chs D::hph。经ATMT方法将p DHt/chs D::hph转化至Af293,经潮霉素抗性筛选从而获得烟曲霉△chs D突变株,并测量Af293,△chs D突变株生长直径及扫描电镜下观察分生孢子形态。结果经PCR初步鉴定,筛选出的突变株中,其染色体中的chs D序列已被hph置换,初步形态研究表明,△chs D突变株的生长速度显著低于Af293野生型,且分生孢子凹陷呈干瘪状。结论成功获得Af293△chs D突变株。chs D基因功能初步研究表明,chs D可能与烟曲霉的生长相关。

红蓝光联合中药面膜治疗寻常型痤疮疗效观察

目的观察红蓝光联合中药面膜治疗Ⅰ～Ⅲ级寻常型痤疮的临床疗效及不良反应。方法入选的119例Ⅰ～Ⅲ级寻常型痤疮患者按照计算机产生的随机号分为治疗组60例和对照组59例。治疗组清除毛囊污垢、角栓、脓头后进行红蓝光照射,每周2次,交替治疗共8次,每次照射后用自制中药面膜敷脸,每次25分钟。对照组清洁毛囊皮脂、脓头及角栓后单用红蓝光照射治疗,方法与治疗组相同。结果治疗组总有效率76.33%,对照组总有效率45.76%,差异有统计学意义(χ2=4.025,P<0.05)。结论红蓝光联合中药面膜治疗寻常痤疮疗效优于单纯红蓝光照射。

低剂量长波紫外线反复照射诱导培养成纤维细胞表达基质金属蛋白酶实验研究

目的:探讨长波紫外线引起皮肤光老化、皱纹形成的机制。方法:以7.2J/cm2长波紫外线单次或多次照射培养真皮成纤维细胞,光镜、电镜观察细胞的形态学变化,原位杂交和免疫组化的方法检测基质金属蛋白酶中的间质胶原酶(MMP-1)、间质溶解素-1(MMP-3)mRNA及其共同的组织抑制因子(TIMP-1)蛋白在各实验组成纤维细胞的表达并进行定量分析。结果:在长波紫外线累积剂量达57.6J/cm2后,培养真皮成纤维细胞开始出现具有细胞衰老特征性的形态改变,但仅经两次7.2J/cm2 UVA照射,培养成纤维细胞就出现MMP-1、MMP-3 mRNA的表达并随累积照射剂量增加逐渐增强,但各照射组的TIMP-1蛋白均仅在照射后48h内呈一过性轻度表达。结论:皮肤光老化皱纹形成可能与长波紫外线照射引起真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达失衡密切相关。

成人头颈部白癜风患者生活质量调查

目的:探讨影响成人头颈部白癜风患者生活质量的相关因素并进行量化分析,为临床选择合理的治疗方案提供线索。方法:以头面部脂溢性皮炎患者作为对照组,采用简体中文版皮肤病生活质量指数(dermatology life quality index,DLQI)和流调中心抑郁量表(center for epidemiologic studies depression scale,CES-D),对确诊为头颈部白癜风和头面部脂溢性皮炎的患者进行面对面调查评估。结果:成人头颈部白癜风患者DLQI和CES-D分值显著高于对照组(P<0.05),且DLQI分值与CES-D之间存在正相关(r=0.48,P<0.05)。结论:头颈部白癜风可以严重影响患者的生活质量,应及早进行治疗和心理疏导。

红景天治疗高原性脱发的临床研究

目的:观察红景天胶囊在治疗高原性脱发中的临床疗效及副作用。方法:将245例临床确诊为高原性脱发的患者随机分为3组,用双盲法做治疗,实验组用红景天胶囊,对照组用复方甘草酸苷片,安慰剂组用安慰剂。用药1个月后观察3组脱发区毛发的生长情况,每月1次,共3次。结果:实验组在脱发区毛发的改善程度较对照组有显著性差异(P<0.05),且未见不良反应的发生,但安慰剂组无一人脱发区毛发见改善。结论:在高原性脱发的治疗中,红景天胶囊是一种临床疗效确切、且安全的理想药物。

308nm准分子激光治疗对成人头颈部白癜风患者生活质量的影响

目的:评价308 nm准分子激光治疗对成人头颈部白癜风患者生活质量的影响。方法:采用自身前后对照问卷调查的方法,运用中文版皮肤病生活质量指数(dermatology life quality index,DLQI)和流调中心抑郁量表(center for epidemiologic studies depression scale,CES-D),分别于治疗前、治疗10周后对101例成人头颈部白癜风患者进行凋查评估。结果:疗前101例DLQI分值与CES-D之间存在显著正相关(r=0.48,P<0.05)。经308 nm准分子激光治疗后,患者的白斑面积明显缩小,DLQI和CES-D评分也较疗前显著降低,均与复色率间存在显著负相关(r分别为-0.39,-0.53,P值均<0.05),且疗后DLQT分值与疗后的CES-D评分之间仍呈正相关(r=0.27,P<0.05)。结论:头颈部白癜风可以严重影响患者的生活质量,而308 nm准分子激光治疗在改善皮损的同时能有效提高患者的生活质量,减轻患者的心理负担。