XIAP在TRAIL抗性细胞HCT116 bax^(-/-)中的作用机制研究

为了探索结直肠癌细胞HCT116抗TRAIL诱导凋亡的分子机制,本课题以其抗性细胞HCT116 bax^(-/-)为实验对象进行了研究.通过利用目前最热的基因定点编辑技术Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9系统将HCT116bax^(-/-)的XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein)基因彻底敲除后,用TRAIL处理,发现其恢复了对TRAIL的敏感,形态学发生了明显凋亡,而且western blot检测显示PARP蛋白发生了完全剪切.由此证明敲除XIAP基因能克服HCT116 bax^(-/-)对TRAIL的抗性.这些发现对肿瘤细胞抗TRAIL的分子机理研究以及肿瘤的个性化治疗有非常重要的意义.

基于TRAIL受体热稳定的亲和性定量检测

目的基于肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)受体的热稳定性建立其在肿瘤中定量检测的新途径。方法检测胰腺癌细胞AsPC-1和Capan-2內源碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)的活性和变性温度。利用AP标记的TRAIL(AP-TRAIL)分别孵育转膜后的死亡受体5(death receptor 5,DR5)融合蛋白(DR5-AP)和经100℃沸水蒸煮去除内源AP活性的胰腺癌细胞系AsPC-1和Capan-2,再与AP的底物Reagent S和Reagent A进行颜色反应,进行细胞受体定量检测和细胞原位受体结合试验。结果胰腺癌细胞系AsPC-1和Capan-2的内源AP在65℃水浴下不能完全失活,阻碍了对TRAIL受体的检测,在沸水蒸煮后其AP活性显著下降,而DR5-AP在沸水中具有热稳定性。AP-TRAIL能够识别并结合高温蒸煮后的胰腺癌细胞AsPC-1和Capan-2表面的受体,AP-TRAIL孵育的读数为2.210±0.393和2.027±0.019。结论 TRAIL受体具有热稳定的性质,它的发现能够为更好的肿瘤诊断、预测及个性化治疗提供新方法。