大麻素受体2激动剂AM1241对TGF-β1诱导的HSC-T6增殖、活化及凋亡的影响

目的探究大麻素受体2激动剂AM1241对转化生长因子(TGF)-β1诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、活化与凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养HSC-T6,采用CCK-8法检测AM1241对空白对照组(空白培养基)、阴性对照组(未加药品)、TGF-β1组(5μg/L TGF-β1)及20、40、80、160μmol/L AM1241组(5μg/L TGF-β1+20、40、80、160μmol/L AM1241)HSC-T6增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC50)。采用流式细胞术检测阴性对照组、TGF-β1组、30μmol/L AM1241组、60μmol/L AM1241组HSC-T6凋亡情况;采用Western blot检测阴性对照组、TGF-β1组、27μmol/L AM1241组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3、JNK及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达水平。结果与TGF-β1组比较,AM1241可抑制HSC-T6增殖能力,且呈剂量依赖性(P<0.05)。AM1241的IC50为27μmol/L。30、60μmol/L AM1241组HSC-T6凋亡率较TGF-β1组明显上升,且60μmol/L AM1241组高于30μmol/L AM1241组(P<0.05)。27μmol/L AM1241组α-SMA和bFGF蛋白表达水平较TGF-β1组降低,Bax、cleaved caspase-3、p-JNK蛋白表达水平较TGF-β1组升高(P<0.05)。结论大麻素受体2激动剂AM1241能抑制TGF-β1诱导的HSC-T6的增殖与活化,并促进其凋亡,其作用机制可能与JNK通路有关。

大麻素受体2缺失促进伴刀豆球蛋白A所致急性肝损伤小鼠肝巨噬细胞的增殖与活化

目的探讨大麻素受体2(CB2)缺失对伴刀豆球蛋白A(ConA)所致急性肝损伤小鼠肝巨噬细胞的影响。方法 20只8周龄野生型(WT)C57BL/6J雄性小鼠分为对照组、模型组; 20只CB2基因敲除(CB2^(-/-))C57BL/6J雄性小鼠随机分为CB2^(-/-)对照组、 CB2^(-/-)模型组。WT和CB2^(-/-)小鼠模型组尾静脉注射ConA(20 mg/kg)复制小鼠急性肝损伤模型,对照组注射等量PBS。造模9 h后,留取血清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT), HE染色观察各组肝损伤情况, Western blot法分别检测肝巨噬细胞相关CD68、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平,免疫组织化学染色法检测肝组织F4/80的表达。结果与两组对照组相比,两组模型组小鼠肝脏损伤程度严重,血清ALT明显增高,肝组织F4/80阳性表达及CD68、 TNF-α蛋白水平均明显增强;与WT模型组比较, CB2^(-/-)模型组小鼠肝损伤程度和损伤面积增加,血清ALT有所增高,肝组织F4/80阳性表达以及CD68和TNF-α蛋白水平均有所升高。结论 CB2基因缺失促进ConA所致急性肝损伤小鼠肝脏中巨噬细胞的增殖与活化。

林场年度采伐最佳规划决策的研究

本文根据线性规划原理,以党川林场基础数据为例,利用微机求出最佳年采伐量,在此基础上提出多种方案,并对其优缺点进行了分析比较。此法迅速简便,凡具基础数据的林场,可参考此法进行分析和决策。

大麻素受体-2激动剂AM1241对急性肝损伤小鼠肝组织炎性体NLRP3影响

目的探讨大麻素CB2受体激动剂AM1241对刀豆蛋白A(ConA)所致急性小鼠肝损伤影响及机制。方法随机将40只8周龄C57BL/6J雄性小鼠分为对照组、模型组、激动剂(AM1241)3、12mg/kg组(于造模前1h分别腹腔注射AM12413、12mg/kg),除对照组外,其余组小鼠尾静脉注射ConA20mg/kg复制小鼠急性肝损伤模型,对照组采用相同溶剂和方法。造模8h后留取血清检测丙氨酸转氨酶(ALT),Westernblot法分别检测炎性体3相关核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLRs)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)蛋白的表达量,利用试剂盒检测肝组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果与对照组[(28.5±7.4)U/L]比较,模型组小鼠血清ALT水平[(6132.5±1300.8)U/L]明显升高(P<0.05),肝组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达均明显增强(P<0.05);与模型组比较,AMl2413、12mg/kg组小鼠血清ALT水平[分别为(2696.5±956.3)、(534.6±128.6)U/L]明显降低(P<0.05),肝组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达均有所降低(P<0.05);与对照组比较,AMl241组小鼠肝组织中IL-1β含量也明显降低(P<0.05)。结论CB2受体激动剂AMl241对ConA所致急性小鼠肝损伤有一定的拮抗作用,其机制可能与AM1241抑制小鼠肝组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达,减少肝组织中炎性因子IL-1β含量有关。

大麻素CB2受体激动剂对HSC-T6抗氧化作用的研究

目的探讨大麻素CB2受体激动剂AM1241对大鼠肝星状细胞系（HSC-T6）的作用及其对抗氧化酶的影响。方法用噻唑蓝法分别检测0、20、50、80μmol／L）AM1241和0、10、20、30、40μmol／LAM630干预24h下HSC-T6的存活率，根据实验所测得的细胞存活率选择最佳的用药浓度。将HSC—T6随机分成对照组、氧化应激组、AM1241干预组、AM1241＋AM630拮抗组共4组。除对照组，其余各组用含100mU／L的葡萄糖氧化酶（GO）的低糖DMEM完全培养液培养12h制备细胞氧化应激模型，然后AM1241干预组用含50μmol／LAM1241的低糖DMEM完全培养液培养12h，AM1241＋AM630拮抗组用大麻素CB2受体拮抗剂AM630（20μmol／L）干预2h后，再用含50μmol／LAM1241的依氏低糖完全培养基培养12h；酶联免疫吸附法检测备组HSC—T6培养液上清液中Ⅲ型胶原（ColⅢ）的含量；分光光度法检测各组HSC—T6中谷胱甘肽（GSH）的含量；Westernblot法分别检测HSC-T6中CB2受体与血红素加氧酶1（HO-1）蛋白的表达量。多组间比较用单因素方差分析。结果AM1241各浓度组明显抑制HSC—T6的增殖且呈现浓度依赖性（P〈0．05），80μmol／L时抑制作用最大，细胞存活率为41．61％±3．13％（P〈0．05）。AM630各浓度组对HSC—T6的增殖无明显抑制作用（P〉0．05）；各组中的HSC—T6可以表达CB2受体，与对照组相比，AM1241干预组CB2的表达量有所增高（P〈0．05）；与对照组相比，氧化应激组ColⅢ的表达量明显升高（P〈0．05），AM1241干预组ColⅢ的表达较氧化应激组明显减低（P〈0．05），而AM1241＋AM630拮抗组ColⅢ的表达与AM1241干预组相比明显增高（P〈0．05），与氧化应激组相比无明显差异；与对照组相比，氧化应激组HO-1、GSH含量有所升高（P〈0．05），AM1241干预组GSH、HO-1含量较氧化应激组相比有所升高，而AM1241＋AM630拮抗组HSC-T6中HO-1、GSH含量较AM1241干预组明显下降（P〈0．05），与氧化应激组差异无统计学意义。结论大麻素CB2受体激动剂AM1241可抑制HSC-T6的增殖与活化，其机制可能与AM1241结合HSC—T6大麻素CB2受体，激活HSC—T6Nrf2转录到细胞核内，启动了抗氧化酶HO-1、GSH蛋白表达量上调，增加HSC-T6的抗氧化作用有关。