电针对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜组织血管内皮生长因子受体2/细胞分裂周期蛋白42信号通路的影响

目的 观察电针对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)大鼠膝关节滑膜组织内血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2, VEGFR2)/细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42, Cdc42)信号通路的影响,探究电针治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的可能机制。方法 采用随机数字表法将40只SPF级SD雄性大鼠分成空白组、模型组、西药组和电针组,每组10只。模型组、西药组、电针组大鼠采用尾根部皮下注射不完全弗氏佐剂(0.1 mL/只)制成AA大鼠模型。造模后第2天即开始干预,电针组进行电针干预,每次20 min,每天干预1次,共21次,西药组给予甲氨蝶呤灌胃给药,每周1次,共3次。观察各组体质量、关节红肿等一般情况;每3 d测量1次大鼠后双侧足跖容积,干预结束后,通过大鼠一般情况、体质量、足跖容积分析各组大鼠足跖肿胀程度,HE观察各组大鼠滑膜组织的病理形态学变化,免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织内VEGFR2、CD34表达变化,Western blot检测大鼠膝关节滑膜组织VEGFR2、Cdc42蛋白表达量。结果 与空白组相比,模型组大鼠第21天足跖容积均明显增大(P<0.01),膝关节滑膜组织出现了显著性病理改变,CD34表达量明显升高(P<0.01),VEGFR2、Cdc42蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,西药组、电针组大鼠足趾容积明显减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGFR2、Cdc42表达量显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论 电针改善RA的作用机制可能与降低VEGFR2、Cdc42的表达从而抑制血管新生有关。

电针与艾灸对佐剂性关节炎大鼠脾脏CD4^(+)T细胞影响的对比研究

目的对比观察电针和艾灸对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠足跖容积测量、关节炎指数评分及分化簇4淋巴细胞(cluster of differentiation-4^(+)T-cell,CD4^(+)T)水平的影响,评价两种干预措施治疗AA的效应机制。方法选取健康雄性大鼠24只,随机分为空白组、模型组、电针组和艾灸组,每组6只。艾灸组予以双侧“足三里”“关元”“阿是穴”悬灸20 min;电针组左侧足三里与关元配穴,右侧足三里与同侧阿是穴配穴,干预20 min。于干预第21天进行足跖容积测量及关节炎指数评分,隔天于无菌操作台进行脾脏取材,采用流式细胞术检测脾脏CD4^(+)T淋巴细胞。结果与空白组相比,模型组的足跖容积、关节炎指数评分、CD4^(+)T淋巴细胞数量均明显增多(P<0.01);与模型组相比,电针组、艾灸组的足跖容积、关节炎指数评分、CD4^(+)T淋巴细胞数量均明显减少(P<0.05或P<0.01);与电针组相比,艾灸组的足跖容积、关节炎指数评分、CD4^(+)T淋巴细胞数量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论电针与艾灸在改善类风湿关节炎症状及免疫方面的作用机制具有类似效应,均可抑制脾CD4^(+)T淋巴细胞的增殖,维持机体免疫稳态,改善病情。

电针对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜VEGF/Vav2/Rac1信号通路的影响

目的观察电针对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、鸟嘌呤核苷酸交换因子2(vav guanine nucleotide exchange factor 2,Vav2)和Ras相关C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达的影响,探究电针干预类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)血管新生的可能机制。方法将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成4组(空白组、模型组、西药组和电针组),每组10只。除空白组,其他3组采用尾根部皮下注射完全弗氏佐剂制成AA大鼠模型。造模后第2天开始干预,电针组进行电针干预,以左侧足三里与关元穴配穴,右侧足三里与同侧阿是穴配穴,每次20 min,每天干预1次,共干预21次;西药组给予甲氨蝶呤灌胃给药,每周1次,共干预3次。观察各组体质量、关节红肿等一般情况,每3天测量1次大鼠后双侧足跖容积。干预结束后,通过大鼠一般情况、体质量、足跖容积分析各组大鼠足跖肿胀程度,HE染色观察AA大鼠膝关节滑膜组织的病理形态学,免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织内CD31表达变化,Western blot法检测大鼠膝关节滑膜组织VEGF、Vav2和Rac1蛋白表达量。结果与空白组相比,模型组大鼠第21天足跖容积均明显增大(P<0.01),膝关节滑膜组织出现显著性病理改变,CD31表达量明显升高(P<0.05),VEGF、Vav2、Rac1蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,西药组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Vav2表达量明显下降(P<0.05),Rac1蛋白表达量显著下降(P<0.01);电针组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Rac1表达量明显下降(P<0.05),Vav2蛋白表达量显著下降(P<0.01)。结论电针改善RA的作用机制可能与抑制VEGF/Vav2/Rac1信号通路,进而抑制血管新生有关。

电针对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中mTOR磷酸化水平的影响

目的观察电针对佐剂性关节炎模型大鼠踝关节滑膜组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)磷酸化的影响,探索电针治疗风湿性关节炎的作用机制。方法将48只SD大鼠按随机法分为4组:空白组、模型对照组、电针组、甲氨蝶呤组,每组12只。除空白组外,其余3组于大鼠右后足跖关节处皮内注射弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant,FCA)(0.1 mL/只)进行造模,空白组则同法注射生理盐水。造模后第3天,电针组予以电针“足三里”“关元”和“阿是穴”,隔日1次,共16次;甲氨蝶呤组予以甲氨蝶呤(0.1μg/kg)灌胃给药,每周1次,共4次。造模后第3、24天测量足跖容积。干预结束后第2天使用ELISA法对各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达量进行检测,Western blot法检测大鼠踝关节滑膜组织p-mTORC1、mTORC1蛋白表达水平。结果相比于空白组,模型对照组大鼠双侧足跖容积、踝关节滑膜组织中p-mTORC1蛋白表达均增多(P<0.05或P<0.01),且血清中TNF-α含量显著增多(P<0.01);相比于模型对照组,电针组、甲氨蝶呤组大鼠双侧足跖容积、踝关节滑膜组织p-mTORC1蛋白表达均降低(P<0.05或P<0.01),且大鼠血清中TNF-α含量显著降低(P<0.01)。结论电针可能通过抑制mTORC1蛋白磷酸化,诱导细胞自噬,缓解炎症反应。

T10脊髓节段损伤后神经源性膀胱中逼尿肌蛋白组学的生物信息分析

目的:利用生物信息分析筛查骶上脊髓损伤后神经源性膀胱中逼尿肌的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)和关键信号通路。方法:采用Hassan Shaker脊髓横断法制作骶上脊髓损伤模型,利用TMT定量标记技术检测逼尿肌中表达的蛋白质,将差异倍数(fold change,FC)>1.2或<1/1.2,P<0.05,独立肽段(unique peptide)≥2的蛋白质定义为DEPs,使用Metascape对DEPs进行KEGG通路富集分析。利用STRING及Cytoscape软件构建PPI网络,使用Cyto Hubba插件结合蛋白质的degree值筛选前10位的DEPs。结果:模型组较空白组大鼠漏尿点压力、膀胱最大容量和逼尿肌收缩频率明显升高(P<0.01);HE染色显示模型组逼尿肌移行上皮增厚,肌纤维排列层次欠清晰。在逼尿肌中总共筛选出了244个DEPs,其中上调128个,下调116个;KEGG中显著富集了磷酸戊糖途径、肌动蛋白细胞骨架调节和多巴胺能突触等15条信号通路;通过Cyto Hubba筛选出前10位的DEPs:6-磷酸葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase 6-phosphate,G6pd)、突触素(synaptophysin,Syp)、微管相关蛋白(microtubule-associated protein,Mapt)等。结论:糖代谢、细胞骨架信号系统、多巴胺能突触等方面可成为骶上脊髓损伤后逼尿肌无抑制性收缩的潜在干预靶点。

T10脊髓损伤后T10~L2脊髓组织中差异表达蛋白的生物信息学分析

目的利用TMT标记定量蛋白质组学技术筛选出T10脊髓损伤后T10~L2脊髓组织的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)并对其进行生物信息学分析,以期挖掘出T10脊髓损伤后膀胱颈功能障碍(bladder neck dysfunction,BND)的潜在治疗靶点。方法40只大鼠采用随机数字表法分为假手术组(12只)和造模组(28)只,造模组28只大鼠采用Hassan Shaker脊髓横断法制备T10脊髓损伤模型,从符合要求的模型大鼠中随机抽取12只作为模型组。所有大鼠行尿流动力学检测和HE染色,采用TMT检测出T10~L2脊髓组织中表达的蛋白质,将差异倍数(fold change,FC)>1.2或<1/1.2、P<0.05、unique peptide≥2的蛋白质定义为DEPs,使用KOBAS 3.0对DEPs进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。利用STRING及Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,利用cytoHubba插件及DEPs的度(Degree)值筛选出排名前35位的关键DEPs,并通过GluGO插件对35个关键DEPs所参与的生物过程进行分析。结果与假手术组相比,模型组大鼠漏尿点压力和最大膀胱容量明显增大(P<0.01);HE染色结果显示,模型组膀胱颈组织中出现炎细胞浸润,平滑肌壁增厚;模型组T10~L2脊髓组织出现神经元崩解,坏死后空洞形成,神经胶质细胞增生。TMT结果显示,在T10~L2脊髓组织中共筛选出了151个DEPs,其中84个蛋白上调、67个蛋白下调;KEGG分析发现151个DEPs,主要参与趋化因子信号通路、NOD-样受体信号通路、细胞坏死、细胞凋亡、多巴胺能神经突触和谷氨酸能突触等16条信号通路。35个关键DEPs主要参与了巨噬细胞活化、神经胶质细胞的激活、小胶质细胞的激活和神经炎症反应等生物过程。结论T10脊髓损伤后,T10~L2脊髓组织中C1qa、Clu、Snca、Pycard、Glul、Capn1、Ctsz和Ctsd可能是降低脊髓继发性损伤风险的潜在治疗靶点;T10~L2脊髓组织中多巴胺能突触和谷氨酸能突触信号途径可能成为治疗T10脊髓损伤后BND的新方向。

电针调控G6PD/NADPH信号通路对佐剂性关节炎大鼠脾脏CD4^(+)T淋巴细胞增殖的影响

目的探讨电针对佐剂性关节炎模型大鼠脾脏CD4^(+)T淋巴细胞增殖的抑制作用及其对G6PD/NADPH信号通路的影响。方法将27只SD雄性大鼠随机分为3组(n=9):空白组、模型组、电针组。模型组、电针组造模向大鼠尾根部皮下注射不完全弗氏佐剂建立AA大鼠模型。电针组施以电针“足三里”、“关元”、“阿是穴”,治疗每天1次,时间30min,持续3周。利用足跖容积测量仪测定大鼠足趾肿胀度;运用苏木精-伊红染色观察大鼠滑膜组织细胞形态学变化;采用流式细胞术检测脾脏中CD4^(+)T细胞数量;使用Western blot法和ELISA法检测大鼠脾脏和血浆中G6PD和NADPH的表达量。结果相较于空白组,模型组脾脏中CD4^(+)T细胞数量,血浆和脾脏中G6PD、NADPH的表达量显著升高(P<0.01);相较于模型组,电针组脾脏中CD4^(+)T细胞数量,血浆和脾脏中G6PD、NADPH的表达量显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论电针“足三里”、“关元”、“阿是穴”可减少AA大鼠关节滑膜炎症的产生,抑制CD4^(+)T增殖,其机制可能与电针抑制磷酸戊糖途径关键酶G6PD和其产物的NADPH的表达相关。