通过5'-RACE获得德国小蠊变应原Bla g 8基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,建立系统进化树,为进一步研究奠定基础。通过5'-RACE技术,PCR扩增获取编码德国小蠊变应原Bla g 8蛋白的全长c...通过5'-RACE获得德国小蠊变应原Bla g 8基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,建立系统进化树,为进一步研究奠定基础。通过5'-RACE技术,PCR扩增获取编码德国小蠊变应原Bla g 8蛋白的全长cDNA序列;采用生物信息学方法分析预测Bla g 8蛋白的信号肽、疏水性、跨膜区、二级结构、三级结构;建立系统进化树;构建原核表达载体pET32a-B8,IPTG诱导重组蛋白表达,并用His-tag抗体Western blotting验证。结果显示,获得编码德国小蠊变应原Bla g 8的全长cDNA序列,其完整阅读框含618个碱基,编码205个氨基酸。序列分析显示该蛋白,肌球蛋白轻链,具有EF手蛋白保守功能域。IPTG诱导获得重组蛋白。获得德国小蠊Bla g 8的完整cDNA序列,成功构建重组原核表达质粒pET32a-B8,并表达出融合蛋白。展开更多
目的：通过生物信息学方法预测德国小蠊致敏原蛋白Bla g 8的三维结构和抗原表位,为蟑螂引起人类变态反应性疾病的诊断和治疗提供线索.方法：在美国国立生物信息中心（NCBI）上获取Bla g 8致敏原蛋白序列,通过序列比对（BLAST）得到相似...目的：通过生物信息学方法预测德国小蠊致敏原蛋白Bla g 8的三维结构和抗原表位,为蟑螂引起人类变态反应性疾病的诊断和治疗提供线索.方法：在美国国立生物信息中心（NCBI）上获取Bla g 8致敏原蛋白序列,通过序列比对（BLAST）得到相似序列,应用MEGA6.0构建同源进化树;联合应用DNAStar多种方法预测其抗原表位,使用Modeller 9.12同源建模后经Gromacs能量优化获取稳定的致敏原蛋白.结果：德国小蠊Bla g 8与美洲大蠊肌球蛋白轻链在进化上具有较近的亲缘关系;Bla g 8为含有2个EF手钙结合蛋白位点的α结构疏水性蛋白,主要抗原表位集中于1～24,27 ～ 50,55 ～ 65,69 ～91,92 ～110,121～132,138 ～ 153,159 ～ 180,191 ～208区域;预测并经能量优化后得到稳定的三维结构.结论：通过预测Bla g 8结构及抗原表位,为筛选低致敏原衍生物提供了分子基础.展开更多
文摘通过5'-RACE获得德国小蠊变应原Bla g 8基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,建立系统进化树,为进一步研究奠定基础。通过5'-RACE技术,PCR扩增获取编码德国小蠊变应原Bla g 8蛋白的全长cDNA序列;采用生物信息学方法分析预测Bla g 8蛋白的信号肽、疏水性、跨膜区、二级结构、三级结构;建立系统进化树;构建原核表达载体pET32a-B8,IPTG诱导重组蛋白表达,并用His-tag抗体Western blotting验证。结果显示,获得编码德国小蠊变应原Bla g 8的全长cDNA序列,其完整阅读框含618个碱基,编码205个氨基酸。序列分析显示该蛋白,肌球蛋白轻链,具有EF手蛋白保守功能域。IPTG诱导获得重组蛋白。获得德国小蠊Bla g 8的完整cDNA序列,成功构建重组原核表达质粒pET32a-B8,并表达出融合蛋白。
文摘目的：通过生物信息学方法预测德国小蠊致敏原蛋白Bla g 8的三维结构和抗原表位,为蟑螂引起人类变态反应性疾病的诊断和治疗提供线索.方法：在美国国立生物信息中心（NCBI）上获取Bla g 8致敏原蛋白序列,通过序列比对（BLAST）得到相似序列,应用MEGA6.0构建同源进化树;联合应用DNAStar多种方法预测其抗原表位,使用Modeller 9.12同源建模后经Gromacs能量优化获取稳定的致敏原蛋白.结果：德国小蠊Bla g 8与美洲大蠊肌球蛋白轻链在进化上具有较近的亲缘关系;Bla g 8为含有2个EF手钙结合蛋白位点的α结构疏水性蛋白,主要抗原表位集中于1～24,27 ～ 50,55 ～ 65,69 ～91,92 ～110,121～132,138 ～ 153,159 ～ 180,191 ～208区域;预测并经能量优化后得到稳定的三维结构.结论：通过预测Bla g 8结构及抗原表位,为筛选低致敏原衍生物提供了分子基础.
