一步离子交换层析制备人血管性血友病因子/人凝血因子Ⅷ蛋白液

目的研究通过一步离子交换层析法,制备vWF∶Rco/FⅧ∶C≈1的人血管性血友病因子/人凝血因子Ⅷ蛋白液。方法选用Toyopearl? DEAE-650填料,取同一批次的人血管性血友病因子(vWF)上柱前液,研究不同上样量、不同洗脱液盐浓度对洗脱液中人血管性血友病因子抗原(vWF∶Ag)、人凝血因子Ⅷ效价(FⅧ∶C)、人血管性血友病因子效价(vWF∶Rco)的影响。结果从得率考虑,上样量最佳为4-5倍柱体积;洗脱液盐浓度0.42 mol/L时,vWF∶Rco/FⅧ∶C≈1∶1,vWF回收率≈60%,为最佳配方。结论在本试验层析条件前提下,调节洗脱液中盐浓度0.42 mol/L,可获得vWF∶Rco/FⅧ∶C≈1∶1的vWF/FⅧ蛋白液。

C1酯酶抑制剂分离纯化工艺研究

目的 研究以人凝血酶原复合物(PCC)制备过程废弃洗涤液为原料分离纯化C1酯酶抑制剂(C1-esterase inhibitor, C1-INH)的工艺。方法 通过聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG)4000沉淀及阳离子层析两步法分离纯化C1-INH。调整原料pH及PEG4000浓度考察PEG4000沉淀法最佳条件;PEG沉淀后离心,上清液处理后作为阳离子交换层析的上样液,使用Fractogel EMD SE HiCap(M)凝胶及CM Sepharose FF凝胶进行离子交换层析,通过比较C1-INH活性收率及比活性选择最适合的凝胶及分离条件。结果 在pH6.1的条件下,PEG4000质量分数14%时,搅拌10min后离心,C1酯酶抑制剂回收率≈70%,铜蓝蛋白(ceruloplasmin, CER)去除率>95%;使用Fractogel EMD SE HiCap(M)凝胶进行阳离子交换层析,洗脱液盐浓度为0.25M氯化钠时,C1酯酶抑制剂活性收率>80%,比活性>5IU/mg。结论 以PCC制备过程中废弃洗涤液为原料,经过PEG沉淀和Fractogel EMD SE HiCap(M)离子交换层析纯化制备能够得到高比活性的C1酯酶抑制剂。

优化辛酸沉淀工艺参数后结合两步层析法分离纯化IgG效果

目的优化辛酸沉淀工艺参数,并结合两步层析纯化,评价10%静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中杂蛋白去除效果。方法对溶解倍数、反应液终pH值、辛酸钠浓度3个因素进行优化,设计3因素3水平的正交试验方案,优选辛酸沉淀工艺参数;取100 g组分Ⅱ+Ⅲ沉淀,按最佳工艺参数进行辛酸沉淀,过滤收集上清经Q、QXP两步层析纯化后,进行IgG、IgA、IgM、Alb含量及纯度检测,评价杂蛋白去除效果。结果辛酸沉淀法最佳工艺参数为溶解倍数13倍,反应液终pH值5.1,反应液辛酸钠终浓度20 mmol/L;按最佳工艺参数获得的辛酸沉淀上清经两步层析纯化后纯度达99.99%,杂蛋白含量降至1 mg/L以下。结论辛酸沉淀法可最大限度提升IgG收率,给合后续两步层析纯化,可获得高纯度IgG。该工艺可用于临床安全的人免疫球蛋白产品开发。