硒代蛋氨酸羟基类似物对H_(2)O_(2)诱导的鸡肝癌细胞氧化损伤的保护作用

旨在探索硒代蛋氨酸羟基类似物(SeOH)缓解鸡肝癌细胞(LMH)氧化损伤的作用及潜在机制。建立H_(2)O_(2)氧化应激模型,通过检测细胞活力和细胞氧化/抗氧化指标的变化以及核转录因子E2相关因子2(Nrf_(2))通路和内质网应激关键分子的表达情况,评价不同浓度SeOH(16、32和64μg/mL)的抗氧化应激和内质网应激作用。结果显示:120μmol/L的H_(2)O_(2)刺激细胞24 h时,细胞活力显著下降(P<0.001),活性氧(ROS)的荧光强度升高。不同剂量的SeOH(16、32和64μg/mL)均可显著提高H_(2)O_(2)处理后的LMH细胞活力(P<0.01);32和64μg/mL的SeOH均可极显著提高LMH细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.01),显著降低丙二醛(MDA)含量(P<0.001)以及ROS的荧光强度。进一步研究显示32和64μg/mL的SeOH极显著上调Nrf_(2)蛋白(P<0.01)并显著上调谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白的表达水平(P<0.05),极显著下调Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)蛋白的表达水平(P<0.001),极显著增加Nrf_(2)的入核率(P<0.001);64μg/mL的SeOH可显著降低葡萄糖调节蛋白78(GRP78)(P<0.05)、蛋白激酶RNA样内质网激酶(PERK)(P<0.01)和转录激活因子4(ATF4)(P<0.001)的表达水平。提示:SeOH能通过激活Nrf_(2)通路并且抑制内质网应激缓解H_(2)O_(2)诱导的LMH细胞氧化应激,为畜禽养殖中SeOH作为抗氧化剂的应用提供理论基础。

大蒜辣素缓解CCl_(4)致小鼠急性肝损伤的作用研究

[目的]本研究旨在探讨大蒜辣素对四氯化碳(CCl_(4))诱导的小鼠急性肝损伤的缓解作用及其潜在作用机制。[方法]将42只小鼠随机分为7组,分别为对照组、大蒜辣素处理组、CCl_(4)处理组、复方甘草酸苷治疗组(80 mg·kg^(-1))及3个大蒜辣素(40、20和10 mg·kg^(-1))治疗组。小鼠腹腔注射1%CCl_(4)(10 mL·kg^(-1))8 h后灌胃给予不同剂量的大蒜辣素和复方甘草酸苷,于CCl_(4)处理48 h后采集小鼠血液和肝脏组织,测定血清生化指标、血清中炎性因子以及肝组织MDA及CAT含量,同时采用Western blot方法检测大蒜辣素对细胞凋亡相关蛋白表达的影响。[结果]单独使用大蒜辣素对小鼠肝脏无损伤作用(P>0.05)。40、20和10 mg·kg^(-1)大蒜辣素均可显著降低CCl_(4)处理小鼠的血清AST、ALT及ALP活性水平(P<0.05),显著提高肝脏CAT含量和降低MDA含量(P<0.05)。40 mg·kg^(-1)大蒜辣素还可显著降低CCl_(4)处理小鼠血清炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平(P<0.05)以及肝组织Bax、Cleaved-Caspase 3和Cleaved-Caspase 9蛋白表达水平(P<0.05),显著提高肝组织NQO_(1)和Nrf_(2)蛋白表达水平(P<0.05)。在降低小鼠血清生化指标、炎性因子和MDA水平方面,高、中剂量的大蒜辣素优于复方甘草酸苷(P<0.05)。[结论]大蒜辣素可通过抗氧化、抗炎作用以及减少肝细胞凋亡对CCl 4引起的急性肝损伤起到缓解作用,有望成为新型保肝药物在兽医临床中应用。

奶牛乳液中伊丽莎白菌按蚊亚种高度同源株的分离与鉴定

[目的]本文旨在从患乳房炎的奶牛乳液中分离鉴定病原菌。[方法]收集患乳房炎奶牛的乳液病料后分别接种绵羊血液平板和麦康凯鉴别培养基,置于37℃培养箱过夜。观察获得的单菌落形态并接种含有血清的液体培养基富集培养,然后煮沸法提取细菌纯培养物的基因组,以该基因组为模板通过PCR扩增未知细菌的核糖体RNA序列并对产物进行测序分析。以不同培养时间测定菌液D_(600)并绘制细菌的生长曲线。用倍比稀释法在96孔板上测定细菌对不同药物的最小抑菌浓度。[结果]从病料中分离到一株革兰阴性菌,命名为JS20170427COW。该菌无运动性,在绵羊血平板上菌落圆形、光滑、淡黄色、边界清晰。生化试验和16S rRNA序列分析结果显示,其与伊丽莎白按蚊亚种人源株KT768343.1同源性达95%,称之为伊丽莎白按蚊亚种高度同源株。药敏试验显示,该菌对杆菌肽、溶菌素、硫酸黏菌素、乳酸菌素以及多肽类药物等耐药。[结论]从病牛乳液中分离到一株与伊丽莎白菌按蚊亚种同源性高达95%的细菌,其具有公共卫生的潜在意义。

新疆与宁夏部分地区沙门菌的流行特征及耐药性调查

对2020年在宁夏和新疆部分动物养殖场和屠宰场分离的沙门菌(Salmonella)进行了相关抗菌药物的耐药性调查,以了解沙门菌的流行特点以及耐药性情况,一方面为国家动物源细菌耐药网提供数据,另一方面为相关养殖场临床抗菌药物的合理使用提供科学依据。首先采用沙门菌选择性培养基进行菌株的分离、纯化及鉴定,采用微量肉汤稀释法检测16种抗菌药物对分离菌株的最小抑菌浓度(MICs),采用玻片凝集法对分离菌株进行血清型鉴定。结果显示:试验共分离到60株沙门菌,其血清型有16种,主要包括鼠伤寒沙门菌(S.Typhimurium)、里森沙门菌(S.Rissen)、汤普森沙门菌(S.Thompson)、肠炎沙门菌(S.Entertidis)、德尔卑沙门菌(S.Derby)、明斯特沙门菌(S.Muenster),检出率分别为26.67%(16株)、15.00%(9株)、11.67%(7株)、10.00%(6株)、8.33%(5株)、6.67%(4株),其他9种血清型的检出率为1%~5%。分离菌株对磺胺异噁唑、四环素和氨苄西林耐药程度较高,耐药率分别达75.00%、70.00%和66.67%;对奥格门丁和恩诺沙星相对较为敏感,耐药率均为1.67%;对其余9种药物的耐药率在13.33%~56.67%范围内,本次未分离到美罗培南和安普霉素耐药菌株。多数菌株表现为多药耐药。研究结果表明宁夏和新疆部分地区动物源性沙门菌对部分抗菌药物的耐药情况较为严重,养殖场应基于药敏结果合理和谨慎使用抗菌药物,并需加强对畜禽生产全链条中细菌耐药性的常规监测。

屠宰场鸡源碳青霉烯耐药大肠埃希菌的耐药特征分析

[目的]本文旨在分析鸡源碳青霉烯耐药大肠埃希菌的流行及其相关耐药基因的水平转移情况,了解鸡源碳青霉烯耐药大肠埃希菌的耐药特征,为临床抗菌药物的合理使用提供参考。[方法]从江苏省某屠宰场鸡盲肠样品中分离美罗培南耐药大肠埃希菌,用微量肉汤稀释法测定分离菌株对8种抗生素的最小抑菌浓度(MIC),采用普通PCR法检测碳青霉烯类耐药基因bla_(NDM)、bla_(KPC)、bla_(VIM)、bla_(OXA)、bla_(IMPM),再通过接合试验分析bla_(NDM)基因在菌株间的转移情况,最后采用多位点序列分型(MLST)方法对bla_(NDM)阳性菌株进行序列分型(ST),使用MEGA 6.06软件构建系统发育树并进行分析。[结果]分离的37株碳青霉烯耐药大肠埃希菌全部表现为多重耐药,其中,所有菌株对阿莫西林、氨苄西林、美罗培南和头孢噻呋耐药,对恩诺沙星、环丙沙星、庆大霉素的耐药也较严重,但对替加环素均敏感。PCR检测结果显示,37株分离菌株全部携带bla_(NDM),测序比对发现均为bla_(NDM-5)亚型。接合转移试验表明bla_(NDM-5)位于可接合型质粒中,可在不同菌株间进行水平转移,体外竞争试验显示接合子存在一定的适应性代价,但其与受体菌在相同生长环境下仍具有相似的体外相对竞争力。携带bla_(NDM)的质粒在无抗菌药物压力下仍能在受体菌中稳定存在。MLST结果显示37株大肠埃希菌可分为12个ST型,其中ST101为主要流行株,占40.5%(15/37),其次为ST156型,占13.5%(5/37),其余ST型占比都低于10%。系统发育树分析表明,在进化上,ST101与ST7593可能为同一起源,ST354、ST362、ST2895为同一起源,其他几种ST型无近缘关系。[结论]bla_(NDM)基因是导致江苏省鸡源大肠埃希菌对碳青霉烯类药物耐药的主要原因,且携带NDM的质粒易通过接合作用在菌株间水平转移,需要进一步加强对碳青霉烯耐药大肠埃希菌的监测。