用根癌农杆菌介导EPSPS基因遗传转化拟南芥的研究

研究通过花序浸染法,将EPSPS基因导入拟南芥(Arabidopsis thaliana)Col(Columbia)生态型植株中,通过卡那霉素对种子的抗性筛选及常规PCR对再生植株进行阳性鉴定。初步证明,EPSPS基因已经成功转化拟南芥,经过反复筛选,获得转基因纯系植株。

PRK基因原核表达质粒的构建

以拟南芥cDNA为模板,扩增出PRK基因,构建重组质粒pET-28a(+)-PRK转化大肠杆菌DH5α。经PCR鉴定和酶切鉴定筛选出阳性克隆,将阳性克隆的质粒转化到大肠杆菌表达载体BL21中,构建PRK基因原核表达载体。测序结果表明pET-28a(+)-PRK载体构建成功。

甘蓝型油菜幼苗对NaCl胁迫的抗氧化应答

本文主要研究了甘蓝型油菜幼苗对NaCl胁迫的抗氧化应答情况。结果表明,在200mmol/LNaCl胁迫下,随着胁迫时间的延长,油菜幼苗叶片的相对含水量逐渐下降,细胞内的电解质渗出物逐渐增多,电导率逐渐升高;POD、SOD和CAT三种抗氧化酶活性在开始时都逐渐提高,24h后达到最大值,随后逐渐降低。对NaCl胁迫过程中这三种抗氧化酶基因进行实时荧光定量PCR分析,分析结果显示这三种抗氧化酶基因的表达与其酶活性的变化一致。因此,NaCl胁迫诱导了POD、SOD和CAT三种抗氧化物酶基因的过量表达,抗氧化酶活性相应提高,从而在一定程度上提高了植物对NaCl胁迫的耐受能力。

甘蓝型油菜花粉超低温保存及其花粉活力的研究

研究超低温方法保存油菜花粉过程中的预冻和解冻处理方式对油菜花粉的形态、大小及其活力的影响。结果表明:采用0℃(12h)→-4℃(12h)→-20℃(12h)→-80℃(12h)变温预冻处理和用-80℃(1h)→-20℃(1h)→4℃(1h)逐步解冻后对油菜花粉形态大小和活力影响最小。而经过25℃室温解冻法和42℃快速解冻法处理后油菜花粉出现破裂,破裂率分别达到7.6%和9.1%。同时液氮保存油菜花粉的时间长短对花粉的大小及活力影响不大。

^(60)Co γ射线辐照对转基因和非转基因烟草抗氧化酶活性的影响

以转pprI基因烟草植株为材料,研究了60Coγ射线辐照后转pprI基因烟草抗氧化酶活性及其基因转录水平的变化。结果表明,经0、100、200、300、400和500Gy 60Coγ射线辐照后,转基因和非转基因烟草的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)3种抗氧化酶活性及其相应酶基因转录水平都逐渐提高,其中SOD酶活性及其基因转录水平在100Gy辐照后达最大值,而SOD和CAT活性在300Gy辐照后达到最大值,三种酶的活性及其基因转录水平随后都随剂量的增加逐渐降低,但转基因烟草的3种抗氧化酶基因转录水平和酶活性都显著高于非转基因烟草。说明把pprI基因转化到烟草植株体内后,pprI基因能有效地提高烟草在60Coγ射线辐照下SOD、POD和CAT等抗氧化酶基因的转录水平及其活性水平,从而提高了转基因烟草对辐照的耐受能力。

^(60)Co-γ射线辐照对转pprI基因烟草抗氧化酶活性的影响

以转pprI基因烟草植株为材料,并以同步培育的非转基因烟草植株为对照,研究了60Co-γ射线辐照对转pprI基因烟草抗氧化酶活性的影响。结果表明,经500 Gy60Co-γ辐照后,转基因和非转基因烟草的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)3种抗氧酶活性以及可溶性蛋白质含量在开始时(0~12 h)都逐渐提高,其中POD的活性则在6 h后达最大值,而SOD和CAT活性在12 h后达到最大值,随后三者活性都逐渐降低。但在500 Gy60Co-γ辐射后相同的时间内,转基因烟草的3种抗氧化酶活性和可溶性蛋白质含量均比非转基因烟草高,SOD、POD、CAT和可溶性蛋白质含量的峰值分别是非转基因烟草峰值的1.1290、1.9690、1.5840和1.9521倍,表明pprI基因提高了烟草在500 Gy60Co-γ辐照下SOD、POD和CAT等抗氧化酶的活性水平,从而提高了转基因烟草对辐射的耐受能力。

NaCl胁迫对转IrrE基因烟草抗氧化酶活性的影响

文章主要研究了转IrrE基因烟草幼苗对NaCl胁迫的耐受性应答情况。结果表明,在200mmol/LNaCl胁迫下,其中野生型烟草随着胁迫时间的延长,POD、SOD、CAT三种抗氧化酶活性和可溶性蛋白的含量逐渐升高,处理24h后达到一个峰值,然后又逐渐降低,叶片的相对含水量一直逐渐降低,而转IrrE基因烟草幼苗三种抗氧化酶活性和可溶性蛋白持续上升,相对含水量先有所降低然后逐渐升高,5个生理指标均高于野生型烟草。因此,IrrE基因作为一种转录因子可能调控了盐胁迫相关基因的表达,从而提高了植物对NaCl胁迫的耐受能力。

棉花遗传转化过程中外植体对卡那霉素敏感性的研究

文章研究了以下胚轴为转化的外植体材料,根癌农杆菌介导的棉花遗传转化过程中,下胚轴、胚性愈伤组织(EC)、体细胞胚胎(胚状体)三种外植体不同的生长阶段,对卡那霉素(Kan)的敏感性差异。结果表明:体细胞胚胎(胚状体)对卡那霉素(Kan)最为敏感,下胚轴次之,胚性愈伤组织(EC)则最不敏感。

GAPC2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

研究采用PCR法以拟南芥cDNA为模板扩增GAPC2基因片段,克隆至原核表达载体PET28a(+)上,经0.25、0.5mM IPTG分别在37℃和20℃诱导后,再使用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的表达水平。结果表明:原核表达载体PET28a(+)-GAPC2构建正确,并且能在大肠杆菌BL21中成功表达,其融合蛋白分子量为37KD。

棉花组织培养过程中外植体所需的激素浓度及配比的研究

本文研究了以下胚轴为外植体材料的棉花组织培养过程中,愈伤组织诱导、胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎(胚状体)的诱导所需要的最佳激素浓度及配比。研究结果表明:以上三个诱导过程所需要的最佳激素浓度及配比分别为IAA、KT(激动素)、2,4-D各0.1mg/l或者ZT(玉米素)0.1mg/l、0.05mg/l IAA+0.1mg/l KT或者0.1mg/l ZT、不加入任何种类的激素或者尽量加入低浓度的激素。

GAPB基因原核表达载体的构建

以拟南芥cDNA为模板,用PCR扩增出GAPB的基因全长,然后将GAPB基因片段连接到PET28a(+)载体上,构建重组质粒并转化大肠杆菌DH5α,经菌落PCR和酶切鉴定筛选出阳性克隆,测序正确后,再将阳性克隆的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。结果表明:成功构建了原核表达载体PET28a(+)-GAPB,为后续的GAPB融合蛋白的表达以及纯化奠定了基础。

转IrrE基因甘蓝型油菜农艺性状的分析

文章主要研究了转IrrE基因T1代甘蓝型油菜在自然条件与Nacl盐胁迫条件下的农艺性状,结果表明:以自然条件下的野生型油菜为对照,自然条件下的转IrrE基因油菜在株高、主花序长度、全株有效角果数差异极显著,而分枝部位高度和分枝个数差异不显著。300mMNaCl高盐胁迫条件下的转IrrE基因油菜,株高、主花序长度、全株有效角果数差异极显著,分枝数差异不显著。

转IrrE基因甘蓝型油菜对NaCl胁迫的耐受性应答

以转IrrE基因甘蓝型油菜为材料,研究了转IrrE基因甘蓝型油菜幼苗对NaCl胁迫的耐受性应答情况.在200 mmol/L NaCl胁迫下,随着胁迫时间的延长,转IrrE基因和野生型油菜的POD、SOD和CAT三种抗氧化酶活性均增加,其中野生型油菜的三种抗氧化酶在24h后达到峰值,随后逐渐下降,而转IrrE基因油菜的三种抗氧化酶活性却持续增加,并在相同的胁迫时间内均高于野生型油菜的酶活性;同时转IrrE基因油菜的脯氨酸和可溶性蛋白质含量均比野生型油菜的高,但其丙二醛(MDA)的含量比野生型油菜的低.结果表明,IrrE基因作为一种转录因子可能广泛参与了油菜幼苗对NaCl胁迫的耐受性应答过程,从而提高了植物对NaCl胁迫的耐受能力.

农杆菌介导的棉花遗传转化过程中诸因素对出愈率的影响

研究了农杆菌介导的棉花遗传转化过程中影响外植体出愈率的一些相关因素.结果表明:卡那霉素(Kan)的浓度以50 mg/L或75 mg/L为最好,农杆菌菌株EHA105的浸染能力较强,7 d苗龄的棉花无菌苗下胚轴为最佳的遗传转化外植体材料,下胚轴外植体经预培养后再经农杆菌菌液浸染更有利于胚性愈伤组织的形成,同时农杆菌菌液浸染时间以3 min为最佳.

利用酵母双杂交系统筛选IrrE相互作用蛋白

本研究通过酵母双杂交技术,构建了IrrE蛋白为诱饵载体,从拟南芥cDNA文库中筛选与IrrE诱饵蛋白相互作用的功能蛋白.研究结果表明,在所获得的阳性克隆中,发现了一个与拟南芥基因Atlg01470所编码的蛋白有较高同源性的蛋白,即LEA14蛋白(晚期胚胎发育富集蛋白),同源性高达98%.推测IrrE转录因子在提高植物耐盐性的过程中起了重要作用.