TEM-1型β-内酰胺酶基因的克隆、表达及酶的纯化

开发专一性β-内酰胺酶抑制剂,对解决细菌耐药性问题具有重要意义。这项研究需要用到纯度较高的β-内酰胺酶。我们将TEM-1型β-内酰胺酶基因克隆到一个高表达载体中,研究了该酶在大肠杆菌中的高表达条件及分离纯化方法,最终获得的酶纯度大于90％。

β-内酰胺酶抑制短肽SIPIS04-01的表达、纯化与抑制作用测定

通过酵母双杂交系统从一个随机DNA片段文库中筛选到一个编码能与β-内酰胺酶结合的短肽SIPIS04-01的DNA序列,将它克隆到pGEX-4T-1的多克隆位点中,得到重组质粒pYG205。当用适量的IPTG诱导后,携带pYG205的E.coliDH5α能表达短肽SIPIS04-01-GST融合蛋白。利用谷胱甘肽Sepharose4B亲和层析介质分离纯化短肽SIPIS04-01-GST融合蛋白,经凝血酶切割并分离纯化后,体外试验表明短肽SIPIS04-01具有抑制β-内酰胺酶的作用。

B36-11 氧对于大肠杆菌ArcA和FNR调控系统和代谢反应的影响Levanon SS等

大肠杆菌具有多种精细的传感机制，以对氧的利用度和其它电子受体的存在作出应答。适应性应答通过一组综合调控子协调，包括单组分的Fnr蛋白和双组分的Arc系统。为了量化代谢中依赖于Arc和Fnr调控的作用，以最近开发的源于λ的重组系统构建了arcA和fnr突变株。在恒化培养的稳定状态下，通过葡萄糖限制培养基和不同氧浓度下的发酵途径研究了大肠杆菌野生型、arcA突变株、fnr突变株和arcA-fnr双突变株的代谢活性。发现ArcA在微氧条件下起显著作用，

B36-12 重组人可溶性Fas配基在大肠杆菌中的表达、纯化、重折叠和表征Sun KH等

Fas配基(FasL)是一种Ⅱ型膜蛋白，通过基质金属蛋白酶切割可获得具生物学活性的可溶性形式(sFasL)。sFasL会诱导耐Fas细胞的凋亡，而这一特殊的生物学活性也许可用于癌症治疗。然而，蛋白的三聚体形式使重组sFasL很难获得。本研究将sFasL DNA融合在硫氧还蛋白基因的氨基端，在羧基端加上His标签，在大肠杆菌中过表达。为了限制后继重折叠过程的自由度，将重组sFasL溶于6mol／L尿素，在变性条件下固定于镍树脂。通过逐步稀释法将固定的重组sFasL与过量的变性sFasL共同温育进行重折叠。

B36-13 利用细胞壁蛋白Pir4作为融合伴侣在酿酒酵母中表达芽孢杆菌BP-7的木聚糖酶Andrés I等

来自芽孢杆菌BP-7的木聚糖酶A是一种具有生物技术应用潜力的酶，以其测试Pir4，一种结合二硫化物的细胞壁蛋白，作为融合伴侣在酿酒酵母的标准株或mnn9糖基化缺陷株中表达重组蛋白的能力。进行5种不同构建，在Pir4基因读码框中插入木聚糖酶xynA基因的编码序列，分别带有或没有Pir4特定区域的缺失。5种构建中有2种可将木聚糖酶融合蛋白定位于细胞壁，还有1种将基因产物分泌于培养基中。

透明颤菌血红蛋白与D-氨基酸氧化酶的融合蛋白提高了生物催化剂在头孢菌素C生物转化过程中的活性和稳定性

将透明颤菌血红蛋白(VHb，1)与纤细红酵母的D-氨基酸氧化酶(DAO，2)融合，构建了一个人工黄素血红蛋白。