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题名新型芳基磺基转移酶在大肠杆菌中的表达及表征
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作者
龚巧琳
杨书尧
寇梦云
宋亚囝
郑迎迎
李金山
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机构
天津科技大学生物工程学院
中国科学院天津工业生物技术研究所
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出处
《天津科技大学学报》
CAS
2024年第4期46-53,共8页
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基金
国家重点研发计划项目(2021YFC2103200)
天津市合成生物技术创新能力提升行动项目(TSBICIP-KJGG-009)。
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文摘
肝素是动物源高度硫酸化、非均一的线性糖胺聚糖。芳基磺基转移酶参与肝素生物合成中磺基供体3′–磷酸腺苷–5′–磷酰硫酸(PAPS)的合成与再生,是实现肝素生理功能的关键酶。目前已报道的芳基磺基转移酶存在种类少、表达量低等问题。本研究采用隐马尔可夫模型挖掘获得10个鸟类来源的磺基转移酶,对新基因进行密码子优化并全合成到表达载体pET-32a上,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21进行诱导表达。通过优化培养基成分、诱导温度、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)浓度以及摇床转速,成功实现S4和S8的异源表达。在TB培养基中、诱导温度为16℃、使用0.4 mmol/L IPTG进行诱导、200 r/min转速条件下,菌株BL21/pET32a-Mbp-S4的S4蛋白表达量为60.6 mg/L。对S4蛋白进行纯化和酶活力表征,S4蛋白的最适反应温度为40℃,最适反应pH为7.0,比活力为3.3 mU/mg。通过超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)检测酶修饰后产物,进一步验证S4蛋白为芳基磺基转移酶。芳基磺基转移酶S4的成功表达为PAPS再生提供了功能元件。
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关键词
磺基转移酶
3′–磷酸腺苷–5′–磷酰硫酸(PAPS)
肝素
大肠杆菌
表达
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Keywords
sulfotransferases
3′-pho-sphoadenosine-5′-phosphosulfate(PAPS)
heparin
Escherichia coli
expression
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分类号
Q71
[生物学—分子生物学]
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题名我国工业生物技术和产业的现状、差距与任务
被引量:5
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作者
韩祺
姜江
汪琪琦
龚巧琳
李金山
张瀚予
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机构
国家发展和改革委员会产业经济与技术经济研究所创新战略研究室
国家发展和改革委员会产业经济与技术经济研究所
中国科学院天津工业生物技术研究所
天津科技大学
清华大学社会学系
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出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第11期4035-4042,共8页
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文摘
工业生物技术是利用生化反应和生物体机能进行物质合成加工与能量转化利用的集成技术,正在支撑建立以可发酵糖、秸秆、二氧化碳等可再生资源为原料的化学品绿色高效制造新路线,有望实现工业制造方式的根本转变,是支撑经济社会可持续发展的重大战略技术,已成为世界各国科技和产业竞争的焦点。本文从工业生物技术深度融入和支撑生物经济发展的态势出发,系统分析了我国工业生物技术和生物产业发展的现状、短板问题,提出了未来建议重点发展的主要方向。
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关键词
工业生物技术
工程生物设计创制
生物制造产业
生物经济
绿色可持续发展
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Keywords
industrial biotechnology
design and creation of engineered organisms
biomanufacturing industry
bioeconomy
green and sustainable development
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分类号
Q819
[生物学—生物工程]
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