DNA疫苗与mRNA疫苗:对抗人类疾病的两把利器

DNA疫苗和mRNA疫苗是核酸疫苗家族的“同胞兄弟”,在作用原理上颇为类似,均需在宿主细胞中翻译成蛋白质抗原来发挥免疫刺激作用,诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答,从而起到保护作用。30年前DNA疫苗诞生时曾是疫苗界的掌上明珠,在日内瓦召开的国际专题会议上被定名为“核酸疫苗”,并被称为继病原体疫苗和重组蛋白疫苗之后的“第三代疫苗”以及“第三次疫苗革命”。

UCHL1调控NF-κB信号通路在单核细胞驯化免疫中的作用

目的探究去泛素化酶在单核细胞驯化免疫中的作用及机制。方法Q-PCR检测单核细胞驯化免疫中去泛素化酶相关基因的表达情况;ELISA法检测去泛素化酶对驯化的单核细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响;双荧光素酶报告基因检测系统测定去泛素化酶对NF-κB信号通路的影响。双荧光素酶报告基因检测系统测定:UCHL1对NF-κB信号通路的影响、UCHL1与NF-κB信号通路关键信号分子之间的作用及UCHL1影响NF-κB信号通路所依赖的酶活性;ELISA法检测UCHL1对单核细胞驯化作用中TNF-α分泌水平的影响。结果去泛素化酶USP2、UCHL1、OTUB2和OTUD4在单核细胞驯化免疫中的表达量明显升高;去泛素化酶抑制剂可明显抑制驯化单核细胞中TNF-α的分泌水平;USP2、UCHL1、OTUB2、PSMD14等可明显激活NF-κB信号通路,通过上述实验筛选出对NF-κB影响最为明显的UCHL1进行后续研究。UCHL1的表达明显影响NF-κB信号通路的激活;UCHL1的表达促进了由IκB-α、IKK-α或IKK-β介导的NF-κB的激活;UCHL1主要通过其泛素水解酶活性调控NF-κB信号通路;UCHL1抑制剂可明显减弱单核细胞的驯化作用。结论自身免疫病中免疫复合物可以驯化单核细胞增强其敏感性,这种作用可通过UCHL1调节NF-κB信号通路的激活实现。

钙网蛋白与卵清白蛋白融合蛋白的纯化及其生物学功能

为原核表达纯化钙网蛋白(calreticulin,CRT)分子与模型抗原鸡卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)片段的融合蛋白,并初步探究其生物学活性。现通过重叠PCR方法人工构建CRT-peptide复合物OVA_(161-276)-CRT_(39-272)载体,在基因工程菌中诱导表达后,通过Ni^(2+)亲和层析的方法纯化出目的蛋白,并考察融合蛋白对树突状细胞功能的影响,初步探究其生物功能。结果显示,正确构建好载体且所纯化融合蛋白纯度超过95%,融合蛋白相对于作为对照的OVA片段能促进树突状细胞的成熟和细胞因子的释放。OVA_(161-276)-CRT_(39-272)融合蛋白具有一定的生物学活性,为下一步探究奠定基础。

稳定表达人FcγRⅡA的HEK 293T细胞系的建立及其功能鉴定

构建稳定表达FcγRⅡA(CD32a)的人胚肾293T细胞系及其相应的对照细胞系FcγRⅡB(CD32b),FcγRⅡA(Y288F/Y304F)[(CD32a(Y288F/Y304F)],作为进一步研究FcγRⅡA介导的信号通路的基础。首先,从人外周血单核细胞cDNA中扩增CD32a和CD32b,并构建pMSCVegfp-CD32a及pMSCVegfp-CD32b逆转录病毒表达载体。另外,将构建成功的pMSCVegfpCD32a288和304位点的酪氨酸(Y)突变成苯丙氨酸(F),得到pMSCVegfp-CD32a(Y288F/Y304F)表达载体。构建成功的逆转录病毒载体经酶切、测序鉴定后,与pcl-amp辅助载体共同转染HEK 293T细胞进行病毒包装。病毒感染HEK 293T细胞后通过流式分选得到稳定表达CD32a、CD32b、CD32a(Y288F/Y304F)的HEK 293T细胞系,流式检测各细胞株膜表面的CD32分子表达及白色念珠菌考察各细胞株抗体依赖的内吞作用。结果表明:稳定表达CD32a、CD32b、CD32a(Y288F/Y304F)的HEK293T细胞纯度在98%以上,并且膜表面均可检测到CD32的表达。吞噬实验结果表明,HEK 293T-CD32a细胞呈现对白色念珠菌的吞噬作用,而HEK 293T-CD32b、HEK 293T-CD32a(Y288F/Y304F)无吞噬作用。

糖结构特异性免疫识别及应答研究进展

多糖在自然界广泛存在于动物、植物以及微生物中,是免疫系统的主要识别对象之一。病原体表面的多糖分子能够被固有免疫的模式识别受体识别,启动抗感染免疫应答。多糖及糖蛋白的寡糖修饰成分能够被T细胞直接或间接识别,从而激活适应性免疫应答。在自身免疫病、肿瘤等免疫相关疾病机制研究中也发现糖蛋白的糖基化异常促进了疾病的发生和发展,并且糖结构及其特异性抗体可以作为免疫相关疾病更早更有效的诊断标志物。如今,免疫系统对多糖以及蛋白质分子糖修饰基团的免疫识别与应答研究已成为免疫学和糖生物学交叉的一个新学科,即糖免疫生物学。然而由于糖结构的特异性鉴别和研究手段相对匮乏,目前对于多糖以及寡糖链的功能探究尚不能像基因、蛋白质功能研究那样深入。随着对多糖与寡糖结构及其功能研究技术的进步,糖生物学的研究已经进入了糖组学的时代。质谱技术的创新为寡糖结构的解析提供了新手段,糖芯片技术的发展为糖免疫生物学研究提供了高通量研究平台。随着糖相关技术的不断革新,人类对糖免疫生物学的研究必将越来越完善。