孔雀石绿单克隆抗体的制备及其鉴定

用人工合成的无色孔雀石绿-兔血清白蛋白(LMG-RSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选抗无色孔雀石绿的单抗,单抗经纯化后对其特异性和灵敏性进行了鉴定,探讨了建立孔雀石绿的免疫学检测方法。结果显示,经细胞融合和筛选得到了1株分泌抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5E9。经鉴定,该杂交瘤细胞的染色体数为98.82±5.6,间接ELISA检测小鼠腹水的抗体效价达1.3×105,该细胞连续培养10代以上,生物学性状稳定,间接竞争ELISA(ciELISA)结果显示,无色孔雀石绿50%抑制的质量浓度为18.5μg/L,除孔雀石绿外,与其他类似结构和相关类型的药物没有交叉反应,表明该单抗用于孔雀石绿的检测有较大的应用价值。

孔雀石绿毒性及其检测研究进展

孔雀石绿作为药物和染料被广泛用于水产养殖、食品、医疗和纺织业。近年发现其有致癌、致突变、致畸、使染色体断裂和呼吸系统毒性;组织病理学研究表明,其对多器官组织有损伤;孔雀石绿及其主要代谢产物无色孔雀石绿主要残留于鱼的血清、肝脏、肾脏、肌肉及其它组织。建立了多种残留检测的方法,检测最低限在1μg/kg左右。

硒拮抗镉毒性的研究

综述了硒拮抗镉的两类主要的机理、硒对镉分布与代谢的影响以及硒拮抗镉致机体各系统损伤的研究进展。

护仔康2号对僵猪生长的影响

选取 5 0日龄以上 ,体重在 8kg以内的仔猪 2 4头 ,随机分为 2组。对照组喂小猪料 ,试验组另外添加 2 %护仔康2号。饲喂 17d后 ,对照组死亡 7头 ,每头日增重仅 0 .0 4 7kg,发病率和死亡率分别为 83%和 5 8% ;试验组仅有个别发病 ,无死亡 ,且每头日增重达 0 .193kg ,料肉比为 2 .0 7∶1。每头日增重试验组是对照组的 32 2 %。从而说明护仔康

护仔康2号对僵猪生长的影响

选取50日龄以上,体重在8kg以内的仔猪24头,随机分为2组。对照组喂小猪料,实验组另外添加2%护仔康2号。饲喂17d后,对照组死亡7头,每头日增重仅0.047kg,发病率和死亡率分别为83%和58%;实验组仅有个别发病,无死亡,且每头日增重达0.193kg,料肉比为2.07∶1。每头日增重实验组是对照组的322%。

后备母猪初情日龄、发情次数和初配日龄与繁殖性能的关系

以长大二元杂后备母猪为研究对象,应用SPSS 19.0软件的单因素方差分析对8 875头后备母猪的前3胎数据进行分析,以探索初情日龄、初配前发情次数和初配日龄与繁殖性能的关系。研究结果表明,后备母猪初情日龄早于195 d的,其前3胎窝产总仔数分别为12.30头、12.13头和12.86头,为各组中的最高;初配前有3次或以上情期的,其前3胎窝产健仔数分别为10.57头、10.59头和11.10头,均极显著高于仅有1次发情期的（P〈0.01）,但与有2次发情期的差异不显著（P〉0.05）;后备母猪初配日龄分别为225~255 d、255~270 d和270~285 d的,其第1胎窝产健仔数依次为10.47头、10.48头和10.50头,均极显著高于初配日龄大于285 d的（P〈0.01）。因此,长大二元杂后备母猪初情日龄应控制在195 d前,初次配种日龄在225~285 d内,并有2次或以上情期经历为适宜。

杜仲提取物的亚慢性毒理学研究

目的研究不同剂量的杜仲提取物水溶液对小鼠亚慢性毒性作用,为临床应用提供依据。方法给实验小鼠灌服不同剂量的杜仲提取物水溶液。在实验中、末期停药后24 h,分别取血测定血液学、血液生化和主要脏器指标,并作病理切片。结果灌胃中、低剂量(2.06 g/kg,0.69 g/kg)的杜仲提取物水溶液,能够提高小鼠血红蛋白含量和红细胞数(P<0.01),对白细胞分类计数无影响,同时能够提高小鼠体重、总蛋白及白蛋白含量(P<0.01),对脾脏、肝脏、心脏、肺脏、肾、性器官指数及血清酶活性无影响(P>0.05)。结论杜仲提取物对受试动物未见有明显毒性作用。

包衣壁材对赖氨酸保护效果的影响

为了评价包衣壁材对赖氨酸保护效果的影响,试验分别以壁材与赖氨酸之比为25∶75的包被比例,用前期筛选的乙基纤维素、乙酸纤维素、单硬脂酸甘油酯、血粉、脂肪粉等5种材料对L-赖氨酸硫酸盐进行物理包被,制得保护性赖氨酸制品,测定了保护性赖氨酸制品的人工唾液消失率、山羊瘤胃48小时降解率及小肠消失率。结果表明:脂肪粉是赖氨酸最好的包衣壁材,不仅人工唾液及瘤胃稳定性好,而且在真胃及小肠中易于释放和吸收;乙基纤维素也可对赖氨酸进行有效保护,但小肠消失率较低,包被时应注意包衣厚度,防止由于包被过度而影响小肠释放与吸收。

杜仲提取物的急性毒性试验研究

研究了杜仲提取物的急性毒性,为临床应用提供依据。给小鼠灌服不同浓度杜仲提取物水溶液,测定小鼠灌胃最大耐受量(MTD);采用改良寇氏法,测定小鼠腹腔注射半数致死量(LD50)。结果表明:小鼠灌胃MTD为18.52 g/kg,其最大耐受倍数为124;腹腔注射LD50为(2.57±0.15)g/kg。应用杜仲提取物有较大的安全性。

弓形虫两种保种方法的试验

目的寻求一个简便、适宜的弓形虫保种方法。方法采用不同温度的冷冻保存法和细胞培养保存法对弓形虫保存进行了试验研究,为深入研究弓形虫提供保证。结果弓形虫在液氮(-196℃)、-70℃能长期保存,4℃能保存14 d。通过细胞培养能获得大量的弓形虫滋养体,对培养细胞的选择性不强。结论两种保种方法保存后弓形虫毒力不变。

木板与混凝土牛床对奶牛肢蹄的影响研究

本研究比较了木板地面和混凝土地面的牛床对奶牛肢蹄损伤性疾病的发病情况,结果显示:木板地面和混凝土地面牛床的发病率分别为53.18%,66.99%,木板地面的发病率显著低于混凝土地面(P<0.05),且在低气温季节,混凝土地面发病率极显著高于木板地面(P<0.01),而在高气温季节则相反(P<0.05)。腕(跗)部发病率,木板地面低于混凝土地面(P<0.05),分别为22.22%,34.06%。细菌感染率木板地面高于混凝土地面,差异显著(P<0.05)。指(趾)部和蹄部发病率、患病淘汰率,木板均高于混凝土地面,但差异不显著(P>0.05)。结果说明,不同气温(季节)条件下,木板与混凝土地面对奶牛肢蹄损伤差异较大,但总的来说,木板地面要优于混凝土地面。

高、低脂系肉鸡肌肉品质的比较

本文旨在比较分析高、低脂系肉鸡肌肉品质的差异。以东北农业大学培育的高、低脂系第20世代肉鸡为试验动物,采用常规肉品质检测方法,测定肌肉的物理性状、化学性状、组织学特性以及风味物质,并比较这些性状在两系间的差异。结果表明:1)物理性状方面,高脂系肉鸡胸肌的蒸煮损失和滴水损失显著或极显著高于低脂系肉鸡(P<0.05或P<0.01),而胸肌的肉色亮度值(45 min)和黄度值(45 min和24 h)、pH_(24 h)、失水率和剪切力显著或极显著低于低脂系肉鸡(P<0.05或P<0.01);高脂系肉鸡腿肌的pH_(24 h)、滴水损失、蒸煮损失和剪切力极显著高于低脂系肉鸡(P<0.01),而腿肌的肉色亮度值(45 min)和黄度值(45 min和24 h)、pH_(45 min)和失水率显著或极显著低于低脂系肉鸡(P<0.05或P<0.01)。2)化学性状方面,高脂系肉鸡胸肌和腿肌的水分和粗蛋白质含量显著或极显著高于低脂系肉鸡(P<0.05或P<0.01),而粗脂肪含量极显著低于低脂系肉鸡(P<0.01)。3)组织学特性方面,高脂系肉鸡胸肌的肌纤维直径显著高于低脂系肉鸡(P<0.05),腿肌的肌纤维密度极显著高于低脂系肉鸡(P<0.01)。4)风味物质方面,高脂系肉鸡胸肌的甜鲜味氨基酸、必需氨基酸和总氨基酸含量显著或极显著高于低脂系肉鸡(P<0.05或P<0.01);高脂系肉鸡胸肌和腿肌的多不饱和脂肪酸和必需脂肪酸含量极显著低于低脂系肉鸡(P<0.01)。总体而言,高、低脂系肉鸡肌肉的理化性状、组织学特性和风味物质含量差异显著,说明长期对腹脂性状的双向选择会在一定程度上影响肉鸡的肌肉品质。

过瘤胃养分包被壁材人工唾液、瘤胃稳定性及小肠释放性能的研究

为探讨不同包被壁材在瘤胃中的稳定性及小肠释放性能,试验选用4只装有永久性瘤胃瘘管及十二指肠前端瘘管的健康崂山奶山羊去势公羊,分别测定中性羧甲基纤维素钠、单硬脂酸甘油酯、乙基纤维素、海藻酸钠、酸性羧甲基纤维素钠、乙酸纤维素、脂肪粉、聚乙二醇和血粉等9种包被壁材的人工唾液12 h消失率、瘤胃48 h降解率及小肠消失率。结果表明:脂肪粉不仅人工唾液及瘤胃降解率低,而且小肠消失率高,是最为理想的过瘤胃养分包被壁材;单硬脂酸甘油脂和血粉在人工唾液及瘤胃稳定性略差,用作包被壁材时应适当加大包被比例或增加包衣厚度;乙基纤维素和乙酸纤维素瘤胃降解率和小肠消失率均较低,包被时应注意包衣厚度,防止由于包被过度而影响养分释放与吸收。

用于检测孔雀石绿的全抗原的合成与鉴定

采用重氮化法,将半抗原副品红(Pararosaniline,PA)分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,反应得到免疫抗原和包被抗原,其偶联最佳结合比分别为8.8∶1,12.7∶1,6.9∶1,经紫外扫描光谱和蛋白电泳鉴定得到全抗原。用制备的抗原乳化后免疫小鼠获得了效价较高的多克隆抗体。为进一步制备抗孔雀石绿单克隆抗体打下基础。

樱桃谷鸭白介素18基因的克隆与原核表达

从鸡新城疫病毒刺激的鸭脾脏淋巴细胞培养液中提取基因组RNA,采用RT-PCR方法扩增鸭IL-18基因,插入pMD18-T载体,进行序列测定与分析。将成熟鸭IL-18基因亚克隆到表达载体PBCX中,并转化入大肠杆菌E.coliBL21进行表达。测序结果表明,该基因由603个核苷酸组成,包含一个完整阅读框,共编码201个氨基酸。表达载体经IPTG诱导表达出相对分子量约为59KD的融合蛋白。

猪白细胞介素2基因的克隆及腺病毒表达载体的构建

根据GenBank中收录的猪白细胞介素2(pIL-2)基因序列,设计1对特异性引物。运用RT-PCR技术从刀豆素(Con A)诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到pIL-2基因,并将其克隆至pGEM-T Easy载体上。核苷酸测序结果显示,获得的基因序列全长493 bp,含465 bp的开放阅读框,编码154个氨基酸,与已知pIL-2核苷酸序列和氨基酸序列的同源性都高达100%。将克隆的pIL-2基因编码阅读框亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV,电转化含腺病毒基因组(pAdEasy-1)的大肠埃希菌细胞BJ5183-AD-1,成功获得了重组腺病毒DNA,将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD-293细胞,经过病毒基因组的PCR鉴定和转录水平的RT-PCR鉴定,初步表明,获得了表达pIL-2的重组腺病毒。

三种猪Ⅰ型干扰素基因的克隆与序列分析

根据GenBank中收录的三种猪I型干扰素(porcine interferon,pIFN)基因序列,设计了3对特异性引物。运用RT-PCR技术从长白猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到了三种猪干扰素基因,并将其克隆至pGEM-TEasy载体上。序列测定结果显示,获得的猪干扰素α1基因序列全长570bp,编码189个氨基酸,获得的猪干扰素α2基因序列全长540bp,编码179个氨基酸,获得的猪干扰素β基因序列全长563bp,编码186个氨基酸。三种猪I型干扰素基因与已知猪I型干扰素核苷酸序列和氨基酸序列的相似性最高可达99%～100%。