儿童原发性肾病综合征尿源干细胞生物学特征研究

目的:探讨正常儿童尿源干细胞(urine-derived stem cell,USCs)与原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)患儿尿源干细胞(p-USCs)生物学特征差异。方法:收集正常儿童及PNS患儿清洁中段尿液,分离培养USCs及p-USCs,观察细胞形态差异;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡及干细胞表面标志物(CD24、CD29、CD34、CD73、CD90、CD105、CD146);免疫荧光及Western blot检测细胞肾系标志物(Pax2)表达;Western blot检测细胞自噬水平。结果:PNS患儿尿液中存在2种形态p-USCs:p-USCsⅠ及p-USCsⅡ。p-USCsⅠ形态与正常USCs相似:米粒样、胞体较小、排列紧密。p-USCsⅡ胞体可见少量空泡,胞体较大,散在排列。USCs、p-USCsⅠ及p-USCsⅡ最大传代次数分别为11代、8代及5代。与USCs比较,p-USCs增殖能力减弱,且p-USCsⅡ减弱更加明显(F=217.300,P=0.000);p-USCs细胞凋亡无明显差异;p-USCs干细胞表面标志物及周细胞表面标志物表达无统计学差异;p-USCs肾系标志物表达水平下降,且p-USCsⅡ下降更明显(F=26.930,P=0.001);p-USCs自噬水平下降,差异有统计学意义(F=15.060,P=0.000)。结论:PNS患儿体内存在2种不同形态尿源干细胞:pUSCsⅠ及p-USCsⅡ。与USCs相比,p-USCs形态有差异、自我更新能力降低、肾系标志物表达下降、自噬水平减弱。

一种基于全波长UV建立HPLC指纹图谱的质量控制模式:以不同等级的玄参为例

HPLC-UV指纹图谱是目前《中国药典》用于中药材质量控制的重要手段之一。然而,关于紫外(UV)具体的波段选择存在一定主观性,不能较好地表征中药内在的质量差异。因此,该研究以不同等级的玄参为研究对象,提出一种新的基于紫外全波长扫描图谱建立高效液相指纹图谱的质量控制模式。首先,采集不同等级的玄参样品,利用紫外光谱(200~400 nm)建立所有样品的紫外全波长吸收光谱。通过光谱数据的预处理和主成分分析(principal component analysis,PCA)以及偏最小二乘法判别分析(partial least squares discrimination analysis,PLS-DA)等多元统计分析方法建立差异分析模式,得到251 nm的紫外波段可能是区分不同等级玄参质量差异的主要贡献的波段。进一步,利用该波段建立其HPLC指纹图谱,通过多元统计方法分析可得,基于差异紫外波段筛选得到的HPLC指纹图谱较原来的UV指纹图谱有更显著的分类趋势,可用于判别不同等级的玄参样品,能够较好的体现各等级之间的差异性。该研究建立的方法对于中药特异性HPLC指纹图谱的建立及其质量控制具有较大的指导和参考意义。