基于中心法则探究碱基突变影响CTPS细胞蛇组装的综合实验

CTPS细胞蛇是一种无膜细胞器,在细胞中以丝状或环状形式存在.将含有RFP标记的CTPS过表达载体转入Hela细胞中,荧光显微镜下观察红色荧光蛋白形成的丝状或环状结构.通过定点突变关键氨基酸,观察CTPS细胞蛇组装的效果,帮助学生理解分子生物学“中心法则”中DNA碱基序列决定蛋白质一级结构进而决定蛋白质的高级结构,同时激发学生的学习兴趣,培养学生的科学思维,提高综合素质.

紫云英苷对慢性睡眠剥夺小鼠肝脏氧化损伤的修复作用

本试验旨在研究紫云英苷对慢性睡眠剥夺小鼠肝脏氧化损伤的修复作用。将36只4周龄无特定病原体(SPF)级C57BL/6J雄性小鼠随机分成3组,分别为正常睡眠组(DMSO组)、睡眠剥夺组(SD组)、睡眠剥夺+紫云英苷组(SD+AG组),每组3个重复,每个重复4只。DMSO组不进行慢性睡眠剥夺,其余2组利用改良多平台睡眠剥夺法对其连续睡眠剥夺21 d。每日进行睡眠剥夺前,DMSO组和SD组灌胃0.04 mL生理盐水配制的0.1%DMSO溶液,SD+AG组灌胃等量由0.1%DMSO溶液溶解的20 mg/kg BW紫云英苷。每日13:00测量各组小鼠的摄食量,观察小鼠状态。末次灌胃后禁水禁食,断颈法处死小鼠,取其心脏、肝脏、肾脏和脑,称其重量,并检测小鼠肝脏中总抗氧化能力(T-AOC)与谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)含量,同时检测核转录相关因子2(Nrf2)基因及其下游基因NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)和谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基(GCLM)表达的变化。结果显示:与DMSO组相比,SD组小鼠的肝脏AKP和ALT活性分别升高了112.03%(P<0.05)和32.96%(P<0.05),T-AOC、GSH含量和GSH-Px活性分别降低了8.33%(P<0.05)、39.79%(P<0.001)和9.00%(P<0.01),Nrf2、NQO1、GCLC和GCLM mRNA相对表达量分别降低了19.00%(P>0.05)、8.91%(P>0.05)、13.00%(P>0.05)和13.00%(P>0.05);SD+AG组小鼠肝脏AKP活性降低了45.11%(P<0.01),ALT活性升高了14.88%(P<0.001),T-AOC、GSH含量和GSH-Px活性分别升高了47.22%(P<0.05)、70.38%(P<0.01)和36.07%(P<0.001),Nrf2、NQO1和GCLC mRNA相对表达量分别升高了23.00%(P<0.001)、61.39%(P<0.01)和85.00%(P<0.01),GCLM mRNA相对表达量降低了19.00%(P<0.05)。与SD组相比,灌胃20 mg/kg BW紫云英苷的SD+AG组小鼠的脑系数显著升高(P<0.05),肝脏系数显著下降(P<0.05),同时肝脏AKP和ALT活性分别降低了74.11%(P<0.001)和13.60%(P<0.05),T-AOC、GSH含量和GSH-Px活性分别升高了60.61%(P<0.05)、182.99%(P<0.001)和49.53%(P<0.001),Nrf2、NQO1和GCLC mRNA相对表达量分别提高了51.85%(P<0.01)、77.17%(P<0.001)和112.64%(P<0.001),而GCLM mRNA相对表达量下降了7.03%(P>0.05)。综上可知,紫云英苷可上调肝脏中Nrf2基因及其下游基因NQO1、GCLC和GCLM的表达,修复慢性睡眠剥夺对小鼠肝脏造成的氧化损伤。

转录因子SIX2研究进展

SIX2是SIX转录因子家族的成员,对多种组织的发育具有重要的作用.近年来的研究发现,SIX2在肾脏早期发育中调节细胞的增殖和凋亡,保持后肾间充质祖细胞处于未分化状态,从而实现肾脏细胞的自我更新.同时,SIX2在心脏、腭、颅面骨等组织器官发育中也发挥着调节性作用.此外,在肿瘤及癌症研究方面,SIX2被证明在参与肿瘤的形成过程、调控肿瘤细胞干性方面发挥作用.总结了SIX2基因在组织器官发育及相关疾病、癌细胞干性、神经系统发育等方面的最新研究进展,为该基因和家族的深入研究提供了新的思路.

小鼠肌肉损伤修复不同时间内miR-206及其靶基因PAX7的变化规律

为研究小鼠肌肉损伤修复不同时间内miR-206及其靶基因PAX7的变化规律,以雄性8周龄昆明鼠为实验对象,利用盐酸布比卡因注射小鼠胫骨前肌制备肌肉损伤及修复模型,通过qRT-PCR技术检测肌肉组织中PAX7 mRNA和miR-206表达,利用Western-blot技术检测PAX7蛋白质表达变化水平.结果表明,与对照组相比,注射盐酸布比卡因后,在修复4~8 h小鼠肌肉组织中,miR-206表达逐渐降低.随着时间的延长,在修复24~72 h范围内,miR-206表达量逐渐增高.生物信息学预测发现,PAX7是miR-206调控的靶基因.检测小鼠肌肉损伤修复过程中PAX7表达发现,在肌肉修复4~8 h PAX7基因表达水平逐渐升高;而在修复24~72 h范围内其表达水平显著下降.由此可见,在小鼠肌肉修复过程中,PAX7基因表达先升高,可以满足损伤修复时骨骼肌卫星细胞的激活及增殖所需,随着修复时间的延长,miR-206的高表达可加快肌肉修复进程.研究结果可为miR-206和PAX7在肌肉损伤修复中的作用提供实验基础.

CRISPR/Cas9基因编辑技术在C2C12细胞中的研究进展

Cas9蛋白(CRISPR相关蛋白9)源自Ⅱ型CRISPR(簇状有规律间隔的短回文重复序列)细菌免疫系统,其正在成为在各种生物体中工程基因组的强大工具.自该技术创立以来,就被广泛用于将供体DNA靶向插入动物基因组.在C2C12细胞中,CRISPR/Cas9系统参与许多方面研究,包括基因特异性敲除/敲入、基因突变载体的构建以及分子作用机制探索.通过阐述C2C12细胞基因编辑方面的研究进展,对CRISPR/Cas9系统在C2C12细胞中基因编辑方面的应用进行了综述,为各种骨骼肌增殖分化研究提供参考.

转录因子SIX2基因对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响

目的:研究SIX2基因对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响。方法:以牛骨骼肌卫星细胞为实验材料,采用实时定量PCR法检测增殖24 h、48 h、72 h时牛骨骼肌卫星细胞中SIX2基因的表达量。通过同源重组构建SIX2基因过表达载体,将SIX2基因过表达质粒和对照组空质粒转染至牛骨骼肌卫星细胞中,每组3个复孔。分别在转染细胞24 h、48 h、72 h时采用MTT法检测细胞活力;转染细胞48 h时,采用流式细胞术检测细胞周期、实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞增殖标志基因的表达。结果:随着牛骨骼肌卫星细胞增殖,SIX2 mRNA表达升高;与对照组相比,SIX2基因过表达质粒组的SIX2 mRNA和蛋白表达量分别升高了18和2.6倍(P<0.01)细胞活力增加(P<0.01),G1细胞比例降低了24.6%,S期和G2期细胞比例分别升高了20.3%、4.31%(P<0.01),Pax7基因mRNA和蛋白的表达量分别升高了15.84和1.22倍,增殖标志性基因PCNA、CCNB1 mRNA和蛋白的表达量分别升高了4.82、2.23和1.55、1.46倍(P<0.01)。结论:过表达SIX2基因促进牛骨骼肌卫星细胞增殖。

转录调节因子IFRD1基因研究进展

干扰素相关发育调节因子1(interferon-related developmental regulator 1,IFRD1)基因编码一种与干扰素相关的蛋白质。在胚胎发育和组织再生过程中,该蛋白质可能作为一种转录共激活因子/抑制因子控制特定细胞类型的生长和分化。IFRD1基因在动物的肌肉发育、脂肪形成及小鼠肠道发育中发挥重要作用,为改善肉类品质提供了理论基础,同时也与其他系统发育及疾病发生相关。文章对IFRD1基因的结构特点、调控组织发育和疾病发生中的功能及其在畜禽方面的研究进展进行了综述,以期为该家族的后续研究提供新思路。