逍遥散降低情志应激诱导的乳腺癌“易感性”的作用机制研究

目的:从巨噬细胞吞噬功能角度探讨逍遥散缓解情志应激诱导的乳腺癌“易感性”的作用机制。方法:将20只小鼠采用完全随机方法分为对照组、模型组、低剂量逍遥散组、高剂量逍遥散组,每组5只。小鼠连续28 d给予拘束应激或低、高剂量的逍遥散(3.25 g/kg,6.50 g/kg),在第7天皮下接种4T1小鼠乳腺癌细胞建立小鼠荷瘤模型,记录小鼠的瘤径、瘤重以及肿瘤拍照。小鼠取材后通过高效液相-紫外分光法检测血浆中皮质酮的含量;免疫组织化学方法观察肿瘤组织中巨噬细胞吞噬现象;采用蛋白质印迹法、实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫荧光技术检测肿瘤组织中“吃我”信号受体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP1)、“不吃我”信号受体信号调节蛋白α(SIRPα)和微RNA(miRNA)的表达情况。结果:与模型组比较,低、高剂量逍遥散组显著缓解应激诱导的乳腺癌“易感性”,抑制肿瘤组织中巨噬细胞的吞噬功能,其作用与促进巨噬细胞LRP1的蛋白和基因表达水平,抑制SIRPα蛋白表达有关(P<0.05);逍遥散对巨噬细胞的调节作用,与增加miRNA-4259/6680-5p/7847-3p表达有关(P<0.05)。结论:逍遥散降低情志应激诱导的乳腺癌“易感性”,其作用机制与缓解LRP1-SIRPα信号紊乱并促进巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用有关。

UPLC指纹图谱结合化学计量学的白花蛇舌草真伪鉴别研究

目的:建立白花蛇舌草及其伪品水线草的UPLC指纹图谱,结合化学计量学,进行真伪鉴别。方法:建立白花蛇舌草和水线草的UPLC指纹图谱,对主要色谱峰进行化学指认及快速检识,利用两者化学成分差异结合化学计量学分析,开展真伪鉴别。结果:分别建立了两者UPLC指纹图谱方法并评价了多批次的相似度;白花蛇舌草22个共有峰中的10个、水线草16个共有峰中的5个及4个非共有峰得到了指认或检识;主成分分析(PCA)可将真品、伪品分为两组;而偏最小二乘法分析(OPLS-DA)显示车叶草酸甲酯等5个色谱峰是分组的主要原因;白花蛇舌草中的(E)-6-O-阿魏酰鸡屎藤次苷甲酯、(Z)-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯,水线草中的槲皮素-3-O-桑布双糖苷可作为两者的3个特征差异峰用于白花蛇舌草真伪鉴别。结论:将UPLC指纹图谱与化学计量学方法相结合,可用于白花蛇舌草真伪鉴别,从而为提高白花蛇舌草整体质量控制方法提供参考。

超高效液相色谱法同时测定肿节风中6个成分的含量

建立了同时测定肿节风中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸、异嗪皮啶6个成分含量的超高效液相色谱方法。采用Waters Acquity UPLC BEH C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm)分离,以乙腈-水(各含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^(-1),检测波长330 nm,柱温35℃;以异嗪皮啶为参照物,计算其与其余5种目标物的相对校正因子,并考察了不同色谱仪、色谱柱、流动相、流速、柱温对相对校正因子重现性的影响;通过相对校正因子计算各成分的含量,实现一测多评,同时采用外标法测定肿节风中各成分的量,并对一测多评计算值与外标法实测值进行配对t检验。肿节风中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸、异嗪皮啶分别在0.522 0~26.09,1.482~74.13,0.591 0~29.49,0.632 5~31.29,2.612~130.5,0.970 4~48.73μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r≥0.999 7),仪器精密度、方法重复性、样品稳定性的相对标准偏差(RSD)均不大于1.9%,平均加标回收率为98.6%~101.5%,RSD(n=6)不大于1.9%。所建立的相对校正因子重现性良好,外标法实测值与一测多评法计算值无显著性差异(P>0.05),均可用于肿节风中5个咖啡酰类和1个香豆素类成分的同时定量测定。

情志应激激活潜伏单纯疱疹病毒1型建立“肝郁化火”动物模型的研究

目的:建立情志应激引起潜伏单纯疱疹病毒1型(HSV-1)复发的“肝郁化火”动物模型。方法:小鼠通过鼻滴感染HSV-14周后,采用定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和空斑法分别检测三叉神经节(TG)中HSV-1潜伏相关转录体(LAT)的表达和病毒颗粒,确定单纯疱疹病毒1型(HSV-1)潜伏模型成功建立。小鼠每天拘束应激12 h,持续应激4 d,采用致细胞病变效应(CPE)法和免疫荧光法检测三叉神经节中HSV-1的gB蛋白的表达,检测情志应激诱导HSV-1激活情况。HSV-1潜伏小鼠于拘束应激前3 d给予“清肝泻火”经典方丹栀逍遥散或清肺热的经典方泻白散,以方测证判定模型的中医证型。采用眼球摘除法对小鼠血浆进行取样,液质色谱-质谱法(LC-MS)检测各激素的含量。用Western Blotting法检测TG中脂质氧化指标4-HNE和固有免疫指标干扰素-β(IFN-β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)蛋白的表达情况。结果:小鼠鼻滴感染HSV-14周后,可在其三叉神经节中建立潜伏,小鼠拘束4 d后可再次激活。与激活组比较,丹栀逍遥散比泻白散更能有效降低HSV-1的激活率,并能减轻复发性眼部感染。激活组以及丹栀逍遥散组的血浆中皮质酮水平都明显增加,2组差异无统计学意义。此外,丹栀逍遥散能降低TG中4-HNE和IFN-β的表达,并能减少HSV-1复发引起的TNF-α和IL-6炎症介质蛋白的表达。结论:丹栀逍遥散可增强固有免疫,降低情志应激介导的HSV-1重激活,并能减轻HSV-1激活复发而引起的氧化应激以及炎症反应。

知母HPLC-UVD-ELSD指纹图谱的建立与多特征成分含量测定的质控方法研究

目的建立知母指纹图谱结合多特征成分含量测定的HPLC-UVD-ELSD分析方法,并应用于多批次市售药材的质量控制。方法采用UltimateTMXB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,4.5μm),检测波长258 nm,ELSD漂移管温度65℃,载气流速1.0 L/min,建立知母指纹图谱与主含黄酮及皂苷类成分含量测定的HPLC-UVD-ELSD分析方法,运用相似度软件结合化学计量学分析对多批次药材进行质量评价并同时完成多特征成分的含量测定。结果建立了高效、快捷的知母HPLC-UVD-ELSD指纹图谱与多特征成分含量测定的方法;18批市售药材的指纹图谱相似度在0.786~0.999,并指认了10个色谱峰。化学计量学结果表明造成18批药材差异较大的成分为新芒果苷、知母皂苷BⅡ和知母皂苷BⅢ;进而建立了同时测定新芒果苷、芒果苷、知母皂苷N、知母皂苷BⅡ和知母皂苷BⅢ5个成分含量的方法,结果表明知母中主含知母皂苷BⅡ。结论建立的指纹图谱结合多特征成分含量测定的HPLC-UVD-ELSD分析方法,更全面而准确地描述了知母药材化学成分整体轮廓与各类特征成分含量贡献,为提升市售知母药材的质量控制方法奠定了基础。

卵清蛋白肽的制备及生物活性研究进展

鸡蛋作为人体补充蛋白质的主要来源之一,在市场中占有较大份额,但蛋类深加工产品的研发及市场拓展尚不十分充分。采用蛋白酶水解食物蛋白制备的小分子肽易吸收,并对人体健康发挥积极作用。近年来,卵清蛋白酶解制备的卵清肽被广泛研究,其生物功能得到逐步揭示,包括抗氧化、降压、抗菌、免疫调节、抗炎、降糖等。卵清肽的深入研究有利于充分利用禽蛋资源,提高其附加值,且卵清肽有望应用于食品、化妆品及医药用品等领域,具有较好的经济效益和社会效益。本文对卵清蛋白肽的制备工艺与生物活性进行概述,旨在为其进一步开发与应用提供有益参考。

磷脂过氧化:神经退行性疾病“易感”的关键因素

大脑的生化完整性对于维持大脑的正常运转十分重要,氧化损伤是导致大脑生化完整性破坏的重要原因之一。大脑富含磷脂和多不饱和脂肪酸,由于高脂质和高耗氧量的特殊性,大脑比其他器官更容易受到氧化应激的影响,氧化应激诱导的磷脂过氧化是大脑的氧化-抗氧化系统失衡的结果。当抗氧化系统不足以抵御氧化损伤时,神经元膜磷脂易受自由基活性氧的攻击发生磷脂过氧化,进而生成多种毒性氧化产物、细胞膜损伤、线粒体障碍和淀粉样蛋白的急剧累积,且神经元的大多数蛋白和核酸可以被过氧化产物共价修饰,导致蛋白原有功能的丧失,进而引发大脑程序性细胞死亡和神经炎症,最终导致神经退行性疾病的易感性的增加。本文在总结磷脂过氧化机制的基础上,重点综述了磷脂过氧化作为关键因素在神经退行性疾病的发生发展中的特点,为靶向干预磷脂过氧化用于预防神经退行性疾病的潜在策略提供理论依据。

甜菜提取物及复方对化学性肝损伤的保护作用研究

目的研究甜菜提取物及甜菜五味子复方对四氯化碳(CCl_(4))化学性肝损伤的保护作用。方法小鼠随机分为正常对照组、CCl_(4)模型组、甜菜提取物低、中、高剂量组(1.5, 3, 6 g·kg^(-1) BW)、甜菜五味子复方组(1.67 g·kg^(-1) BW)和水飞蓟素阳性对照组(150 mg·kg^(-1) BW),各组动物灌胃给药30 d后观察其对四氯化碳肝损伤模型小鼠的保护作用。记录小鼠肝脏外观形态并检测肝指数;试剂盒检测小鼠血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的水平,组织切片HE染色观察小鼠肝脏病理改变;LC-MS检测小鼠血浆中甜菜碱(Betaine)及其代谢物N,N-二甲基甘氨酸(DMG)的水平。机制研究实验中,小鼠随机分为空白对照组、CCl_(4)模型组、甜菜碱500 mg·kg^(-1)给药组,给药与造模方法同上,采用试剂盒检测肝脏中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量,Western blot检测肝脏4-羟基壬烯醛(4-HNE)及15-脂氧合酶(15-LOX)的表达。结果甜菜提取物各剂量和甜菜五味子复方均能显著降低肝损伤小鼠的肝指数,降低血清AST和ALT的水平,缓解小鼠肝脏组织病理改变。复方组小鼠血浆中Betaine和DMG的水平明显高于单纯甜菜提取物组。Betaine给药可提高肝脏GSH的水平,降低小鼠肝脏MDA的含量以及4-HNE和15-LOX的蛋白表达。结论甜菜提取物及甜菜五味子复方对化学性肝损伤均具有保护作用;复方中五味子可促进甜菜碱的吸收,增强甜菜提取物的护肝作用;甜菜碱可能通过降低15-LOX的表达缓解脂质过氧化造成的肝损伤。

卵黄蛋白肽的研究现状与产业化应用

鸡蛋因其丰富的营养成为最受人们欢迎的日常食物之一,蛋白和脂质是其主要的营养成分。近年来,随着社会需求呈高层次化的发展趋势,人们在追求食品营养价值的同时,也十分关注食品的健康功能。因此,酶解技术制备的鸡蛋蛋白肽等鸡蛋深加工产品备受人们关注。卵黄提取磷脂后产生的副产物含有丰富的蛋白资源,但其利用率与附加值不高。很多研究证明卵黄肽具有抗氧化、降血压、骨保护等多种生物活性,在健康领域具有广泛的应用前景。本文对卵黄肽的制备方法、生物活性以及产业化应用进行概述,旨在为卵黄肽的进一步开发与应用提供有益的参考。