乙酰胆碱受体抗体测定对重症肌无力的诊断价值

用双抗体放射免疫分析方法对100例MG患者进行血清AChRab滴度测定,阳性率84％,全身型阳性率为91.4％,抗体滴度范围0.5—111.88×10^(-9)M,全身型患者以第Ⅲ型最高,病情重度者高,有胸腺瘤者最高。抗体对免疫抑制剂敏感。本方法是采用先进放免法,具有微量,灵敏度非常高的优点。

电鳐(Narcine timlei)乙酰胆硷受体的分离纯化

丁氏双鳍电鳐(Narcine timlei)新鲜电器官的匀浆,经冷冻干燥制成冻干粉(每克冻干粉相当于17.5克新鲜电器官)。10克冻干粉的细胞膜碎片用含1%Triton X-100的溶液提取,此悬浮液经100,000g离心,取其上清液对Sepharose-4B-眼镜蛇神经毒素进行亲和吸附。每毫升压缩的亲和胶含有华南眼镜蛇(Naja naja atra)的神经毒素0.25mg。吸附后的亲和凝胶用几种缓冲液洗去非特异性吸附的蛋白,最后用含1M氨基甲酰胆硷的溶液解脱乙酰胆硷受体(AchR)。有含AchR的氨基甲酰胆硷解脱液对含0.02%去氧胆酸钠的磷酸缓冲液充分透析,以除去氨基甲酰胆硷。从10克冻干粉中最后得到约10mg纯化的AchR。 提纯的AchR能与^(131)I-眼镜蛇神经毒素结合,生成的AchR-^(131)I-眼镜蛇神经毒素复合物用Sephadex G-200凝胶过滤分开后,求得其比结合力为4.7nmol/mg蛋白。此种结合能为眼镜蛇神经毒素、d-筒箭毒和十甲鎓所抑制,当这些竞争性抑制剂的浓度为^(131)I-眼镜蛇神经毒素浓度的300倍时,其抑制率分别为88%、48%和55%。提纯的AchR在含有0.1%Triton X-100的聚丙烯酰胺凝胶电泳时,显示单一的区带;乙酰胆硷酯酶活力很低,其比活力仅为0.05OD_(412)/分·mg蛋白。

银环蛇(Bungarus multicinctus)毒柱层析分离及其组份的活性测定和α-银环蛇毒素的纯化

本文报导了用CM-Sephadex C-50分离广东产银环蛇毒,得到十三个蛋白组份。测定了九种酶在这些组份中的分布、五个主要毒性组份的神经肌肉阻断作用和小鼠的LD_(50)。小鸡颈二腹肌神经肌肉阻断作用试验表明组分3及组分6显示突触后膜阻断作用,组份9、组份10及组份11为突触前膜阻断作用。对主要的突触后膜毒素组份3进一步用凝胶过滤和离子交换层析进行纯化,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯一的α-银环蛇毒素。

中华眼镜蛇心脏毒素和磷脂酶A2引起小白鼠骨骼肌损伤的超微结构研究

中华眼镜蛇(Naja naja atra)的三个单一组份:心脏毒素Ⅰ、心脏毒素Ⅱ和磷脂酶A(称简为CTⅠ,CIⅡ和PhA),两个混和组份:CTⅠ-PhA和CTⅡ-PhA,分别注射到小白鼠后肢小腿胫骨前肌内,观察和研究小白鼠骨骼肌损伤的超微结构变化。这三个毒性组份均能造成小白鼠骨骼肌肌纤维的明显损伤和坏死,肌质膜、核膜和线粒体膜损伤,肌丝溶解而形成各种絮状游离坏死小块;肌小管系统消失;线粒体肿胀并形成含有嵴碎片的空泡;肌质网溶解;肌纤维内出现有大量囊泡状结构物。整个肌纤维变成一种含有各种细胞器残骸并由破损肌质膜所包围的低电子密度破损细胞。五个组份所形成的超微结构损伤变化并无显著差异,CTⅠ-PhA或CTⅡ-PhA这两个混合组份比相应的单一组份的损伤似乎更严重些。

丁氏双鳍电鳐(Narcine timlei)电器官烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)某些生化性质的研究

本文报道了丁氏双鳍电鳐(Narcine timlei)电器官烟碱型乙酰胆碱受体蛋白(AChR)的某些生化性质。纯化的AChR经聚丙烯酰胺梯度(4%—30%)凝胶电泳,呈现一个主要蛋白带,经测定,表观分子量为440,000,与^(125)I-α-Bgt-AChR复合物的分子量相一致。等电聚焦电泳测得纯化AChR和^(125)I-α-BgtAChR的等电点(pI)分别为4.9和5.2;经SDS—聚丙烯酰胺梯度(4%—30%)凝胶电泳,纯化的AChR解离成三个主要亚基蛋白带,它们的表观分子量分别为38,000,42,000和66,000,其中前两个亚基的含量很高,约占总数75%。氨基酸组成分析表明,丁氏双鳍电鳐电器官AChR由18种氨基酸组成,(色氨酸未测定),其中酸性氨基酸含量很高,占总数的20%以上,说明纯化的AChR是一个复杂结构的酸性蛋白大分子。

一种分离提纯眼镜蛇(Naja naja atra)神经毒素的简便方法

本文报导了一种分离提纯眼镜蛇神经毒素的简便方法:用pH7.8,0.01M磷酸盐缓冲液平衡的CM-纤维素柱吸附眼镜蛇毒,经平衡缓冲液洗涤后,以含不同NaCl浓度的平衡缓冲液分段洗脱。眼镜蛇神经毒素在用含0.07M NaCl的缓冲液洗脱时被洗脱下来,此组份的洗脱液合并后经70℃选择性热变性处理,冷却后离心除去变性的杂蛋白沉淀,溶液加入三倍体积的冷丙酮,得到含盐的眼镜蛇神经毒素沉淀,用Sephadex G10脱盐后冻干,即可得到纯眼镜蛇神经毒素。此法分离提纯的眼镜蛇神经毒素,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出单一的区带,Sephadex G-50凝胶过滤层析出现单一的、对称的洗脱峰,与抗眼镜蛇毒血清进行免疫扩散时呈现单一的沉淀线。此神经毒素小鼠腹腔注射的LD;为1.1ug/20g体重,当浓度为1.Omg/ml时,A;为1.07。得率约为全毒的6.5%。

重症肌无力患者的乙酰胆硷受体抗体和循环免疫复合物的研究

本文用双抗体放射免疫法研究了重症肌无力(MG)患者血清中乙酰胆硷受体抗体(AchRab)的变化;同时,用牛胶固素酶联免疫吸附试验检测了MG患者的循环免疫复合物(CIC)水平。结果发现:MG患者血清中存在着高滴度的AchRab,全身型MG患者的AchRab滴度高于眼型患者,在全身型MG组中,病情重度患者的AchRab滴度高于中度及轻度患者。对CIC水平的研究发现,MG患者的CIC水平高于正常人,全身型MG患者的CIC水平高于眼型患者,在全身型MG组中,病情重度患者的CIC水平高于中度及轻度患者。本研究还发现MG患者的AchRab滴度与CIC水平之间存在着明显的相关性。

眼镜蛇(Naja naja atra)神经毒素抗体和心脏毒素抗体的亲和层析纯化

用纯化的眼镜蛇神经毒素和心脏毒素分别免疫家兔,得到兔抗神经毒素血清和抗心脏毒素血清。神经毒素和心脏毒素通过其游离氨基固相化在Sepharose4B上,不改变它们的抗原性。用溴化氰活化的Sepharose 4B分别偶联神经毒素和心脏毒素作为亲和吸附剂,从兔抗神经毒素血清、兔抗心脏毒素血清和马抗眼镜蛇毒血清中分别提纯了神经毒素抗体和心脏毒素抗体。这些抗体对眼镜蛇毒进行免疫扩散时都只呈现单一的沉淀线,它们的亲和洗脱都十分类似,提纯的神经毒素抗体和心脏毒素抗体的中和效价比其兔抗毒血清分别提高17.5倍和35倍、比精制马抗眼镜蛇毒血清分别提高50倍和33.3倍。本文还讨论了如何提高抗眼镜蛇毒血清的效价和研制高效抗毒血清途径等问题,这些结果对蛇伤治疗可能是有好处的。