AtSARK关键自磷酸化位点Tyr-350的点突变及其功能分析

本实验室前期在拟南芥中发现了一个可以正向调控叶片衰老的LRR型丝/苏氨酸和酪氨酸双底物特异性类受体蛋白激酶At SARK(Arabidopsis thaliana senescence-associated receptor-like kinase),并且经软件预测和质谱分析发现其有多个自磷酸化位点。本文把其中位于C末端的一个自磷酸化位点Tyr-350分别突变为谷氨酸(E)以模拟磷酸化状态或突变为苯丙氨酸(F)以模拟非磷酸化状态,用诱导型启动子GVG系统来控制点突变的At SARKm的表达,然后以表达水平与正对照GVG:At SARKwt相近的转基因株系为实验对象,分别观察不同点突变对转基因拟南芥成苗和幼苗表型的影响,同时检测一些衰老相关标识基因的表达,从而研究Tyr-350自磷酸化状态变化对At SARK功能的影响。实验结果显示,对Tyr-350位点进行模拟磷酸化点突变会减弱过表达At SARK引起的早衰,而该位点模拟非磷酸化点突变则不会影响At SARK的功能。这些结果暗示着C末端磷酸化可能对At SARK的功能起抑制作用,而Tyr-350是其中一个重要调节位点。

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